亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        SDS 和SAP 前處理聯(lián)合MALDI-TOF MS 在報陽血培養(yǎng)樣本快速病原菌鑒定中的價值

        2021-09-01 10:00:38余佳佳李媛睿
        檢驗醫(yī)學(xué) 2021年8期
        關(guān)鍵詞:水平

        余佳佳, 李媛睿, 劉 瑛

        (上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院檢驗科,上海 200092)

        血流感染是臨床最主要的全身感染性疾病,嚴(yán)重威脅患者的生命安全;血流感染性休克引起低血壓后,有效的治療措施每延遲1 h,患者生存率降低7.6%[1]。血培養(yǎng)是血流感染診斷的金標(biāo)準(zhǔn)[2],陽性血培養(yǎng)樣本中病原菌的快速鑒定可為臨床及時、有效的抗感染治療提供重要依據(jù)[3]。按照傳統(tǒng)臨床微生物檢測的流程,血培養(yǎng)報陽后需要16~24 h才能出具病原菌的鑒定結(jié)果,無法滿足臨床診療的需求。基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)可用于陽性血培養(yǎng)樣本的直接鑒定,根據(jù)對血培養(yǎng)樣本前處理方法的不同可以分為試劑盒提取法[4]、血細(xì)胞裂解法[5]、差速離心法[6]和分離膠法[7]。其中,血細(xì)胞裂解法中使用的裂解試劑主要有十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate,SDS)[8]和皂甙(saponin,SAP)[5]。本研究擬評估SDS和SAP前處理聯(lián)合MALDI-TOF MS對陽性血培養(yǎng)樣本進(jìn)行快速鑒定的應(yīng)用價值。

        1 材料和方法

        1.1 樣本來源

        收集2018年4月—2019年4月上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院陽性血培養(yǎng)樣本296例。

        1.2 儀器和試劑

        BACTECTMFX血培養(yǎng)系統(tǒng)及配套血培養(yǎng)樹脂需氧瓶和含溶血素厭氧瓶、MALDI-TOF MS儀及配套Microflex Biotyper3.0鑒定分析軟件、96孔金屬靶板、α-氰基-4-羥基肉桂酸(alphacyano-4-hydroxyc innamic acid,HCCA)基質(zhì)(美國Bruker Daltonik公司);電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司);Centrifuge 5471R臺式高速冷凍離心機(jī)和微量移液器(德國Eppendorf公司)。10% SDS(南通Beyotime公司);SAP(南京酷爾生物公司);甲酸、乙腈和三氟乙酸(美國Sigma-Aldrich公司);血平板、麥康凱平板、革蘭染液(上海伊華生物技術(shù)有限公司);巧克力平板(上??片敿挝⑸锛夹g(shù)有限公司)。

        1.3 方法

        1.3.1 陽性血培養(yǎng)樣本的前處理和直接MALDITOF MS鑒定 抽取1 mL報陽血培養(yǎng)樣本2份,分別置于1.5 mL Eppendorf管中,分別加入100 μL SDS和SAP溶液,上下顛倒混勻后,150×g離心10 min,棄上清液,每管均加入1 mL無菌水,吹打混勻后,150×g離心2 min,棄上清液,重復(fù)該步驟1次,最后每管再加入1 mL 75%乙醇,吹打混勻后,150×g離心2 min,棄上清液,在底物中加入適量甲酸和等量的乙腈,混勻后分別取1 μL點在金屬靶板上,自然干燥后分別加1 μL HCCA基質(zhì),干燥后進(jìn)行MALDI-TOF MS檢測。通過Microflex軟件獲得質(zhì)譜峰圖,參數(shù)設(shè)計:質(zhì)荷比(m/z)為2 000~20 000,shots為200,激光強度為80%,保存圖譜。采用Biotyper 3.0軟件比對質(zhì)譜峰圖,獲得鑒定結(jié)果。

        1.3.2 常規(guī)轉(zhuǎn)種培養(yǎng)和MALDI-TOF MS鑒定 抽取適量報陽血培養(yǎng)血樣本,分別接種于血平板、麥康凱平板、巧克力平板,涂片行革蘭染色。將平板置于35 ℃孵箱中,孵育過夜后挑取單個菌落,點涂在金屬靶板上,加1 μL甲酸,自然干燥后加1 μL HCCA基質(zhì),干燥后進(jìn)行MALDI-TOF MS檢測。

        1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

        采用SPSS 2.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以例或率表示,組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 血培養(yǎng)樣本鑒定結(jié)果

        296例陽性血培養(yǎng)樣本中有272例分離出單數(shù)菌,24例分離出2種或2種以上病原菌。

        與傳統(tǒng)血培養(yǎng)轉(zhuǎn)種培養(yǎng)后的菌落質(zhì)譜鑒定結(jié)果比較,272例分離出單數(shù)菌的陽性血培養(yǎng)樣本中,采用SDS前處理結(jié)合MALDI-TOF MS鑒定至種水平的有210例,種水平鑒定準(zhǔn)確率為77.2%;鑒定至屬水平的有226例,屬水平鑒定準(zhǔn)確率為83.1%。采用SAP前處理結(jié)合MALDITOF MS鑒定至種水平的有192例,種水平鑒定準(zhǔn)確率為70.6%;鑒定至屬水平的有206例,屬水平鑒定準(zhǔn)確率為75.7%。見表1。

