史凌云

（澤州縣綜合檢驗(yàn)檢測(cè)中心 山西晉城 048000）

涕滅威和克百威屬于氨基甲酸酯類農(nóng)藥，被廣泛應(yīng)用于蔬菜、水果等農(nóng)作物的病蟲(chóng)防治。在使用農(nóng)藥提高農(nóng)作物產(chǎn)量，造福人類的同時(shí)，過(guò)量的農(nóng)藥殘留帶來(lái)的危害也引起了人們的重視[1]。通過(guò)高效液相色譜法對(duì)蔬菜中的涕滅威、克百威農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)[2-4]，其結(jié)果對(duì)照GB 2763—2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥殘留最大限量》可判定試樣中農(nóng)藥殘留是否超標(biāo)，以為人們的日常生活提供一定的質(zhì)量保障。本文通過(guò)分析檢測(cè)過(guò)程中的不確定度來(lái)源及其對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，為正確評(píng)價(jià)、使用測(cè)量結(jié)果和規(guī)范實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理和控制提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

島津LC-20AT高效液相色譜儀（柱后衍生反應(yīng)裝置和熒光檢測(cè)器）、氮吹儀、高速勻漿機(jī)、梅特勒PL202-L型天平、氨基固相萃取小柱、10 mL容量瓶（A級(jí)）、移液槍（100 μL～1 000 μL）、50 mL量筒（A級(jí)）、10 mL刻度移液管（A級(jí)）、5 mL刻度移液管（A級(jí)）。

1.1.2 試劑

涕滅威和克百威標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心），濃度均為1 000 mg/L；乙腈、甲醇、丙酮、二氯甲烷，均為色譜純；OPA稀釋劑、鄰苯二甲醛、巰基乙醇，均為Pickering生產(chǎn)；0.05 mol/L NaOH溶液。

1.2 色譜條件

色譜柱：C18柱，250 mm×4.6 mm，5 mm。柱溫：50 ℃。熒光檢測(cè)器：λex=330 nm，λem=465 nm。柱后衍生：0.05 mol/L NaOH溶液，流速0.5 mL/min；OPA試劑，流速0.5 mL/min。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品前處理

依據(jù)NY/T 761—2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》第3部分，稱取25.0 g 樣品放入勻漿機(jī)中，加入50.0 mL 乙腈，在勻漿機(jī)中高速勻漿2 min 后用濾紙過(guò)濾，濾液收集到裝有5 g～7 g 氯化鈉的100 mL 具塞量筒中，收集濾液40 mL～50 mL，蓋上塞子，劇烈振蕩1 min 后，在室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相分層。從100 mL 具塞量筒中準(zhǔn)確吸取10.00 mL 乙腈相溶液，放入150 mL 燒杯中，將燒杯放在80 ℃水浴鍋加熱，并向杯內(nèi)緩緩?fù)ㄈ氲獨(dú)?，將乙腈蒸發(fā)近干；加入2.0 mL 甲醇+二氧甲烷（1+99）溶解殘?jiān)w上鋁箔，待凈化。將氨基柱用4.0 mL 甲醇+二氧甲烷（1+99）預(yù)洗條件化，當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即加入上述待凈化溶液，用15 mL 離心管收集洗脫液。用2 mL 甲醇十二氧甲燒（1+99）洗燒杯后過(guò)柱，并重復(fù)一次，將離心管置于氮吹儀上，水浴溫度50 ℃，氨吹蒸發(fā)至近干，用甲醇準(zhǔn)確定容至2.5 mL。在混合器上混勻后，用0.2 μm 濾膜過(guò)濾，待測(cè)。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋

用1.0 mL 的移液槍吸取1.0 mL 濃度為1 000 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)母液于10 mL 容量瓶中，配制成100 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲(chǔ)備液。用1.0 mL 的移液槍吸取1.0 mL 的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儲(chǔ)備液于10 mL 容量瓶中，配制成10 μg/mL 的標(biāo)液，用于加標(biāo)回收率的測(cè)定和工作液的配制。用移液槍吸取100 μL 的標(biāo)液于10 mL 的容量瓶中，配制成0.1 μg/mL 的工作液。

2 結(jié)果與分析

2.1 不確定度來(lái)源分析

不確定度來(lái)源主要有三類：（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度符號(hào)為Urel標(biāo)；（2）樣品前處理，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度符號(hào)為Urel前；（3）色譜儀，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度符號(hào)為Urel儀。

2.2 不確定度的評(píng)定

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度

（1）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度

自國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心購(gòu)買濃度均為1 000 mg/L 的涕滅威和克百威的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，其定值的擴(kuò)展不確定度均為2%，k=2，屬于B 類評(píng)定，則涕滅威和克百威的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度均為： Urel標(biāo)1=2%/2=0.01。

（2）標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋配制過(guò)程

涕滅威和克百威工作液配制過(guò)程相同，均用甲醇少量多次沖洗后轉(zhuǎn)移至容量瓶中[5]。

對(duì)于移液槍（100 μL～1 000 μL），根據(jù)檢定證書(shū)提供的信息，其100 μL 時(shí)的重復(fù)性誤差為1.6%，按均勻分布處理，其1 000 μL 時(shí)的重復(fù)性誤差為0.2%，按均勻分布處理，。

依據(jù)JJG 196—2006《常用玻璃量器檢定規(guī)程》，單標(biāo)線10 mL 容量瓶（A 級(jí)）的容量允差為±0.02 mL，按三角分布處理，。

則涕滅威和克百威標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋過(guò)程引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度均為：

