◎ 辛雙陽，何天文

（西藏自治區(qū)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所，西藏 拉薩 850000）

霉菌和酵母菌廣泛分布于自然環(huán)境中，它們在食品上可以作為正常菌相的一部分，或者作為空氣傳播性污染物，在不規(guī)范的消毒設(shè)備上也可被發(fā)現(xiàn)。各類食物遭受霉菌和酵母菌的侵襲，常常發(fā)生霉壞變質(zhì)，有些霉菌的有毒代謝產(chǎn)物可能引起各種急性和慢性中毒，特別是有些霉菌毒素具有強烈的致癌性。目前，已知的產(chǎn)毒霉菌有青霉、曲霉和鐮刀霉等，它們在自然界分別較廣，對食品侵襲的機會也較多。因此，對食品加強霉菌的檢驗，在食品衛(wèi)生學上具有重要意義[1]。

筆者所在實驗室參加了中國檢驗檢疫科學研究院測試評價中心組織的食品中霉菌和酵母計數(shù)能力驗證，通過實驗室間比對，來評價參加者的能力，旨在提高微生物實驗室檢驗人員的檢測能力和水平，增強微生物實驗室的競爭力[2-3]。

1 材料與方法

1.1 測試樣品

食品中霉菌和酵母計數(shù)能力驗證樣品數(shù)為2個，樣品編號為20-V001和20-W761，由中國檢驗檢疫科學研究院測試評價中心提供。

1.2 試劑與儀器

9 mL 0.85%生理鹽水（批號200408），孟加拉紅瓊脂（批號080708）、高壓蒸汽滅菌鍋，生化培養(yǎng)箱，90 mm培養(yǎng)皿，電子天平。

1.3 實驗方法

按照《ACAS-PT900（2020）食品中霉菌和酵母計數(shù)能力驗證》參試指導書和《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 霉菌和酵母計數(shù)》（GB 4789.15—2016）[4]的要求進行操作、培養(yǎng)和計數(shù)。

1.3.1 樣品前處理

樣品需要用60 mL稀釋液再水化：樣品開啟后，立即加入5 mL稀釋液進行再水化，待充分溶解后，吸出放入無菌瓶中，再反復用余下的稀釋液清洗西林瓶內(nèi)壁，回收清洗液放入上述無菌瓶中，此溶液即是待測樣品原液（100）。為保證實驗數(shù)據(jù)的可靠性，本次實驗共設(shè)計了6個稀釋梯度。

1.3.2 樣品稀釋

待到樣品原液經(jīng)過一系列處理之后，取出1 mL倒入9 mL生理鹽水試管中，充分混勻，制成10-1的樣品勻液，同法操作制備10倍稀釋樣品勻液，使其達到10-5。

1.3.3 平板計數(shù)法

在無菌條件下，將上述每個稀釋度的樣品勻液分別吸取1 mL于2個無菌平皿內(nèi)，標號為a和b。同時分別取1 mL無菌稀釋液加入2個無菌平皿作空白對照。及時將20～25 mL冷卻至46 ℃的孟加拉紅瓊脂傾注平皿，并轉(zhuǎn)動平皿使其混合均勻。待培養(yǎng)基完全凝固后，置于（28±1）℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察并記錄培養(yǎng)至第5 d的結(jié)果。

1.3.4 計數(shù)與報告

培養(yǎng)結(jié)束后，按照GB 4789.15—2016標準和能力驗證所附的結(jié)果報告單的要求嚴格進行計數(shù)和報告。填好記錄報告單后，校核人員還要仔細查看，防止出現(xiàn)錯誤[5]。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品檢測結(jié)果

中國檢驗檢疫科學研究院測試評價中心的2份測試樣品測試的具體結(jié)果如表1和表2。

表1 樣品Z-V001測試結(jié)果表

表2 樣品Z-W761測試結(jié)果表

2.2 能力驗證結(jié)果

此次檢測結(jié)果樣品20-V001和20-W761霉菌和酵母計數(shù)分別為250 CFU·mL-1和660 CFU·mL-1，評價值Z值分別為0.1和-0.1。通過權(quán)威的驗證組織來評價上述檢測出的相關(guān)結(jié)果，|Z|＜2為滿意結(jié)果，可見，此次評價結(jié)果是滿意的。由此可知，該實驗室具備良好的霉菌和酵母計數(shù)檢驗水平和能力。

2.3 結(jié)果分析

實驗室要做好能力驗證，檢測過程中必須控制好每一個步驟，才能保證檢驗結(jié)果的準確有效。在能力驗證實驗前需要做好前期的準備工作，包括人員安排、培養(yǎng)基和試劑、相關(guān)實驗儀器、試驗方法等。試驗用培養(yǎng)基和試劑要進行監(jiān)控，確保其在有限期內(nèi)。實驗用器材要經(jīng)過嚴格的滅菌，防止這些檢驗器材被污染，影響檢驗結(jié)果。樣品液在制備和稀釋的過程中，要確保試液混合均勻，否則影響計數(shù)結(jié)果。在實驗過程中，為避免環(huán)境因素的影響，實驗要設(shè)置空白對照組，保證實驗結(jié)果的準確性[6]。

3 結(jié)論

本次實驗室能力驗證結(jié)果為滿意，說明筆者所在實驗室測定霉菌和酵母計數(shù)時可以取得準確的結(jié)果，符合相關(guān)的質(zhì)量標準和要求，也能更好地為地方食品安全事業(yè)的健康發(fā)展貢獻應有的力量。實驗室能力驗證是評價實驗室技術(shù)能力的一種手段，可以相對真實可靠地反映出實驗室所具備的檢測能力，同時也有助于提升實驗室的市場競爭力[7]。