        表1 SDS和SAP聯(lián)合MALDI-TOF MS對陽性血培養(yǎng)樣本病原菌的鑒定結(jié)果 株

        2.2 2種前處理方法鑒定準(zhǔn)確率比較

        2種前處理方法對272例陽性血培養(yǎng)樣本的鑒定準(zhǔn)確率在種水平上的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.079),在屬水平上的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.034)。但SDS前處理法在葡萄球菌的鑒定上效果優(yōu)于SAP前處理法(種水平P=0.009,屬水平P<0.001);而SAP前處理法對非發(fā)酵菌的鑒定效果優(yōu)于SDS前處理法(屬水平P=0.048)。SDS前處理法和SAP前處理法鑒定念珠菌的效果均較好,其中SDS前處理法鑒定至種水平的準(zhǔn)確率為72.7%。見表2。

        表2 2種前處理方法MALDI-TOOF MS鑒定準(zhǔn)確率比較 %

        續(xù)表1 株

        2.3 2種前處理方法鑒定分?jǐn)?shù)比較

        在屬水平鑒定準(zhǔn)確的菌株中,SDS前處理法鑒定分?jǐn)?shù)>2.0分79例,1.7~2.0分78例,<1.7分69例;SAP前處理法鑒定分?jǐn)?shù)>2.0分38例,1.7~2.0分65例,<1.7分103例。

        2.4 復(fù)數(shù)菌血培養(yǎng)樣本的鑒定結(jié)果

        24例分離出2種或2種以上病原菌的血培養(yǎng)樣本中,SDS前處理結(jié)合MALDI-TOF MS鑒定出其中1種病原菌至種水平的準(zhǔn)確率為66.7%,其中有1例陽性血培養(yǎng)樣本中2種病原菌均被鑒定至種水平;SAP前處理結(jié)合MALDI-TOF MS鑒定出其中1種細(xì)菌至種水平的準(zhǔn)確率為58.3%。2種前處理方法鑒定準(zhǔn)確率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.551)。

        3 討論

        血培養(yǎng)是診斷血流感染的金標(biāo)準(zhǔn),對引起血流感染的病原菌進(jìn)行快速鑒定至關(guān)重要,是臨床經(jīng)驗性抗感染治療重要的依據(jù)。對陽性血培養(yǎng)樣本進(jìn)行前處理后直接鑒定病原菌可以將鑒定時間提前16~24 h。本研究對296例陽性血培養(yǎng)樣本進(jìn)行快速鑒定,前處理方法采用細(xì)胞裂解法,以SDS和SAP作為裂解劑,可以快速破壞宿主的紅細(xì)胞和白細(xì)胞,然后通過離心收集菌體,并進(jìn)行鑒定。本研究272例分離出單數(shù)菌的陽性血培養(yǎng)樣本中,采用SDS和SAP前處理聯(lián)合MALDI-TOF MS的種水平鑒定準(zhǔn)確率分別為77.2%和70.6%,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.079);屬水平鑒定準(zhǔn)確率分別為83.1%和75.7%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.034)。在屬水平鑒定準(zhǔn)確的菌株中,SDS前處理法聯(lián)合MALDI-TOF MS的鑒定分?jǐn)?shù)高于SAP前處理法,且在分離出復(fù)數(shù)菌的陽性血培養(yǎng)樣本的鑒定中,可能是由于復(fù)數(shù)菌的例數(shù)較少,2種前處理方法鑒定準(zhǔn)確率差異無統(tǒng)計學(xué)意義,但SDS法鑒定其中1種細(xì)菌至種水平的準(zhǔn)確率略高于SAP法,且有1例血培養(yǎng)陽性樣本2種細(xì)菌均鑒定至種水平。SDS前處理法對葡萄球菌的鑒定效果明顯優(yōu)于SAP法,但對非發(fā)酵菌的鑒定效果略差。綜合分析發(fā)現(xiàn),SDS前處理法的鑒定效果略優(yōu)于SAP前處理法。

        本實驗室前期利用MALDI Sepsityper Kit和分離膠法收集陽性血培養(yǎng)樣本中的菌體,進(jìn)行MALDI-TOF MS鑒定,種水平鑒定準(zhǔn)確率分別為72.5%和73.6%,屬水平鑒定準(zhǔn)確率分別為76.0%和77.3%,鑒定結(jié)果較SDS前處理法略差,但較SAP前處理法略好。其中試劑盒法鑒定葡萄球菌至種水平的準(zhǔn)確率僅為77.4%,分離膠法鑒定念珠菌至種水平的準(zhǔn)確率僅為19.4%,遠(yuǎn)低于SDS法[9-10]。MALDI Sepsityper Kit聯(lián)合質(zhì)譜鑒定的時間約為40 min,分離膠法聯(lián)合質(zhì)譜鑒定的時間約為20 min,SDS和SAP前處理法聯(lián)合質(zhì)譜鑒定的時間約為20 min。SDS前處理法聯(lián)合質(zhì)譜鑒定所需時間較少,而且鑒定準(zhǔn)確率高,成本更低,操作更簡單,適合在臨床微生物實驗室廣泛開展。

