馬 磊，馮格格，王猛強(qiáng)，陳 穎，李艾琳，高麗萍*，佘永新*

(1.新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所，新疆 烏魯木齊 830000;2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所，北京 100081;3.北京聯(lián)合大學(xué)，北京 100081)

葡萄是最常見的水果之一，大蒜亦是不可或缺的調(diào)味品蔬菜，在國(guó)內(nèi)外貿(mào)易中占有重要地位，其質(zhì)量安全歷來(lái)受到廣泛關(guān)注[1-2]。啶蟲脒(Acetamiprid，ACE)，化學(xué)名稱為N-(N-氰基-乙亞胺基)-N-甲基-2-氯吡啶-5-甲胺，是一種氯化煙酰亞胺類新型高效殺蟲劑[3]，主要作用機(jī)理是對(duì)昆蟲煙酸乙酰膽堿酯酶受體發(fā)生作用，抑制昆蟲體內(nèi)煙酸乙酰膽堿的傳遞作用，從而有效阻止了對(duì)應(yīng)神經(jīng)系統(tǒng)化學(xué)信號(hào)的傳遞作用，達(dá)到破壞昆蟲中樞神經(jīng)正常傳導(dǎo)的效果，最終促使昆蟲發(fā)生嚴(yán)重麻痹直到死亡[4-6]，主要控制葉類蔬菜、果菜、油菜作物、柑橘類水果、梨果、葡萄、棉花和觀賞植物等吸吮型昆蟲[7-9]，因其作用機(jī)理不同于常用殺蟲劑，所以對(duì)有機(jī)磷類、氨基甲酸酯類及合成擬除蟲菊酯類具有嚴(yán)重抗性的害蟲具有特效，是世界范圍內(nèi)廣泛使用的有機(jī)磷殺蟲劑的理想替代品。因此，ACE殺蟲劑被授權(quán)在北美、歐洲、亞洲及太平洋國(guó)家廣泛使用，隨著ACE研究的不斷深入，其毒性也日益凸顯，體外實(shí)驗(yàn)顯示啶蟲脒對(duì)人體外周血淋巴細(xì)胞的基因毒性以及細(xì)胞毒性[10-12]，因而非常有必要掌握啶蟲脒在農(nóng)產(chǎn)品環(huán)境中的最大殘留限量，減少其對(duì)人類和環(huán)境的潛在危害。

我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部頒布的《農(nóng)藥登記資料規(guī)定》要求，每種農(nóng)藥在登記相應(yīng)作物分類中都應(yīng)有一項(xiàng)最大殘留限量(MRL)，2018年，第50屆國(guó)際食品法典農(nóng)藥殘留委員會(huì)審議通過(guò)的農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)(MRLs)有5 493項(xiàng)，涉及農(nóng)藥230種[13]，歐盟約有15.62萬(wàn)項(xiàng)、美國(guó)有5萬(wàn)余項(xiàng)、日本有6萬(wàn)余項(xiàng)農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)[14]，截止目前，我國(guó)規(guī)定了564種農(nóng)藥在376種(類)食品中10 092項(xiàng)最大殘留限量[15]，但還需繼續(xù)開展擴(kuò)大覆蓋的農(nóng)藥種類，加快標(biāo)準(zhǔn)的制修訂等工作，加強(qiáng)食品生產(chǎn)監(jiān)管，便于滿足國(guó)際貿(mào)易需要。

