何 迅，郭 賓，左浩江，楊素紅，楊 華，李治中，鄒曉莉，李 蓉，許 欣，裴曉方

(1.四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院(華西第四醫(yī)院),四川成都 610041；2.宜賓五糧液仙林生態(tài)酒業(yè)有限公司，四川宜賓 644000)

我國(guó)酒文化綿延千年、獨(dú)具特色。《本草綱目》記載燒酒具有“消冷積寒氣，燥濕痰，開(kāi)郁結(jié)，止水泄；治霍亂瘧疾噎膈、心腹冷痛、陰毒欲死；殺蟲(chóng)辟瘴，利小便，堅(jiān)大便，洗赤目腫痛”等功效?，F(xiàn)代中醫(yī)也認(rèn)為適量飲酒具有增進(jìn)食欲、舒緩情緒、消除疲勞、活血通脈、助藥吸收等作用。近期研究還發(fā)現(xiàn)適量用飲低度酒與心血管風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)[1-2]。隨著人們生活水平提高，公眾對(duì)酒的需求持續(xù)增加，健康飲酒的理念也逐漸深入人心。與傳統(tǒng)白酒相比，消費(fèi)者更愿意選擇兼具傳統(tǒng)風(fēng)味和保健功能的產(chǎn)品。因此，近年來(lái)我國(guó)保健酒廣受青睞，市場(chǎng)蓬勃發(fā)展，增長(zhǎng)率已超過(guò)白酒。

蛹蟲(chóng)草是保健酒常用的泡制材料。蛹蟲(chóng)草又稱北冬蟲(chóng)夏草，與冬蟲(chóng)夏草有相似的功效成分與藥理作用[3-4]，可參與宿主免疫調(diào)節(jié)[5-12]，并具有緩解肝損傷[13]、調(diào)節(jié)血糖、改善胰島素抵抗、抗氧化等多種功效。此外，蛹蟲(chóng)草中蟲(chóng)草多糖、蟲(chóng)草素、超氧化物歧化酶等活性成分還明顯高于冬蟲(chóng)夏草[14-15]，加之成品酒的口味醇和、成本較低、人工培育質(zhì)量可控等優(yōu)點(diǎn)，作為野生冬蟲(chóng)夏草的替代品已獲廣泛認(rèn)可[15-16]，并被嘗試用于白酒、黃酒、米酒、啤酒、葡萄酒、茶酒、客家娘酒等多種酒類產(chǎn)品。另有研究發(fā)現(xiàn)，蛹蟲(chóng)草可通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制黃嘌呤氧化酶活性，降低體內(nèi)尿酸含量，具有防治高尿酸血癥和痛風(fēng)的潛質(zhì)[17-18]。結(jié)合上述研究，與傳統(tǒng)白酒相比，以蛹蟲(chóng)草配伍的保健酒可望具有多種保健功效。此外，不同白酒的非酒精成分具有不同功效，目前缺乏以頭部川酒為基酒的保健酒嘗試，其對(duì)宿主免疫功效也尚不清楚。

新工藝酒是五糧液基酒配以蛹蟲(chóng)草為主自主研制的保健酒。該酒既保持了五糧液的獨(dú)特風(fēng)味，又充分保留了蛹蟲(chóng)草為主要材料的滋養(yǎng)調(diào)補(bǔ)功效，市場(chǎng)前景廣闊。為研究新工藝酒對(duì)宿主免疫功能的調(diào)節(jié)作用，依據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》，觀察不同劑量新工藝酒對(duì)小鼠細(xì)胞免疫、體液免疫、單核-巨噬細(xì)胞功能、NK 細(xì)胞活性率的影響，探討日常飲用新工藝酒對(duì)宿主的免疫調(diào)節(jié)作用，為健康飲酒提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

酒樣：經(jīng)曲面響應(yīng)法優(yōu)化制法的五糧液蛹蟲(chóng)草新工藝酒（5 倍濃縮液，酒精度15%vol），推薦服用量為100 mL/人/日。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF 級(jí)雄性Balb/c 小鼠，體重18～22 g，由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（川）2013-24號(hào)。

耗材及試劑：綿羊紅細(xì)胞SRBC（成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司），補(bǔ)體為12 只健康豚鼠（四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)養(yǎng)殖場(chǎng)）的混合血清，YAC-1細(xì)胞（中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù)），RPMI1640 培養(yǎng)液、雙抗（成都哈里生物科技有限公司），氧化型輔酶Ⅰ（Sigma），墨汁（一得閣），刀豆蛋白A（Sigma）、細(xì)胞增殖試劑盒I MTT（Sigma），酶標(biāo)儀（Multiskan MK3）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組及干預(yù)

動(dòng)物基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性喂飼后，隨機(jī)分為5組，每組40只，包括：水對(duì)照組、基酒對(duì)照組、新工藝酒低、中、高劑量組。各組灌胃液依次為滅菌水、15%vol基酒、8.33 mL/kg·bw、16.67 mL/kg·bw、33.33 mL/kg·bw新工藝酒（分別相當(dāng)于推薦日服用劑量的5 倍、10倍和20 倍）。灌胃量為20 mL/kg·bw，每天1 次，連續(xù)灌胃30 d，定期稱重。

1.2.2 免疫功能評(píng)價(jià)

連續(xù)灌胃30 d 后，頸椎脫臼處死動(dòng)物。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》中“增強(qiáng)免疫力功能檢驗(yàn)方法”，計(jì)算臟器/體重比值，測(cè)定新工藝酒對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能（小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)-足跖增厚法，ConA 誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)-MTT 法），體液免疫功能（血清溶血素測(cè)定-血凝法，抗體生成細(xì)胞檢測(cè)-Jerne 改良玻片法），單核-巨噬細(xì)胞功能（小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)-半體內(nèi)法、碳廓清法），NK 細(xì)胞活性率（乳酸脫氫酶法）的影響[20]。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用PEMS 3.1 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組均數(shù)比較方差分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。對(duì)非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠體重、脾臟/體重比值、胸腺/體重比值分析