        本研究發(fā)現(xiàn),SDS和SAP前處理法聯(lián)合MALDI-TOF MS直接鑒定陽性血培養(yǎng)樣本時,對腸桿菌科細(xì)菌的鑒定準(zhǔn)確率最高,SDS前處理法種水平鑒定準(zhǔn)確率超過90%,這可能與腸桿菌科細(xì)菌繁殖速度快,報陽時抽取1 mL血培養(yǎng)樣本收集的菌量較多,而且腸桿菌科細(xì)菌的細(xì)胞壁較薄,容易被甲酸裂解釋放核糖體蛋白有關(guān),因此鑒定效果最佳。但這2種前處理方法對非發(fā)酵菌的鑒定效果均較差,特別是SDS前處理法聯(lián)合質(zhì)譜鑒定至種水平的準(zhǔn)確率僅為53.2%,其中嗜麥芽窄食單胞菌的鑒定準(zhǔn)確率最差,僅為16.7%,原因還有待研究,可能與細(xì)菌繁殖較慢,收集的菌量較少有關(guān)。SDS前處理法和SAP前處理法鑒定念珠菌至種水平的準(zhǔn)確率分別為72.7%和63.6%,較腸桿菌科和葡萄球菌低,可能與念珠菌繁殖速度慢,1 mL血培養(yǎng)樣本中收集的菌量少,且念珠菌的細(xì)胞壁較厚,甲酸裂解效果較差有關(guān)[11]。若發(fā)現(xiàn)陽性血培養(yǎng)樣本涂片結(jié)果為真菌孢子,建議適當(dāng)增加血培養(yǎng)樣本的抽取量,然后加入SDS或SAP進(jìn)行裂解,再離心富集細(xì)菌進(jìn)行MALDI-TOF MS檢測,從而提高鑒定準(zhǔn)確率。

        采用SDS和SAP前處理法聯(lián)合MALDI-TOF MS對陽性血培養(yǎng)樣本進(jìn)行鑒定,操作簡便,成本較低,可以快速、準(zhǔn)確地得到初步鑒定結(jié)果;特別是SDS前處理法,鑒定效果優(yōu)于SAP前處理法、分離膠法和商品化試劑盒,可以在臨床微生物實驗室廣泛開展。對陽性血培養(yǎng)樣本進(jìn)行直接病原菌鑒定,可以快速、準(zhǔn)確地向臨床報告引起血流感染的菌種,為臨床經(jīng)驗性抗感染治療提供有效的依據(jù)。

        猜你喜歡
        水平
        張水平作品
        作家葛水平
        火花(2019年12期)2019-12-26 01:00:28
        深化精神文明創(chuàng)建 提升人大工作水平
        加強上下聯(lián)動 提升人大履職水平
        水平有限
        雜文月刊(2018年21期)2019-01-05 05:55:28
        加強自身建設(shè) 提升人大履職水平
        老虎獻(xiàn)臀
        中俄經(jīng)貿(mào)合作再上新水平的戰(zhàn)略思考
        建機(jī)制 抓落實 上水平
        中國火炬(2010年12期)2010-07-25 13:26:22
        做到三到位 提升新水平
        中國火炬(2010年8期)2010-07-25 11:34:30
        亚洲中文字幕第一页免费 | 色婷婷色丁香久久婷婷| av无码av天天av天天爽| 人妻人人澡人人添人人爽人人玩| 国产一线视频在线观看高清| 日本一区二区三区一级片| 99国产精品久久久久久久成人热| 天天鲁一鲁摸一摸爽一爽| 欧美日韩亚洲成色二本道三区| 在线日韩中文字幕乱码视频| 人妻少妇中文字幕在线观看| 蜜臀av性久久久久蜜臀aⅴ| 亚洲熟妇在线视频观看| 国产一区二区av在线观看| 99精品久久99久久久久| 国产精品久久久久影院嫩草| 丝袜欧美视频首页在线| 综合成人亚洲网友偷自拍| 中文字幕日韩人妻在线视频| 亚洲av无码一区二区三区性色| 亚洲色欲色欲大片WWW无码| av在线免费观看男人天堂| 人妻仑乱a级毛片免费看| 日韩无码视频淫乱| 国产亚洲亚洲精品视频| 日韩av一区二区网址| 中文字字幕在线精品乱码| 加勒比精品久久一区二区三区| 少妇高潮免费在线观看| 国产毛多水多高潮高清| 天天影视色香欲综合久久 | 久久欧美与黑人双交男男| 久久AⅤ无码精品色午麻豆| 亚州终合人妖一区二区三区| 亚洲色成人网站www永久四虎| 亚洲精品黄网在线观看| 在线观看亚洲视频一区二区| 亚洲一区二区三区影院| 男女扒开双腿猛进入免费看污| 最新亚洲av日韩av二区一区| 国产极品少妇一区二区|