李先芝，劉 洋，石 豪，關(guān)宏霞，林 露，嚴(yán) 玲，錢全全，胡 楊

(勁牌有限公司 中藥保健食品質(zhì)量與安全湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 大冶 435100)

肉蓯蓉為列當(dāng)科植物肉蓯蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma或管花肉蓯蓉Cistanchetubulosa(Schenk) Wight 的干燥帶鱗葉的肉質(zhì)莖[1]，被譽(yù)為“沙漠人參”，是中國傳統(tǒng)的名貴中藥材[2-5]。在2015年版《中華人民共和國藥典：一部》中規(guī)定，松果菊苷、毛蕊花糖苷是肉蓯蓉藥材的含量測定指標(biāo)，其含量檢測采用高效液相色譜法進(jìn)行測定。松果菊苷、毛蕊花糖苷作為肉蓯蓉藥材的質(zhì)量控制指標(biāo)，評定其含量測定不確定度對于評價(jià)肉蓯蓉藥材的質(zhì)量有著重要意義。

按照《化學(xué)檢測領(lǐng)域測量不確定度評定利用質(zhì)量控制和方法確認(rèn)數(shù)據(jù)評定不確定度(RB/T 141 2018)》[6]，在期間精密度測量條件下，獲得肉蓯蓉的質(zhì)量控制結(jié)果和方法確認(rèn)數(shù)據(jù)，應(yīng)用安德森-達(dá)林統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)對測量系統(tǒng)正態(tài)性與獨(dú)立性假設(shè)進(jìn)行檢驗(yàn)，對期間精密度不確定度分量uR′和偏倚不確定度分量ub進(jìn)行合并，最終計(jì)算出樣品水平下的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度uc與擴(kuò)展不確定度U[7]，以一種相對簡單的方法對肉蓯蓉藥材中松果菊苷、毛蕊花糖苷含量的測量不確定度進(jìn)行了評定。

2 肉蓯蓉藥材含量檢測

肉蓯蓉藥材的含量檢測參照2015年版《中華人民共和國藥典：一部》“肉蓯蓉”項(xiàng)下“含量測定”進(jìn)行：色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以C18鍵合硅膠為填充劑；以甲醇為流動(dòng)相A，以0.1%甲酸溶液為流動(dòng)相B，按表1中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長為330 nm。理論板數(shù)按松果菊苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000[1]。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫條件

對照品溶液的制備：取松果菊苷對照品、毛蕊花糖苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 mL各含0.2 mg的混合溶液，即得[1]。

供試品溶液的制備：取本品粉末(過四號(hào)篩)約1 g，精密稱定，置100 mL棕色量瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，搖勻，稱定重量，浸泡30 min，超聲處理40 min(功率250 W，頻率35 kHz)，放冷，再稱定重量，加50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液，濾過，取續(xù)濾液，即得[1]。

測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，得到對照品溶液與供試品溶液中各化合物的保留時(shí)間與峰面積，根據(jù)保留時(shí)間進(jìn)行定性，峰面積進(jìn)行定量，計(jì)算得到藥材中松果菊苷、毛蕊花糖苷的含量[1]。

3 測量系統(tǒng)的安德森-達(dá)林檢驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)室根據(jù)高效液相色譜法(通則0512)，將肉蓯蓉藥材樣品(QCS樣品)納入日常檢測中，在期間精密度測量條件下，對肉蓯蓉藥材中的松果菊苷、毛蕊花糖苷含量進(jìn)行不確定度評定。

實(shí)驗(yàn)室在近2個(gè)月的時(shí)間內(nèi)，得到24個(gè)測試結(jié)果(m=24，單位為%)，統(tǒng)計(jì)受控檢驗(yàn)按下式計(jì)算，結(jié)果見表2。

表2 期間精密度條件下松果菊苷測量結(jié)果統(tǒng)計(jì)

(續(xù)表2)

表3 期間精密度條件下毛蕊花糖苷測量結(jié)果統(tǒng)計(jì)

(續(xù)表3)

4 期間精密度不確定度分量uR′的評定

當(dāng)所用QCS樣品的測量涵蓋全部分析過程時(shí)，樣品水平下的uR′評定采用uR′=SR′，式中：SR′為期間精密度標(biāo)準(zhǔn)差。根據(jù)表2的統(tǒng)計(jì)信息，求得uR′松=SR′松=0.115%。根據(jù)表3的統(tǒng)計(jì)信息，求得uR′毛=SR′毛=0.06%。

5 偏倚不確定度分量ub的評定

偏倚不確定度分量的評定采用加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)分析進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了肉蓯蓉藥材中50%、80%、100%、120%、150%、200%加標(biāo)量的加標(biāo)回收試驗(yàn)，每個(gè)水平加標(biāo)量做三平行?；厥章蕯?shù)據(jù)見表4。

多水平的偏倚不確定度分量ub的評定采用公式進(jìn)行計(jì)算，式中bi為第i個(gè)回收率與平均回收率的差值。由表4的數(shù)據(jù)計(jì)算得到ub松=0.023 1%；由表5的數(shù)據(jù)計(jì)算得到ub毛=0.026 1%。

表4 多水平的松果菊苷加標(biāo)回收試驗(yàn)數(shù)據(jù)

表5 多水平的毛蕊花糖苷加標(biāo)回收試驗(yàn)數(shù)據(jù)

6 擴(kuò)展不確定度分量U的評定

在95%概率下，擴(kuò)展不確定度按U=2uc=2計(jì)算。式中：U為擴(kuò)展不確定度；uc為合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度。

已知uR′松=0.115%，ub松=0.023 1%，由上式求得肉蓯蓉藥材中松果菊苷含量的測量不確定度合理估計(jì)值為：U=2=0.24%。

已知uR′毛=0.06%，ub松=0.026 1%，由上式求得肉蓯蓉藥材中毛蕊花糖苷含量的測量不確定度合理估計(jì)值為：U=2=0.13%。

7 討論

在期間精密度測定條件下，基于質(zhì)量控制結(jié)果和方法確認(rèn)數(shù)據(jù)，可算出期間精密度不確定度uR′，同時(shí)根據(jù)加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以算出偏倚不確定度分量ub，即可得出合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度uc和擴(kuò)展不確定度U。

此種不確定度評定方法要求有充分的重復(fù)測量次數(shù)，所得到的不確定度具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的嚴(yán)格性，更為客觀。期間精密度實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為勁牌有限公司不同實(shí)驗(yàn)室在不同時(shí)期檢測得到，且uR′的評定數(shù)據(jù)經(jīng)過安德森-達(dá)林檢驗(yàn)，證明整個(gè)檢測系統(tǒng)處于穩(wěn)定受控狀態(tài)。

從擴(kuò)展不確定度的評定結(jié)果看，測量不確定度主要來源于期間精密度不確定度分量。而期間精密度不確定度分量采用的是期間精密度條件下的標(biāo)準(zhǔn)差，表明實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件的變化對檢測結(jié)果的影響較大，提示實(shí)驗(yàn)室在日常質(zhì)量控制工作中應(yīng)加強(qiáng)此方面的控制，從而確保檢測結(jié)果真實(shí)、可信。