國(guó)外研究表明，CAC、歐盟及日本規(guī)定大蒜中啶蟲脒M(jìn)RL均為0.02mg/kg，而葡萄中啶蟲脒M(jìn)RL有所不同，CAC規(guī)定為0.5mg/kg、韓國(guó)規(guī)定為1mg/kg、歐盟規(guī)定為0.5mg/kg、日本規(guī)定為5mg/kg[16]，我國(guó)實(shí)施的《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》(GB2763-2019)[17]中還未制定啶蟲脒在植物源性食品大蒜和葡萄中的限量標(biāo)準(zhǔn)?！秶?guó)際食品法典委員會(huì)》規(guī)定了啶蟲脒在植物源性食品葡萄、大蒜中的MRL值分別為0.5mg/kg、0.02mg/kg。因此，應(yīng)進(jìn)一步完善我國(guó)食品中農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，制定適合我國(guó)國(guó)情的大蒜和葡萄中啶蟲脒殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，為國(guó)民健康和貿(mào)易提供保障。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料 乙腈，甲醇(均為色譜純)；甲酸(色譜純)；乙酸(分析純)；氯化鈉，無(wú)水硫酸鎂，乙酸-乙腈溶液：1+99(體積比)，甲酸水溶液：0.1%(體積分?jǐn)?shù))，N-丙基乙二胺(PSA)吸附劑：150～300μm，十八烷基鍵和硅膠(C18)吸附劑：150～300μm，啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)品：啶蟲脒含量≥96.0%，微孔濾膜；孔徑0.22μm，有機(jī)相。其他試劑均為；實(shí)驗(yàn)用水為Milli-Q超純水。

1.2 儀器設(shè)備 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧電離源(液相：Agilent 1200；質(zhì)譜：AB API 2000)；高速勻漿機(jī)；Vortex-Genie 2旋渦混合器；MilliQ純水機(jī)；KQ-500DB型數(shù)控超聲波發(fā)生器；XS105DU萬(wàn)分之一電子天平，高速離心機(jī)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 抽檢區(qū)域和抽樣量 葡萄抽檢：樣品抽樣量為40個(gè)樣本，抽樣區(qū)域在北京、四川、山東、陜西、浙江5省(市)的批發(fā)市場(chǎng)、大型超市采樣，每省(市)樣品≥三個(gè)產(chǎn)地，產(chǎn)地分布于浙江、云南、四川、陜西、河北、山東。

大蒜抽檢：樣品抽樣量為40個(gè)樣本，抽樣區(qū)域在北京、天津、浙江3省(市)的批發(fā)市場(chǎng)、大型超市采樣，每省(市)樣品≥三個(gè)產(chǎn)地，產(chǎn)地分布于山東、浙江、江蘇、河北、河南、四川、天津。

1.3.2 樣品制備

1.3.2.1 葡萄樣品制備 將采集的葡萄鮮樣用組織搗碎機(jī)勻漿，分別稱取2份約200～300g樣品(A樣和B樣)，用自封袋密封，于-18℃儲(chǔ)存，備用。

1.3.2.2 大蒜樣品制備 將采集的大蒜樣品進(jìn)行剝皮分離，用組織搗碎機(jī)勻漿，分別稱取2份約100g樣品(A樣和B樣)，用自封袋密封，于-18℃儲(chǔ)存，備用。

1.3.3 樣品前處理 樣品前處理采用的是QuEChERS方法[18]。

1.3.3.1 樣品提取 分別稱取5g(精確至0.01g)葡萄、大蒜試樣勻漿，置于30mL具塞離心管中，加入5mL乙酸-乙腈溶液，搖勻，超聲波提取15min，加入5g氯化鈉，蓋上塞子，振蕩5min，4 000r/min離心5min。將上層有機(jī)相轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中。在離心管中再加入4mL乙酸-乙腈溶液，重復(fù)上述操作，合并有機(jī)相至同一10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻。

1.3.3.2 樣品凈化 分別移取葡萄、大蒜提取液1.5mL，加入預(yù)先裝有300mg無(wú)水硫酸鎂的離心管中，混勻后再加入50mg C18吸附劑、100mg PSA吸附劑，渦旋混合1min，10 000r/min離心5min，移取上清液200μL，加入800μL水，混勻后經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾備用。

