王丹丹，韓 君，馮福山，吳建挺，朱立國(guó)

(山東中農(nóng)聯(lián)合生物科技股份有限公司，山東 濟(jì)南 250100)

煙草是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)植物，煙草稅收在我國(guó)財(cái)政收入中占有較大比重[1]。煙草黑脛病(Tobacco black shank)是一種分布于世界范圍內(nèi)的煙草土傳卵菌病害，又名“黑稈瘋、烏頭病、黑根”[2-3]，是由煙草疫霉(Phytophthoraparasiticavar.nicotianae)引起的危害煙草生產(chǎn)的重要病害[4]。近年研究發(fā)現(xiàn)常規(guī)殺菌劑在長(zhǎng)期、高頻率使用下，對(duì)煙草黑脛病防效顯著降低，病原菌已對(duì)其產(chǎn)生不同程度的抗藥性[5]，因此，為保障煙葉生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展和化學(xué)農(nóng)藥減量施用，篩選具有高效綠色且具備新作用機(jī)理的殺菌劑替代當(dāng)前常規(guī)藥劑尤為迫切。

40%氟醚·烯酰懸浮劑，是由氟醚菌酰胺與烯酰嗎啉(3:5)復(fù)配而成，目前已經(jīng)在馬鈴薯晚疫和芋頭疫病獲得登記。氟醚菌酰胺具有良好的內(nèi)吸傳導(dǎo)性，能從葉片上表面向下滲透，從葉基向葉尖方向傳導(dǎo)，對(duì)幼芽處理后能夠保護(hù)葉片不受病原菌侵染，此外氟醚菌酰胺還可從根部沿植株的木質(zhì)部向整株作物分布，獨(dú)特的作用機(jī)理使得氟醚菌酰胺具有優(yōu)良的防治效果[6]。烯酰嗎啉，其主要作用原理為破壞細(xì)胞壁膜的形成，引起孢子囊壁的分解，致使病菌死亡，對(duì)各個(gè)階段卵菌都有作用，在孢子囊梗和卵孢子的形成階段尤為敏感[7]。二者作用機(jī)理不同，對(duì)于延緩抗藥性的發(fā)生具有積極重要的意義。本文通過(guò)室內(nèi)毒力測(cè)定、盆栽試驗(yàn)和田間藥效試驗(yàn)，評(píng)價(jià)了40%氟醚·烯酰懸浮劑和常規(guī)藥劑對(duì)煙草黑脛病的防治效果，為其合理使用提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料 供試作物：煙草(品種：中煙101、NC55)。

供試培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基。

供試菌株：煙草疫霉菌種，由山東中農(nóng)聯(lián)合研發(fā)中心生測(cè)室采集病樣分離純化并保存。

供試藥劑：代森錳鋅原藥、代森聯(lián)原藥、吡唑醚菌酯原藥、氟醚菌酰胺原藥、烯酰嗎啉原藥、40%氟醚·烯酰懸浮劑、60%吡唑·代森聯(lián)水分散粒劑、58%甲霜·錳鋅可濕性粉劑。

供試田地：山東省濰坊市昌樂(lè)縣阿陀鎮(zhèn)煙草生產(chǎn)基地。每667m2地約1 100株煙草，每壟大約280株煙苗，長(zhǎng)約125m。

1.2 供試方法

1.2.1 菌絲生長(zhǎng)法 本試驗(yàn)按照中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(NY/T 1156.2-2006)，采用菌絲生長(zhǎng)速率法進(jìn)行測(cè)定。用丙酮溶解各原藥配置成一系列不同濃度的母液，分別加入等量母液于預(yù)先分裝45mL PDA培養(yǎng)基、滅菌并冷卻至50～60℃的錐形瓶中。將其充分搖勻，然后等量倒入3個(gè)直徑為90mm的培養(yǎng)皿中，配成目標(biāo)濃度的含藥培養(yǎng)基(表1)。

表1 菌絲生長(zhǎng)法供試藥劑及濃度

將培養(yǎng)好的煙草疫霉菌種，在無(wú)菌條件下取直徑為7mm菌餅，并接種菌餅至含藥平板中央。溶劑對(duì)照加等量丙酮，并設(shè)清水對(duì)照。在25℃±2℃下培養(yǎng)，待對(duì)照生長(zhǎng)至培養(yǎng)皿3/4時(shí)用十字交叉法測(cè)量菌落直徑(cm)，計(jì)算取平均值，計(jì)算抑制率，重復(fù)3次，多次重復(fù)得出結(jié)果。

采用Wadley法進(jìn)行評(píng)價(jià)：根據(jù)增效系數(shù)(SR)來(lái)評(píng)價(jià)藥劑混用的增效作用，即SR>1.5為增效作用；0.5≤SR≤1.5為相加作用；SR<0.5為拮抗作用。計(jì)算增效系數(shù)(SR)按公式(1)和(2)進(jìn)行：

(1)

式中：

X—混劑的EC50理論值，單位為：μg/mL；

PA—混劑中A的百分含量；

PB—混劑中B的百分含量；

A—混劑中A的EC50值，單位為：μg/mL；

B—混劑中B的EC50值，單位為：μg/mL；

(2)