各劑量組與對(duì)照組相比，其初始體重、中期體重、末期體重、體重增重均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）（數(shù)據(jù)未示出）。此外，脾臟/體重比值、胸腺/體重比值也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 新工藝酒對(duì)小鼠脾臟/體重比值和胸腺/體重比值的影響

2.2 新工藝酒對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響

遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)：抗原攻擊24 h 后，各劑量組與對(duì)照組小鼠相比，其足跖腫脹度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），見(jiàn)表2。

淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)（MTT 法）：各劑量組與對(duì)照組小鼠相比，其光密度差值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 新工藝酒對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響

2.3 新工藝酒對(duì)小鼠體液免疫功能的影響

血清溶血素測(cè)定：新工藝酒中、高劑量組與水對(duì)照組和基酒對(duì)照組小鼠相比，其抗體積數(shù)顯著增高（P＜0.01，P＜0.05），其余各劑量組與對(duì)照組小鼠相比，其抗體積數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），見(jiàn)表3。

抗體生成細(xì)胞檢測(cè)（Jerne 改良玻片法）：各劑量組與對(duì)照組小鼠相比，其抗體生成細(xì)胞數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），見(jiàn)表3。

表3 新工藝酒對(duì)小鼠體液免疫功能的影響

2.4 新工藝酒對(duì)小鼠單核-巨噬細(xì)胞功能的影響

腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力測(cè)定：各劑量組與對(duì)照組小鼠相比，其腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬百分率與吞噬指數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），見(jiàn)表4。

碳廓清實(shí)驗(yàn)：各劑量組與對(duì)照組小鼠相比，其碳廓清吞噬指數(shù)a 無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），見(jiàn)表4。

表4 新工藝酒對(duì)小鼠單核-巨噬細(xì)胞功能的影響

2.5 新工藝酒對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性率的影響

新工藝酒低、中劑量組與水對(duì)照組和基酒對(duì)照組小鼠相比，其NK 細(xì)胞活性率顯著增加（P＜0.01，P＜0.05），其余各劑量組與對(duì)照組小鼠相比，其NK細(xì)胞活性率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），見(jiàn)表5。

表5 新工藝酒對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性率的影響

3 討論

目前，保健酒中用于提高免疫力的原料主要有冬蟲(chóng)夏草和蛹蟲(chóng)草等。據(jù)《本草拾遺》和《本草從新》記述，冬蟲(chóng)夏草“味甘性溫，秘精益氣”，“以酒浸數(shù)枚，啖之治腰膝間痛楚，有益腎之功”。然而由于野生冬蟲(chóng)夏草生長(zhǎng)緩慢、數(shù)量稀少，加上過(guò)度挖采已導(dǎo)致資源瀕臨枯竭[5]?，F(xiàn)代研究表明，蛹蟲(chóng)草與冬蟲(chóng)夏草都含有蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草多糖、腺苷、生物堿、酚類、超氧化物歧化酶、硒等功效成分[3，16]。其中，蟲(chóng)草多糖作為免疫調(diào)節(jié)劑，可促進(jìn)IL-2、IL-6、IL-8、IL-18等細(xì)胞因子表達(dá)，刺激淋巴細(xì)胞增殖、提高巨噬細(xì)胞活性，是理想的免疫增強(qiáng)劑[6-7，19]；腺苷有促進(jìn)血管擴(kuò)張，增加血流量，降低血壓等作用；蟲(chóng)草酸能改善人體微循環(huán)，具有降血脂、鎮(zhèn)咳、祛痰等作用；硒作為公認(rèn)的抗癌元素，也具有抗氧化，增強(qiáng)機(jī)體免疫的能力[15]。此外，大量細(xì)胞、動(dòng)物、人體研究均表明，蛹蟲(chóng)草可望通過(guò)刺激NK 細(xì)胞、T 細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞活性，促進(jìn)免疫因子表達(dá)等多種途徑，來(lái)提高宿主的免疫力[10-11，20-23]。

本研究根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》，測(cè)試了新工藝酒對(duì)小鼠細(xì)胞免疫、體液免疫、單核-巨噬細(xì)胞功能、NK 細(xì)胞活性率的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在小鼠血清溶血素抗體積數(shù)檢測(cè)中，中劑量組（16.67 mL/kg·bw）和高劑量組（33.33 mL/kg·bw）與水對(duì)照組和基酒對(duì)照組小鼠相比，其抗體積數(shù)顯著增加（P＜0.01，P＜0.05）；在小鼠NK 細(xì)胞活性率測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，低劑量組（8.33 mL/kg·bw）和中劑量組（16.67 mL/kg·bw）與水對(duì)照組和基酒對(duì)照組小鼠相比，其NK 細(xì)胞活性率顯著增加（P＜0.01，P＜0.05）。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》及相關(guān)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，提示新工藝酒具有改善小鼠免疫力的作用。同時(shí)，本研究結(jié)果也與上述蛹蟲(chóng)草調(diào)節(jié)宿主免疫的研究結(jié)果相吻合，但受樣本量、干預(yù)方式等限制，有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

綜上所述，新工藝酒既保持了五糧液酒基的獨(dú)特風(fēng)味，又充分保留了蛹蟲(chóng)草的滋養(yǎng)調(diào)補(bǔ)功效，具有增強(qiáng)宿主機(jī)體免疫的潛質(zhì)，適合多類人群食用，市場(chǎng)前景廣闊，值得進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)。