同時(shí)取不含啶蟲脒的葡萄、大蒜樣品，按1.3.1步驟制備樣品空白提取液，用于配制基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3.4 檢測(cè)條件 色譜條件：Agilent Eclipse XD8-C18，150mm×2.1mm(內(nèi)徑)，3.5μm；柱溫：40℃；流速0.3mL/min；進(jìn)樣量；10μL；流動(dòng)相：A為0.1%甲酸水溶液，B為乙腈；洗脫梯度：0～3min，90%A，10%B；9～12min，30%A，70%B；12.1～15min，90%A，10%B。

電離方式：電噴霧電離，正離子；離子源溫度：450℃；氣簾氣壓(CUR)：45psi；碰撞氣壓(CAD)：5psi；霧化氣壓(GAS1)：45psi；輔助氣壓(GAS2)：45psi；分辨率：Q1(單位質(zhì)量分辨)Q3(單位質(zhì)量分辨)；掃描方式：多反應(yīng)檢測(cè)(MRM)；啶蟲脒保留時(shí)間、定性定量離子對(duì)及錐孔電壓、碰撞能量(表1)。

表1 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(M R M)參數(shù)

1.3.5 市場(chǎng)樣品監(jiān)測(cè)與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

1.3.5.1 監(jiān)測(cè)方法 參照GB/T 23584-2009規(guī)定的方法，按1.3試驗(yàn)方法對(duì)植物源性食品葡萄、大蒜樣品中啶蟲脒殘留進(jìn)行測(cè)定，外標(biāo)法定量，定量限0.001mg/kg。

1.3.5.2 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 根據(jù)最大殘留限量(MRL來(lái)源GB 2763)計(jì)算某種農(nóng)藥國(guó)家估算每日理論攝入量(TMDI)，參考膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)化葡萄、大蒜樣品中啶蟲脒殘留限量。

TMDI=∑[MRL×Fi]

式中：MRL為農(nóng)藥最大殘留限量，F(xiàn)i為一般人群某一食品的消費(fèi)量。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制及標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制

2.1.1 葡萄中啶蟲脒的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制 用葡萄空白提取液配制成質(zhì)量濃度為0.5、1.0、5.0、20.0、50.0、100.0ng/mL系列啶蟲脒的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在1.3.2的檢測(cè)條件下，以基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液質(zhì)量濃度x為橫坐標(biāo)，峰面積y為縱坐標(biāo)作線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)。得出啶蟲脒的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)。在0.5～100ng/mL范圍內(nèi)，啶蟲脒的進(jìn)樣質(zhì)量濃度(x)與色譜峰面積(y)間線性關(guān)系良好，方程為：y=1.61e+003x+310，相關(guān)系數(shù)R為0.999 3。2.1.2 大蒜中啶蟲脒的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制 用大蒜空白提取液配制成質(zhì)量濃度為0.5、1.0、2.0、5.0、10.0ng/mL系列啶蟲脒的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在1.3.2的檢測(cè)條件下，以基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液質(zhì)量濃度x為橫坐標(biāo)，峰面積y為縱坐標(biāo)作線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖2)。得出啶蟲脒的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)。在0.5～10ng/mL范圍內(nèi)，啶蟲脒的進(jìn)樣質(zhì)量濃度(x)與色譜峰面積(y)間線性關(guān)系良好，方程為：y=1.67e+003x+6.98，相關(guān)系數(shù)R為0.999 6。

圖1 葡萄中啶蟲脒定量標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 大蒜中啶蟲脒定量標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 方法的回收率和精確度 對(duì)葡萄樣品設(shè)定了10ng/g、100ng/g、500ng/g 3個(gè)濃度的添加水平，對(duì)大蒜樣品設(shè)定了10ng/g、20ng/g、50ng/g 3個(gè)濃度的添加水平，每個(gè)添加水平5次重復(fù)，葡萄、大蒜空白試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行測(cè)定。葡萄、大蒜平均回收率為89.00%～111.00%；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為3.75%～8.10%(表2)，符合農(nóng)殘分析的要求，相應(yīng)的色譜圖(圖3～4)。

