寇樸懷，苗建玲

長(zhǎng)安醫(yī)院心血管內(nèi)科，陜西 西安 710016

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化(coronary atherosclerosis，CAS)是指冠狀動(dòng)脈血管發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化病變而引起血管腔狹窄或阻塞的一種慢性炎癥病理變化，造成心肌缺血、缺氧或壞死[1]。近年來(lái)隨著社會(huì)生活水平的改善，其發(fā)病率和死亡率逐年提高，給患者造成極大風(fēng)險(xiǎn)。可溶性CD14 (soluble CD14，sCD14)是一種由365 個(gè)氨基酸殘基組成的糖蛋白，可由單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等直接釋放入血，參與識(shí)別多種產(chǎn)物，激活炎癥瀑布反應(yīng)[2]?？扇苄訡D163 (soluble CD163，sCD163)分子被稱為血紅蛋白清道夫受體，可以特異性識(shí)別血紅蛋白，參與調(diào)控炎癥反應(yīng)，增加粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞集落刺激因子分泌，調(diào)節(jié)抗炎因子和促炎因子的表達(dá)[3]。但兩者與CAS的相關(guān)研究均較少描述，因此本研究通過(guò)檢測(cè)血清sCD14、sCD163 在CAS 中的表達(dá)情況，探討兩者與CAS病變程度及穩(wěn)定性的關(guān)系，以期為CAS的診治提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 前瞻性選取2019 年1 月至2020年10 月經(jīng)長(zhǎng)安醫(yī)院心血管內(nèi)科確診收治的216 例CAS患者作為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影證實(shí)，存在至少一支冠狀動(dòng)脈狹窄≥50%；②經(jīng)詳細(xì)詢問(wèn)病史、體格檢查、相關(guān)化驗(yàn)檢查、心電圖檢查；③患者配合度高，臨床資料完整，患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重肝、腎疾??；②急、慢性感染性疾??；③惡性腫瘤；④心肌病、心肌瓣膜病；⑤長(zhǎng)期服用降脂藥。同期選取在我院體檢的健康人群240例作為對(duì)照組。本研究通過(guò)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》。

1.2 主要試劑與儀器 美國(guó)寶特酶標(biāo)儀(ELx800)購(gòu)于上海奧陸生物科技有限公司；譜標(biāo)立式超低溫冰箱(SPCC)購(gòu)于東莞市譜標(biāo)實(shí)驗(yàn)器材科技有限公司；德國(guó)Hettich 離心機(jī)(ROTOFIX32A)購(gòu)于德祥科技有限公司；明美體視顯微鏡(MZ61)購(gòu)于廣北京金達(dá)陽(yáng)光科技有限公司；MicroDigital 化學(xué)發(fā)光分析儀(Diamond)購(gòu)于北京勤業(yè)永為科技有限公司；恒溫培養(yǎng)箱(CD-11275-ML)購(gòu)于武漢純度生物科技有限公司；Human sCD14酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA) Kit 試劑盒(EYK-DBHZ-13141)購(gòu)于廈門研科生物技術(shù)有限公司；Human sCD163 ELISA Kit 購(gòu)于上海恒斐生物科技有限公司；Human 白細(xì)胞介素-6 (interleukin-6，IL-6) ELISA Kit購(gòu)于杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司。

1.3 觀察指標(biāo)與檢測(cè)方法 所有受試者均在空腹?fàn)顟B(tài)下，肘靜脈抽血行常規(guī)檢查時(shí)，使用含促凝劑的紅頭管留取靜脈血約4 mL，在室溫狀態(tài)下靜置，自凝30 min后，使用離心機(jī)3 000 r/min離心10 min，使用移液管取出上清液，轉(zhuǎn)移到EP管中，記錄編號(hào)和日期，在-80℃冰箱中保存。標(biāo)本一次檢測(cè)完畢，直到檢測(cè)前未經(jīng)反復(fù)凍融。從-80℃冰箱中取出血清標(biāo)本，利用ELISA檢測(cè)sCD14、sCD163、IL-6表達(dá)水平，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.4 研究方法 根據(jù)冠狀動(dòng)脈病變程度將觀察組患者分為不穩(wěn)定型心絞痛(unstable angina pectoris，UAP)組104 例，穩(wěn)定型心絞痛(stable angina pectoris，SAP)組69 例，急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)組43 例，觀察各組Gensini 積分[4]。根據(jù)狹窄程度最嚴(yán)重處積分及病變部分系數(shù)計(jì)算Gensini 積分。狹窄直徑≤25%、25%＜L 狹窄直徑≤50%、50%＜狹窄直徑≤75%、75%＜狹窄直徑≤90%、90%＜狹窄直徑≤99%、完全閉塞分別記為1、2、4、8、16、32分；病變部位的系數(shù)分別為左主干5，左前降支和回旋支近段2.5，左前降支中段1.5，左前降支、回旋支遠(yuǎn)段、后降支、鈍緣支、第一對(duì)角支1，第二對(duì)角支和后側(cè)支0.5，右冠病變均為1。狹窄程度最嚴(yán)重處積分與病變部分系數(shù)乘積即為Gensini積分。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS23.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，有差異時(shí)以SNK-q；檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較；計(jì)數(shù)資料比較采用檢驗(yàn)；采用Pearson 相關(guān)法分析CAS 患者血清sCD14、sCD163 與IL-6 表達(dá)水平的相關(guān)性；繪制受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic，ROC)分析血清sCD14、sCD163 表達(dá)對(duì)CAS 的診斷價(jià)值。均以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組受檢者的一般資料比較 兩組受檢者的年齡、體質(zhì)量指數(shù)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；觀察組患者的總膽固醇水平及男性、吸煙、高血壓、糖尿病比例明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組受檢者的一般資料比較[，例(%)]

