馬曉麗，張曉陶，楊 樺,3*

(1.寧夏醫(yī)科大學 中醫(yī)學院，寧夏 銀川 750004； 2.寧夏自治區(qū)第三人民醫(yī)院，寧夏 銀川 750021； 3.寧夏醫(yī)科大學 回醫(yī)藥現(xiàn)代化教育部重點實驗室，寧夏 銀川 750004)

慢性軟組織損傷是臨床常見病之一，是骨骼肌、筋膜韌帶、關節(jié)囊、骨膜以及脂肪等運動系統(tǒng)軟組織損害性病變的簡稱，其中以骨骼肌損傷最為常見，其病理基礎主要為損傷引起的慢性無菌性炎癥，引起肌痙攣、肌萎縮、瘢痕形成和粘連，導致局部血液循環(huán)障礙、組織缺血缺氧而產(chǎn)生疼痛[1]。目前，針對慢性骨骼肌損傷的認識及其機制研究已經(jīng)成熟，但是在治療方面仍需進一步研究。現(xiàn)常見治療方法西醫(yī)有口服非甾體類抗炎藥物、手術治療等；中醫(yī)有內(nèi)熱針治療、中藥口服、針刺治療、推拿治療及刮痧治療等。長期服用非甾體類抗炎藥物可帶來胃腸道損傷等副作用[1]；手術治療風險高且價格昂貴；內(nèi)熱針治療術后會出現(xiàn)局部腫脹疼痛無力。中藥治療對急性軟組織損傷更有效，比較之下，針刺治療、推拿治療及刮痧治療優(yōu)點顯著，其安全無副作用、操作方便、費用低且效果佳。故本研究通過研究針刺、推拿及刮痧3種方法對慢性骨骼肌損傷模型大鼠血清LDH活性的作用及影響，以明確針刺、推拿及刮痧在慢性骨骼肌損傷中的治療效果，現(xiàn)報道如下。

1 材料與試劑

1.1 實驗動物

健康雄性SD大鼠59只，鼠齡4～6周，體質量200～220 g，由寧夏醫(yī)科大學實驗動物中心提供(許可證號：SCXX(寧)2015-0001)。

1.2 針具

華佗牌一次性無菌針灸針，規(guī)格:0.30 mm×13 mm (蘇州醫(yī)療器械公司)。

1.3 儀器及主要試劑

TD5KR型高速離心機(長沙東旺實驗儀器有限公司)；CKX31顯微鏡(OLYMPUS Corporation，日本)；LDH檢測試劑盒(武漢基因美生物科技有限公司)； 五車道跑步機LE8710RTS(東樂自然基因生命科學有限公司)。

2 方法

2.1 動物分組

從59只大鼠中隨機抽出6只作為空白對照組，剩余53只大鼠為實驗組，對實驗組大鼠進行慢性骨骼肌損傷模型制備，造模結束后，從空白對照組和實驗組中各隨機抽出3只以檢測造模是否成功，然后將剩余50只實驗組大鼠隨機分為模型對照組、自然恢復組、刮痧組、推拿組及針刺組，每組10只。

2.2 慢性骨骼肌損傷模型制備與評價

選用經(jīng)典大鼠下坡跑離心收縮模型誘導動物的慢性骨骼肌損傷模型。該模型由Armstrong[2]設計建立，以鼠類動物跑臺為實驗儀器，跑臺坡度為-16°，速度為18 m/min，持續(xù)時間為90 min以上。本實驗動物模型制備在Armstrong模型方案的基礎上延長運動時間，使運動大鼠每日運動時間達到150 min，運動時間為28天，以更好地誘導動物慢性骨骼肌損傷模型的形成。運動過程中可使用聲、光或毛刷刺激大鼠尾部，使動物始終保持在跑臺跑道的前1/3處，以保證跑臺上大鼠的運動強度。運動結束后，將動物放回籠內(nèi)休養(yǎng)。

慢性骨骼肌損傷模型的評價采用HE染色法，觀察空白對照組和實驗組骨骼肌(股外側肌)組織病理變化，并用ELISA法檢測血清中LDH活性，以判斷造模是否成功。于造模結束后隨機抽取實驗組及空白對照組大鼠各3只，麻醉后取其股外側肌及心臟血后處死。對其股外側肌做HE染色觀察組織病理，經(jīng)20倍光學顯微鏡觀察成片后結果如圖1、圖2所示：實驗組大鼠股外側肌肌纖維斷裂，組織水腫，炎細胞浸潤、纖維組織增生明顯且細胞界限不清；空白對照組肌纖維排列整齊，細胞界限清楚，無組織水腫及炎細胞浸潤，有少量纖維組織增生。

圖1 實驗組股外側肌組織病理(HE染色，×20)

圖2 空白對照組股外側肌組織病理(HE染色，×20)

采用ELISA法檢測其心臟血血清中LDH的活性變化，結果空白對照組LDH活性為(73.757±7.643)，實驗組為(136.149±3.959)，經(jīng)統(tǒng)計學分析，實驗組和空白對照組比較，血清中LDH活性差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。HE染色結果及血清中LDH 活性變化分析均說明實驗組大鼠慢性骨骼肌損傷模型已建立成功。

2.3 治療方法

2.4 取材及指標檢測

所有大鼠予以10%水合氯醛腹腔內(nèi)注射麻醉后進行胸腔穿刺心臟取血5 mL，置于離心管內(nèi)，靜置30 min后以3 000 r/min離心10 min，取上層血清，置于-80 ℃超低溫冰箱保存，以進行血清LDH活性檢測，然后將大鼠處死。血清LDH活性檢測采用ELISA法進行。

