◎ 陳炎歡，劉賢釗，江志鵬，黃照榮，邱富源

（無限極（中國）有限公司，廣東 江門 529100）

蘆根提取物是以禾本科植物蘆葦（Phragmites communisTrin.）的新鮮或干燥根莖為原料，經(jīng)提取、過濾、濃縮、干燥等工序制成的提取物[1-6]。蘆根提取物對(duì)香豆酸具有清熱瀉火、生津止渴、除煩、止嘔及利尿的作用[7-10]。

目前在國內(nèi)外均未有蘆根提取物相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本研究對(duì)9批不同產(chǎn)地的蘆根提取物對(duì)香豆酸含量進(jìn)行測(cè)定，為鑒別蘆根提取物提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

HP1200型高效液相色譜儀（包括二極管陣列檢測(cè)器，美國Agilent公司），KQ-400KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 材料與試劑

蘆根提取物由適量蘆根藥材加8倍量水煎煮3次，合并濾液，70 ℃減壓濃縮，經(jīng)噴霧干燥而得。9批蘆根提取物來源于2個(gè)廠家，編號(hào)1～9。

對(duì)香豆酸（CAS號(hào)501-98-4，中國食品藥品檢定研究院，純度99.3%）；甲醇為色譜純（德國Merck公司）；其他試劑均為分析純，水為純化水。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 對(duì)香豆酸的含量測(cè)定

（1）對(duì)照品溶液制備。精密稱取對(duì)香豆酸對(duì)照品約1 mg于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，即得對(duì)照品溶液。

（2）供試品溶液制備。精密稱取本品約1.0 g于50 mL小燒杯中，加水20 mL，加熱使溶解，冷卻至室溫后轉(zhuǎn)移至25 mL棕色容量瓶中，加水至刻度，搖勻，用0.45 μm的針式過濾器過濾，濾液即為供試品溶液。

（3）色譜條件。色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱（150 mm或250 mm×4.6 mm，5 μm）。流動(dòng)相：以乙腈為流動(dòng)相A，以0.2%甲酸溶液為流動(dòng)相B，按18∶82比例（體積比）進(jìn)行洗脫；波長(zhǎng)310 nm；柱溫30 ℃；流速1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量10 μL；理論塔板數(shù)按對(duì)香豆酸計(jì)不低于5 000。

1.3.2 方法學(xué)考察

（1）線性關(guān)系考察。精密稱取對(duì)香豆酸對(duì)照品1.411 mg置50 mL容量瓶中，按1.3.1項(xiàng)下（1）制備方法加甲醇溶解制成儲(chǔ)備液，再分別精密吸取該儲(chǔ)備液1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL和10.0 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，按1.3.1項(xiàng)下（3）色譜條件分析，測(cè)定峰面積。

（2）精密度試驗(yàn)。精密稱取1.3.1項(xiàng)下（1）制備的對(duì)香豆酸對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，分別計(jì)算峰面積及保留時(shí)間的RSD值。

（3）穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密稱取蘆根提取物按1.3.1項(xiàng)下（2）制備的供試品溶液，按1.3.1項(xiàng)下（3）色譜條件分別于0 h、2 h、4 h、6 h、12 h和24 h測(cè)定，記錄色譜圖。

（4）重復(fù)性試驗(yàn)。精密稱取蘆根提取物同一天內(nèi)按1.3.1項(xiàng)下（2）制備的6份供試品溶液，按1.3.1項(xiàng)下（3）色譜條件測(cè)定對(duì)對(duì)香豆酸含量。

（5）回收率試驗(yàn)。精密稱取蘆根提取物約0.5 g分別置于9個(gè)50 mL小燒杯中。另取對(duì)香豆酸對(duì)照品1.723 mg置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，分別吸取該對(duì)照品溶液2.5 mL、5.0 mL、7.5 mL，分3組加入含樣品的9個(gè)50 mL小燒杯中，按1.3.1項(xiàng)下（2）制成供回收率測(cè)定用供試品溶液，按1.3.1項(xiàng)下（3）色譜條件測(cè)定，計(jì)算對(duì)香豆酸的回收率。

（6）樣品含量測(cè)定。分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶各10 μL，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)所得對(duì)照品溶液和供試品溶液色譜圖中對(duì)香豆酸峰面積計(jì)算供試品中待測(cè)組分對(duì)香豆酸含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)香豆酸的含量測(cè)定

9批蘆根提取物中對(duì)香豆酸含量（以干基計(jì)）在0.018%～0.026%，地域差異不明顯，結(jié)果見表1。

“忽聞教堂鐘聲、工廠汽笛聲，以及廠外歡呼聲與歌唱聲同時(shí)并作，余輩驚向何故？始知休戰(zhàn)條約已簽訂，戰(zhàn)爭(zhēng)從此可以終止矣！此何日也？記之永久不忘之，1918年11月11日也。是日，各種工作各地戰(zhàn)事自11點(diǎn)起一律停止……”

表1 蘆根提取物對(duì)香豆酸含量測(cè)定結(jié)果表

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 線性關(guān)系考察

以對(duì)香豆酸對(duì)照品的濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，求得回歸方程為y=1.327 9x-0.093 6，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9，如圖1所示。結(jié)果表明對(duì)香豆酸在2.802 3～28.022 5 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程圖

2.2.2 精密度試驗(yàn)

精密度試驗(yàn)結(jié)果見表2，可以看到保留時(shí)間和峰面積的RSD值分別為0.04%和0.06%，不對(duì)稱度（以對(duì)香豆酸計(jì)）不高于1.2，理論塔板數(shù)（以對(duì)香豆酸計(jì)）約12 000，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明儀器精密度良好。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果表（n=6）

2.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)如表3所示，供試品中對(duì)香豆酸峰面積的RSD為

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表（n=6）

0.43%（n=6），表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果見表4，對(duì)香豆酸平均含量為0.018%，RSD為1.88%，分離度大于1.5，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

表4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表

2.2.5 回收率試驗(yàn)

從表5可知，對(duì)香豆酸平均回收率為98.09%，RSD值為0.72%，表明該方法準(zhǔn)確度良好。

表5 對(duì)香豆酸回收率結(jié)果表（n=9）

3 結(jié)論

研究表明，蘆根提取物中對(duì)香豆酸含量的高效液相色譜法其系統(tǒng)適應(yīng)性、精密度、線性關(guān)系、準(zhǔn)確度等均符合要求，該方法可以作為蘆根提取物中對(duì)香豆酸的含量測(cè)定方法；不同產(chǎn)地的蘆根提取物中對(duì)香豆酸含量差異不明顯，蘆根提取物中對(duì)香豆酸含量不低于0.01%，為評(píng)價(jià)蘆根提取物的質(zhì)量提供參考。