表2 啶蟲脒在葡萄和大蒜中添加回收率

(a)空白色譜圖

圖3 葡萄中啶蟲脒添加色譜圖

圖4 大蒜中啶蟲脒添加色譜圖

2.3 市場(chǎng)樣品監(jiān)測(cè)

2.3.1 監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)分析 葡萄樣品共40個(gè)，檢出率為17.5%，大蒜樣品共40個(gè)，均未檢出，所有抽檢的葡萄、大蒜樣品均未超標(biāo)，其最低檢出限均為0.2ng/g，因此可以繼續(xù)評(píng)估轉(zhuǎn)化啶蟲脒在植物源食品葡萄和大蒜中的最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，葡萄、大蒜中啶蟲脒殘留的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)(表3)。

表3 葡萄、大蒜樣品監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)表

2.3.2 檢測(cè)方法的回收率、變異系數(shù)及定量限 檢測(cè)方法的回收率、變異系數(shù)及定量限(表4)。

表4 檢測(cè)方法的回收率、變異系數(shù)及定量限

2.4 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估及轉(zhuǎn)化 以我國(guó)居民膳食結(jié)構(gòu)的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果為主，參考我國(guó)農(nóng)藥登記使用情況和農(nóng)藥殘留監(jiān)測(cè)結(jié)果，通過(guò)合理的膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估計(jì)算得知(表5)，普通人每天攝入的食物來(lái)看，啶蟲脒所占的理論最大日攝入值約為0.75mg，其中占每日啶蟲脒允許攝入量的16.9%。根據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織/世界衛(wèi)生組織(FAO/WHO)農(nóng)藥殘留專家聯(lián)席會(huì)議(JMPR)制定的啶蟲脒每日允許攝入量(ADI)為0.07mg/kg bw，CAC推薦啶蟲脒在植物源性食品葡萄、大蒜中的MRL值分別為0.5mg/kg、0.02mg/kg。結(jié)果表明對(duì)一般人群健康不會(huì)產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險(xiǎn)，可以轉(zhuǎn)化制定啶蟲脒在植物源性食品中最大殘留限量。

表5 啶蟲脒在所有登記作物中的長(zhǎng)期膳食攝入評(píng)估表

續(xù)表

3 結(jié)論

本研究以我國(guó)市場(chǎng)植物源性食品葡萄、大蒜中啶蟲脒的殘留量為依據(jù)，根據(jù)我國(guó)國(guó)情、農(nóng)藥ADI值及我國(guó)居民膳食消費(fèi)結(jié)構(gòu)和食品消費(fèi)量[19]，參考葡萄、大蒜啶蟲脒殘留量監(jiān)測(cè)分析結(jié)果，評(píng)估葡萄、大蒜植物源性食品中啶蟲脒殘留量MRL的總體風(fēng)險(xiǎn)，并提出轉(zhuǎn)化建議。

采用了基于QuEChERS前處理技術(shù)，用1%乙酸乙腈提取，凈化劑選擇PSA和C18，建立了植物源性食品葡萄、大蒜中啶蟲脒的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜殘留定量分析方法。該方法在回收率、精密度方面均符合國(guó)標(biāo)中農(nóng)藥殘留測(cè)定的要求。

市場(chǎng)抽檢的葡萄、大蒜樣品各40個(gè)，均未超過(guò)建議的轉(zhuǎn)化值。CAC推薦啶蟲脒在植物源性食品葡萄、大蒜中的MRL值分別為0.5mg/kg、0.02mg/kg。通過(guò)合理的膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估計(jì)算得知，啶蟲脒所占的理論最大日攝入值約為0.75mg，其中占每日啶蟲脒允許攝入量的16.9%。結(jié)果表明不會(huì)對(duì)普通人群健康產(chǎn)生嚴(yán)重危害，因此可以轉(zhuǎn)化制定啶蟲脒在植物源性食品中最大殘留限量。