2.5 統(tǒng)計學方法

3 結果

3.1 固定對大鼠血清中LDH活性的影響

首先對空白對照組固定與未固定大鼠血清中LDH活性變化進行統(tǒng)計分析(未固定數(shù)據(jù)來自判斷造模是否成功時所取)，以觀察固定是否會對實驗結果產(chǎn)生影響。結果空白對照組大鼠固定與未固定其血清中LDH活性分別為：(66.279±4.295)、(67.408±5.130)，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，說明固定對大鼠血清中LDH的活性無影響。

3.2 干預后各組大鼠血清中LDH活性變化

干預后，針刺組、推拿組及刮痧組大鼠血清中LDH活性下降顯著，均明顯低于模型對照組(P<0.05)；且與自然恢復組比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。其中針刺組與刮痧組和推拿組比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，而刮痧組與推拿組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結果提示：針刺、刮痧及推拿均可降低慢性骨骼肌損傷模型大鼠血清中LDH活性，其中針刺影響最明顯。見表1。

表1 干預后各組大鼠血清中LDH活性變化

3 討論

慢性軟組織損傷疾病是以骨骼肌、筋膜、韌帶、關節(jié)囊、脂肪等軟組織附著點產(chǎn)生的無菌性炎癥為病理基礎的臨床常見病[4]，其中以骨骼肌損傷最為多見，屬中醫(yī)學“傷筋”范疇。

軟組織外科學觀點認為，無菌性炎癥是慢性軟組織損傷的病理特點, 也是產(chǎn)生疼痛的主要原因[5]，研究表明針刺對炎癥介質存在著雙向良性調節(jié)作用，能提高抗炎細胞因子水平，也能抑制致炎細胞因子的合成，減少炎癥反應[6]。

中醫(yī)認為可從氣血、臟腑、經(jīng)絡三方面討論慢性軟組織損傷的病機，但無論是臟腑失和還是經(jīng)絡阻塞，歸根結底都是因為氣血運行紊亂以致氣滯血瘀而出現(xiàn)疼痛[7]，故活血化瘀、減輕疼痛為傷筋的主要治則。足三里穴又名下陵、三里，歸屬于足陽明胃經(jīng)，位于小腿外側，犢鼻下3寸，犢鼻與解溪連線上，氣血多行于此穴，具有提升正氣、疏經(jīng)通絡、調氣血、補虛弱等諸多功效，《靈樞·九針十二原》對五輸穴經(jīng)氣流注特點概括為：“所出為井、所溜為滎、所注為輸、所行為經(jīng)，所入為合”，其中合穴經(jīng)氣充盛且入合于臟腑。足三里穴為足陽明胃經(jīng)之合穴，是足陽明脈氣充盛所入之穴，足三里同時是胃的下合穴，“合治內(nèi)腑”，說明足三里穴有良好的健運脾胃的功效，能夠促進脾胃受納水谷，同時營養(yǎng)周身經(jīng)筋，促進損傷修復[8]。刺激足三里能明顯改善血液的高黏滯性，降低紅細胞聚集指數(shù)，使紅細胞由聚集狀態(tài)成為相對分散狀態(tài)，說明針刺足三里能降低血液黏稠度、減少循環(huán)阻力、加快血流速度，從而起到活血化瘀的作用[9]。刺激足三里穴位所產(chǎn)生的鎮(zhèn)痛效應可被阿片樣受體特異阻斷劑納洛酮所逆轉，提示針刺足三里穴可激活內(nèi)源性鎮(zhèn)痛系統(tǒng)，促使內(nèi)源性嗎啡樣物質釋放而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛效應[10]。環(huán)跳穴又名髀樞、樞中，歸屬足少陽膽經(jīng)，位于臀區(qū)，股骨大轉子最凸點與骶管裂孔連線的外1/3與內(nèi)2/3交點處，具有疏經(jīng)通絡、活血化瘀、止痛強筋的功效，是足少陽膽經(jīng)和足太陽膀胱經(jīng)的交會穴，足太陽經(jīng)分布于腰、臀和下肢的整個后面，足少陽經(jīng)分布于人身整個側身部，兩經(jīng)之經(jīng)筋結于踝、膝、腘、臀和骶部，在經(jīng)脈病候上，足太陽“主筋所生病”，足少陽“主骨所生病”，說明兩經(jīng)脈善治筋骨病。刺激環(huán)跳穴可改善血液流變學異常，消除患者血液的“粘、濃、凝、聚”傾向，從而起到行氣血、通經(jīng)絡的作用[11]；針刺環(huán)跳穴也可使痛覺信息經(jīng)傳入神經(jīng)進入脊髓，經(jīng)痛覺中樞及神經(jīng)體液整合加工，使疼痛性質發(fā)生變化，同時釋放神經(jīng)介質5-羥色胺、內(nèi)源性雅片等起到鎮(zhèn)痛作用[12]。

本研究選取足三里、環(huán)跳二穴進行研究，發(fā)現(xiàn)針刺、推拿、刮痧均可降低大鼠血清LDH活性，說明針刺、推拿、刮痧治療慢性骨骼肌損傷均有療效，其中針刺影響最明顯。本研究結果可供臨床醫(yī)師參考。