式中：

SR—混劑的增效系數(shù)；

X—混劑EC50的理論值，單位為：μg/mL；

X(1)—混劑EC50的實(shí)測(cè)值，單位為：μg/mL。

1.2.2 活體盆栽法

1.2.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 將生長(zhǎng)一致的6葉煙苗(品種為：中煙101和NC55)移栽至花盆中緩苗1周后，分別用(表2)所示的供試藥劑及處理濃度，以每株噴灑30mL藥液對(duì)煙苗進(jìn)行噴淋莖基部處理，其中60%吡唑·代森聯(lián)水分散粒劑80g/667m2與58%甲霜·錳鋅可濕性粉劑作為藥劑對(duì)照，清水處理作為空白對(duì)照，定義施藥當(dāng)天為施藥0d，待第3d時(shí)將煙草黑脛病菌的菌餅(d=7mm)接種至煙草苗莖基部并用脫脂棉保濕處理，置于25±2℃的溫室中培養(yǎng)。每個(gè)處理均設(shè)4組重復(fù)，每組重復(fù)24株煙草苗。

表2 活體盆栽法供試藥劑及濃度

1.2.2.2 調(diào)查方法 各組試驗(yàn)在施藥前調(diào)查發(fā)病情況，計(jì)算藥前病情指數(shù)，噴藥后7d調(diào)查發(fā)病情況，計(jì)算病情指數(shù)和防治效果。調(diào)查前后均自上而下調(diào)查植株全部莖稈及葉片，根據(jù)以下分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)記錄各級(jí)發(fā)病莖葉數(shù)及全部莖葉數(shù)：0級(jí)：全株無(wú)??；1級(jí)：莖部病斑不超過(guò)莖圍的1/3，個(gè)別葉片萎蔫；3級(jí)：莖部病斑不超過(guò)莖圍的1/2，或半數(shù)以下葉片輕度凋萎，或下部少數(shù)葉片出現(xiàn)病斑；5級(jí)：莖部病斑超過(guò)莖圍的1/2，或半數(shù)以上葉片輕度凋萎；7級(jí)：莖部病斑環(huán)繞莖圍，或2/3以上葉片凋萎；9級(jí)：病株全部葉片凋萎或枯死。

藥效計(jì)算方式根據(jù)病情指數(shù)按下列指數(shù)公式計(jì)算出防治效果，再按DMRT法測(cè)定處理防效的差異顯著性。

按照下列公式進(jìn)行計(jì)算。

防治效果(%)(藥前無(wú)基數(shù))=(空白對(duì)照區(qū)病情指數(shù)-處理區(qū)病情指數(shù))/(空白對(duì)照區(qū)病情指數(shù))×100

1.2.3 田間試驗(yàn)

1.2.3.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 依據(jù)《GB/T17980.90-2004農(nóng)田藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則殺菌劑第90部分：殺菌劑防治煙草黑脛病》開(kāi)展試驗(yàn)。田間試驗(yàn)于山東省濰坊市昌樂(lè)縣阿陀鎮(zhèn)煙草生產(chǎn)基地進(jìn)行，試驗(yàn)地前茬作物為煙草。施藥方式為人工灌根，每個(gè)小區(qū)15株，重復(fù)4次，設(shè)計(jì)為隨機(jī)區(qū)組排列，試驗(yàn)區(qū)四周設(shè)保護(hù)行。試驗(yàn)共設(shè)4個(gè)處理，(表3)所示的供試藥劑及處理濃度。具體操作流程為：圍繞煙苗莖部挖開(kāi)半徑約為4cm左右的近圓形小洞，深度挖至以根部上方3～4cm左右，使灌入的藥劑能滲透至根部，采用改造后的100mL量杯每株煙草灌入100mL藥劑，待藥劑完全滲入土里，填平小洞，壓住已破壞的薄膜，避免影響薄膜的保溫保濕效果。

表3 田間試驗(yàn)供試藥劑及濃度

1.2.3.2 調(diào)查方法 各組試驗(yàn)在施藥前未發(fā)病，待空白區(qū)發(fā)病率達(dá)半數(shù)以上，計(jì)算病情指數(shù)和防治效果[8]。每小區(qū)采用五點(diǎn)取樣法調(diào)查，每點(diǎn)查5～10株，記錄調(diào)查總株數(shù)及各級(jí)病株數(shù)。分級(jí)方法：0級(jí)：全株無(wú)??；1級(jí)：莖部病斑不超過(guò)莖圍的1/3，個(gè)別葉片萎蔫；3級(jí)：莖部病斑不超過(guò)莖圍的1/2，或半數(shù)以下葉片輕度凋萎，或下部少數(shù)葉片出現(xiàn)病斑；5級(jí)：莖部病斑超過(guò)莖圍的1/2，或半數(shù)以上葉片輕度調(diào)萎；7級(jí)：莖部病斑環(huán)繞莖圍，或2/3以上葉片凋萎；9級(jí)：病株全部葉片凋萎或枯死。