表1 兩組受檢者的一般資料比較[，例(%)]

2.2 兩組受檢者的血清sCD14、sCD163、IL-6表達(dá)水平比較 觀察組患者血清sCD14、sCD163、IL-6表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表2 兩組受檢者的血清sCD14、sCD163、IL-6表達(dá)水平比較()

表2 兩組受檢者的血清sCD14、sCD163、IL-6表達(dá)水平比較()

2.3 UAP組、SAP組、AMI組患者的血清sCD14、sCD163、IL-6表達(dá)水平及Gensini積分比較 UAP 組、AMI 組患者血清sCD14、sCD163、IL-6 表達(dá)水平及Gensini 積分明顯高于SAP 組，而AMI 組又明顯高于UAP組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表3。

表3 三組患者的血清sCD14、sCD163、IL-6表達(dá)水平及Gensini積分比較()

表3 三組患者的血清sCD14、sCD163、IL-6表達(dá)水平及Gensini積分比較()

注：與SAP組比較，aP＜0.05；與UAP組比較，bP＜0.05。

2.4 CAS 患者血清sCD14、sCD163 與IL-6 表達(dá)水平的相關(guān)性 經(jīng)Pearson 相關(guān)法分析結(jié)果顯示，CAS患者血清sCD14與sCD163表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.716，P＜0.05)；血清sCD14與IL-6表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.833，P＜0.05)；血清sCD163 與IL-6 表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.606，P＜0.05)，見(jiàn)圖1～3。

圖1 sCD14與sCD163的相關(guān)性

圖2 sCD14與IL-6的相關(guān)性

圖3 sCD163與IL-6的相關(guān)性

2.5 sCD14、sCD163 診斷CAS 的ROC 曲線 以血清sCD14、sCD163水平為檢測(cè)變量繪制ROC曲線，sCD14診斷CAS的ROC曲線下面積為0.904 (95%CI：0.877～0.931)，截?cái)嘀禐?.60 μg/mL，靈敏度為75.0%，特異性為90.4%；sCD163診斷CAS的ROC曲線下面積為0.821(95%CI：0.784～0.859)，截?cái)嘀禐?.76 μg/mL，靈敏度為71.8%，特異性為74.2%，見(jiàn)圖4。

圖4 sCD14、sCD163診斷CAS的ROC曲線

3 討論

CAS是冠心病的主要生理病理基礎(chǔ)，實(shí)際上是一個(gè)長(zhǎng)期形成并進(jìn)展的慢性炎癥反應(yīng)，炎癥貫穿于整個(gè)CAS血栓形成的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，進(jìn)而影響整個(gè)冠狀動(dòng)脈系統(tǒng)。慢性炎癥的快速變化可出現(xiàn)斑塊破裂、血管內(nèi)皮損傷、血栓形成，導(dǎo)致穩(wěn)定型心絞痛向不穩(wěn)定型心絞痛甚至急性心肌梗死轉(zhuǎn)化，提示全身和局部炎癥在動(dòng)脈粥樣硬化形成和進(jìn)展中起著重要作用[5]。在針對(duì)CAS的研究中，許多有關(guān)心血管疾病的炎性遞質(zhì)相繼被報(bào)道，如劉冉等[6]認(rèn)為針對(duì)炎性因子C 反應(yīng)蛋白、白介素17、分泌型磷脂酶A2等特異性療法可使動(dòng)脈粥樣硬化患者受益。經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，IL-6是潛在的促炎細(xì)胞，由活化的血管內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，同樣能上調(diào)粘附分子的表達(dá)，降低斑塊的穩(wěn)定性，與動(dòng)脈粥樣硬化具有明確聯(lián)系，有望被認(rèn)為是評(píng)價(jià)斑塊穩(wěn)定性及預(yù)測(cè)斑塊破裂較理想的生化標(biāo)志物[7]。