（3）標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

涕滅威和克百威標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度均為：

2.2.2 樣品前處理引入的不確定度

（1）稱量

試樣稱量過(guò)程中所用的天平為梅特勒PL202-L 型，其最小分度值為0.01 g。由于天平的精密度不是太高，在稱量過(guò)程中數(shù)顯很穩(wěn)定，因此，忽略稱量重復(fù)性引入的不確定度。天平的最大允許誤差為±0.05 g，按均勻分布處理，則由稱量引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

（2）提取、凈化、定容

整個(gè)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)室溫度在±3 ℃內(nèi)變化，用到試劑為乙腈（體積膨脹系數(shù)為0.001 37/℃）和甲醇（體積膨脹系數(shù)為0.001 10/℃）[6-7]，視溫度變化按均勻分布處理，得到溫度變化下試劑體積膨脹引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度見(jiàn)表1。

提取、凈化、定容過(guò)程中用到的玻璃量具，JJG 196—2006《常用玻璃量器檢定規(guī)程》對(duì)其均有相應(yīng)的最大允差。按均三角分布處理，由此得到器具相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度見(jiàn)表1。

表1 提取、凈化、定容過(guò)程中的不確定度

（3）樣品提取、凈化過(guò)程（回收率）。

在檢測(cè)涕滅威和克百威于試樣中的殘留時(shí)，對(duì)于氮吹、萃取等過(guò)程中引入的不確定度，可選擇在6 組質(zhì)量為25.0 g 的試樣中添加0.03 mg/kg 涕滅威和克百威的標(biāo)準(zhǔn)溶液，計(jì)算其回收率來(lái)評(píng)定。標(biāo)準(zhǔn)偏差運(yùn)用極差法計(jì)算，極差系數(shù)為2.53。

涕滅威的回收率為：91.1%、88.9%、86.7%、90.5%、89.2%、87.5%；其中mg/kg，mg/kg，

克百威的回收率為：105.1%、106.4%、103.8%、100.2%、105.4%、106.3%；其中=0.009 6。

（4）樣品前處理引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

2.2.3 色譜儀檢測(cè)過(guò)程引入的不確定度

（1）高效液相色譜儀

根據(jù)儀器檢定證書(shū)的數(shù)據(jù)，6 次的定量重復(fù)性誤差為1.96%，則色譜儀引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為 urel,LC= 0.008。

（2）峰面積差異

因衍生設(shè)備未強(qiáng)制檢定，則對(duì)峰面積差異引入的不確定度評(píng)定時(shí)，只考慮試樣的重復(fù)測(cè)量來(lái)評(píng)定。將0.10 mg/L 的涕滅威和克百威的工作液重復(fù)測(cè)量6 次，涕滅威峰面積（單位：mV*min）分別為480 669、480 635、480 614、480 625、480 618、480 602，均值為480 627，極差為67；涕滅威峰面積（單位：mV*min）分別為333 548、333 597、333 554、333 588、333 536、333 524；均值為333 554，極差為73。

測(cè)量6 次時(shí)的極差系數(shù)為2.53，則涕滅威的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為u涕重=67÷2.53=26.48，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為 urel涕重=26.48÷480 627=0.000 055；同理可得克百威的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u克重=73÷2.53=28.85 ，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel克重=28.85÷333 554=0.000 086。

（3）色譜儀檢測(cè)過(guò)程中的不確定度

色譜儀檢測(cè)過(guò)程中的不確定度來(lái)源有儀器本身引入的不確定度和峰面積差異引入的不確定度，峰面積差異引入的相對(duì)不確定度可忽略不計(jì)。

2.3 總相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度和相對(duì)擴(kuò)展不確定度

修約后涕滅威和克百威的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度均為0.020，則相對(duì)擴(kuò)展不確定度均為Urel=0.040（k=2）。

2.4 測(cè)定結(jié)果

經(jīng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得到試樣中涕滅威的最佳估計(jì)值為ω涕=0.03 mg/kg，其擴(kuò)展不確定度為U涕=Urel×ω涕=0.040×0.03 mg/kg=0.001 2 mg/kg，故此次測(cè)量試樣中涕滅威含量為（0.03±0.001 2）mg/kg，k=2。同理試樣中克百威的最佳估計(jì)值為ω克=0.025 mg/kg，其擴(kuò)展不確定度為U克=Urel×ω克=0.040×0.025 mg/kg=0.001 0 mg/kg，此次測(cè)量試樣中克百威含量為（0.025±0.001 0）mg/kg，k=2。

3 結(jié)語(yǔ)

分析檢測(cè)涕滅威和克百威在試樣中殘留的各個(gè)步驟，發(fā)現(xiàn)影響整個(gè)過(guò)程不確定度的主要因素為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的稀釋過(guò)程和前處理過(guò)程。因此，實(shí)際中要按照標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的貯存要求來(lái)保存標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及其儲(chǔ)備液；在檢測(cè)過(guò)程中，檢驗(yàn)人員要規(guī)范器具使用動(dòng)作，嚴(yán)格控制前處理中提取、凈化、定容步驟中的操作。雖然儀器本身引入的不確定度比較小，但也要做好儀器設(shè)備的檢定、期間核查及日常維護(hù)工作，在測(cè)試前做好色譜儀的平衡工作。實(shí)驗(yàn)的每一個(gè)步驟都不可大意，要嚴(yán)格按照作業(yè)指導(dǎo)書(shū)規(guī)范自己的操作，以減小測(cè)定結(jié)果的不確定度。