藥效計(jì)算方式根據(jù)病情指數(shù)按下列指數(shù)公式計(jì)算出防治效果，再按DMRT法測(cè)定處理防效的差異顯著性。

防治效果(%)(藥前無(wú)基數(shù))=(空白對(duì)照區(qū)病情指數(shù)-處理區(qū)病情指數(shù))/(空白對(duì)照區(qū)病情指數(shù))×100

1.2.4 數(shù)據(jù)分析方法 采用Excel 2010和DPS 7.05對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算和分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 室內(nèi)生物活性測(cè)定結(jié)果 氟醚·烯酰(3:5)對(duì)煙草黑脛病菌具有較好的毒力作用。(表4)可知，煙草黑脛病菌對(duì)氟醚∶烯酰(3:5)表現(xiàn)出很高的活性，EC50值為0.426 7μg/mL；其次為烯酰嗎啉，EC50值為0.435 6μg/mL；吡唑·代森聯(lián)(1:11)和代森錳鋅表現(xiàn)表現(xiàn)出了中等的活性水平。

表4 不同藥劑對(duì)煙草黑脛病菌的毒力水平

2.2 室內(nèi)盆栽試驗(yàn) 各殺菌劑對(duì)煙草黑脛病表現(xiàn)出不同的防治效果，(表5)40%氟醚·烯酰懸浮劑用量為50mL/667m2處理對(duì)煙草黑脛病的防效最高，對(duì)中煙101、NC55的防效分別可達(dá)87.50%、88.30%，其次是40%氟醚·烯酰懸浮劑用量為35mL/667m2處理，分別可達(dá)75.00%、77.66%，該兩組處理的防效均>60%吡唑·代森聯(lián)水分散粒劑80g/667m2和58%甲霜·錳鋅可濕性粉劑 80g/667m2處理。

表5 不同藥劑對(duì)煙草黑脛病菌活體盆栽結(jié)果

2.3 田間防治效果 (表6)可知：不同殺菌劑均可達(dá)到良好的防控作用。其中40%氟醚·烯酰懸浮劑用量為35mL/667m2、50mL/667m2對(duì)煙草黑脛病的防控效果依次為83.02%、91.42%，優(yōu)于對(duì)照藥劑60%唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑80g/667m2和58%甲霜·錳鋅可濕性粉劑80g/667m2。田間防治效果與室內(nèi)毒力測(cè)定及室內(nèi)盆栽試驗(yàn)結(jié)果相一致，表明40%氟醚·烯酰懸浮劑對(duì)煙草黑脛病具有較高的活性。

表6 葉俏等藥劑對(duì)煙草黑脛病田間藥效測(cè)定結(jié)果

續(xù)表

3 討論

研究表明，氟醚·烯酰(3:5)對(duì)煙草黑脛病菌具有較好的毒力作用，其中氟醚菌酰胺∶烯酰嗎啉(3:5)的EC50值為0.426 7μg/mL，增效系數(shù)為1.53，表現(xiàn)為增效作用。煙草黑脛病活體盆栽試驗(yàn)中，40%氟醚·烯酰懸浮劑50mL/667m2和35mL/667m2對(duì)兩品種煙草的黑脛病防效均>75%，在濰坊昌樂(lè)開(kāi)展的煙草黑脛病大田試驗(yàn)中，40%氟醚·烯酰懸浮劑50mL/667m2和35mL/667m2防效均高于對(duì)照藥劑60%唑醚·代森聯(lián)水分散粒劑80g/667m2和58%甲霜·錳鋅可濕性粉劑80g/667m2，表現(xiàn)出較好的防治效果。

煙草黑脛病是一種非常難防治的病害，每年都投入各種力量防治，特別是化學(xué)殺菌劑的投入。然而，近年研究發(fā)現(xiàn)煙草黑脛病病原菌對(duì)常規(guī)殺菌劑已經(jīng)產(chǎn)生不同程度的抗藥性[9-11]。如袁宗勝等已報(bào)道煙草黑脛病菌對(duì)甲霜靈可產(chǎn)生不同程度的耐藥性[12-13]；煙草黑脛病菌對(duì)烯酰嗎啉存在抗性風(fēng)險(xiǎn)等[14]。氟醚菌酰胺屬于細(xì)胞骨架和運(yùn)動(dòng)蛋白類(lèi)的殺菌劑，且上市時(shí)間較短，抗性水平低，對(duì)卵菌綱病原真菌有特效，且作用機(jī)理新穎；烯酰嗎啉屬于嗎啉類(lèi)殺菌劑，烯酰嗎啉屬專(zhuān)一防治卵菌綱真菌性病害藥劑，其作用機(jī)制是破壞病菌細(xì)胞壁膜的形成，引起孢子囊壁的分解，而使病菌死亡。氟醚菌酰胺和烯酰嗎啉以3:5的比例復(fù)配后，不僅具有一定的增效作用，可以更好的發(fā)揮藥效，而且二者作用機(jī)理不同，對(duì)于延緩抗藥性的發(fā)生具有積極重要的意義。因此，可以使用40%氟醚·烯酰懸浮劑35～50mL/667m2噴霧或灌根可有效防治煙草黑脛病。