sCD14是一種特異性的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志物，屬于細(xì)胞表面糖蛋白家族。有學(xué)者認(rèn)為，急性冠脈綜合征、穩(wěn)定型心絞痛患者血清中sCD14表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，sCD14 作為炎癥分子對(duì)冠狀動(dòng)脈斑塊性質(zhì)具有一定的評(píng)估價(jià)值[8]。余波等[9]發(fā)現(xiàn)sCD14、IL-6表達(dá)相比于非冠心病組，急性心肌梗死患者血清中明顯升高，說(shuō)明急性心肌梗死患者有較強(qiáng)的炎性激活。sCD14活化可釋放白細(xì)胞介素、生長(zhǎng)因子、一氧化氮等粘附分子的表達(dá)，參與炎癥反應(yīng)導(dǎo)致組織器官損傷，其濃度異常對(duì)血液系統(tǒng)疾病具有良好的診斷和預(yù)后價(jià)值；sCD163是作用在M2型巨噬細(xì)胞表面特異性表達(dá)且僅表達(dá)在活化單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的細(xì)胞膜上、具有可溶性的清道夫受體，巨噬細(xì)胞參與人體固有免疫系統(tǒng)的重要組成，能夠吞噬病原微生物，介導(dǎo)炎性反應(yīng)，這使得sCD163 刺激細(xì)胞生長(zhǎng)，促進(jìn)多種炎性因子的釋放[10]。SANDAHL 等[11]認(rèn)為，sCD163 作為巨噬細(xì)胞活化標(biāo)志物和纖維化成分的組合可預(yù)測(cè)肝硬化患者的門脈高壓。SATO 等[12]發(fā)現(xiàn)冠狀動(dòng)脈斑塊內(nèi)出血上調(diào)巨噬細(xì)胞上sCD163 表達(dá)，并與易損斑塊發(fā)展有關(guān)。XIE等[13]認(rèn)為，sCD163在血紅蛋白的代謝中起重要作用，腦出血患者根據(jù)平均sCD163 水平分為高水平和低水平組，與高水平組相比，低水平組的血腫吸收率明顯降低，推測(cè)sCD163影響腦出血后血腫吸收。

為使研究?jī)?nèi)容更加全面，首先對(duì)兩組受檢者的一般資料進(jìn)行對(duì)比，經(jīng)研究結(jié)果表明，CAS 的發(fā)生與年齡、體質(zhì)量指數(shù)無(wú)關(guān)，而與性別、吸煙、高血壓、糖尿病相關(guān)。本研究中觀察組患者血清sCD14、sCD163、IL-6 表達(dá)均高于對(duì)照組，猜測(cè)在CAS 過(guò)程中，機(jī)體為適應(yīng)缺血缺氧環(huán)境發(fā)生炎癥應(yīng)激反應(yīng)，激發(fā)巨噬細(xì)胞分泌，從而導(dǎo)致sCD14、sCD163、IL-6表達(dá)量上升。而SAP組、AMI組患者血清sCD14、sCD163、IL-6表達(dá)水平及Gensini 積分均高于UAP 組，AMI 組患者高于SAP組，因此研究認(rèn)為sCD14、sCD163、IL-6表達(dá)或與CAS 穩(wěn)定性及病變程度相關(guān)。Pearson 法分析結(jié)果顯示，CAS 患者血清sCD14 與sCD163 表達(dá)水平呈正相關(guān)，血清sCD14 與IL-6 表達(dá)水平呈正相關(guān)，血清sCD163 與IL-6 表達(dá)水平呈正相關(guān)，猜測(cè)sCD14、sCD163由巨噬細(xì)胞活化，參與CAS炎性反應(yīng)，并導(dǎo)致IL-6炎性因子激活并大量釋放。此外，ROC曲線顯示，sCD14診斷CAS的截?cái)嘀禐?.60 μg/mL，sCD163截?cái)嘀禐?.76 μg/mL，提示在sCD14表達(dá)高于3.60 μg/mL或sCD163表達(dá)高于0.76 μg/mL時(shí)，CAS發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)較高。

綜上所述，CAS 患者血清sCD14、sCD163 表達(dá)水平均上升，推測(cè)sCD14、sCD163均參與CAS發(fā)生，并與CAS穩(wěn)定性及病變程度有關(guān)，且兩者相關(guān)性也較為密切，但兩者在巨噬細(xì)胞如何表達(dá)，是否存在共同介導(dǎo)物質(zhì)尚不清楚，需待進(jìn)一步研究。由于本研究觀察樣本數(shù)過(guò)小，相關(guān)結(jié)果或存在局限性，未來(lái)仍待深入研究。