管 芹，張海珠, 2，范 敏, 2*

?化學(xué)成分 ?

芡歐鼠尾草中1個(gè)新的二萜化合物

管 芹1，張海珠1, 2，范 敏1, 2*

1. 大理大學(xué)藥學(xué)院，云南 大理 671000 2. 云南省高校滇西道地藥材資源開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 大理 671000

研究芡歐鼠尾草地上部分的化學(xué)成分。采用硅膠、Sephadex LH-20、HPLC等各種現(xiàn)代色譜分離技術(shù)進(jìn)行系統(tǒng)地分離純化，根據(jù)波譜數(shù)據(jù)結(jié)合改良的Mosher法對(duì)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。從芡歐鼠尾草地上部分的丙酮提取物中分離得到了3個(gè)化合物，分別鑒定為(5,7,9,10,12)-二羥基-8,17-二去氫車桑子內(nèi)酯（1）、12-hydroxyhardwickic acid（2）和14-triene-17,12:18,19-diolide（3）?；衔?為新二萜化合物，命名為芡歐鼠尾內(nèi)酯A，化合物3為首次報(bào)道從該植物中分離得到。

芡歐鼠尾草；克羅烷型；二萜；芡歐鼠尾內(nèi)酯A；14-triene-17,12:18,19-diolide

芡歐鼠尾草L. 為唇形科鼠尾草屬一年生植物[1]，又名奇亞，原產(chǎn)于墨西哥南部和危地馬拉北部。其種子（奇亞籽）富含優(yōu)質(zhì)蛋白、ω-亞麻酸、可溶性膳食纖維、維生素和礦物質(zhì)以及多種抗氧化成分，具有調(diào)節(jié)血脂、血糖、血壓，輔助減肥，預(yù)防心腦血管疾病等作用[2-6]。奇亞籽因營(yíng)養(yǎng)豐富、食用價(jià)值高、具有多種健康促進(jìn)作用而成為國(guó)內(nèi)外食品研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)，在2014年被我國(guó)正式批準(zhǔn)為新食品原料。

迄今為止，國(guó)內(nèi)外對(duì)于奇亞籽的研究已經(jīng)非常深入，然而通過(guò)文獻(xiàn)查閱發(fā)現(xiàn)，該植物地上部分的化學(xué)成分報(bào)道較少。截止目前，從地上部分共分離得到18個(gè)新的克羅烷型二萜化合物[7-9]，其中6個(gè)化合物具有心肌細(xì)胞保護(hù)活性[7,9]，2個(gè)化合物具有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)活性[8]。為促進(jìn)該植物資源的綜合開(kāi)發(fā)與利用，本實(shí)驗(yàn)對(duì)芡歐鼠尾草地上部分開(kāi)展深入的化學(xué)成分研究，從中分離得到3個(gè)克羅烷型二萜化合物（圖1），分別鑒定為(5,7,9,10,12)-二羥基-8,17-二去氫車桑子內(nèi)酯 [(5,7,9,10,12)-dihydroxy- 8,17-didehydrohautriwaic lactone，1]、12-hydroxy- hardwickic acid（2）和14-triene-17,12:18,19-diolide（3）。其中化合物1為新的二萜化合物，命名為芡歐鼠尾內(nèi)酯A，化合物3為首次報(bào)道從該植物中分離得到。

圖1 化合物1～3的結(jié)構(gòu)

1 儀器與材料

Shimadzu UV-2401A型紫外可見(jiàn)分光光度儀（Shimadzu 公司，日本）；Jasco DIP-370型數(shù)字式旋光儀（Jasco 公司，日本）；Bio-Rad FTS-135型紅外光譜儀（Bruker公司，德國(guó)）；VG AUTO Spec-3000（Shimadzu 公司，日本）或API Qstar Pulsar質(zhì)譜儀（Applied Biosystems公司，美國(guó)）；Bruker AM-600核磁共振儀（Bruker公司，美國(guó)）；EZ Purifier System液相色譜儀（利穗科技有限公司，中國(guó)）；Sephadex LH-20凝膠（Pharmacia公司，瑞典）；MCI-gel CHP-20P（Mitsubishi 公司，日本）；柱色譜硅膠（100～200、200～300目，青島海洋化工廠）；Agilent 1200高效液相色譜儀（Agilent 公司，美國(guó)）；Agilent Zorbax SB-C18色譜柱（250 mm×10 mm，5 μm）和Agilent Zorbax SB-C18柱（250 mm×9.4 mm，5 μm），美國(guó)Agilent公司；顯色劑為10%濃硫酸的乙醇溶液，噴灑后適當(dāng)加熱。

芡歐鼠尾草L. 由中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所成曉研究員栽培在昆明植物園，采收于2015年10月。植物標(biāo)本（2015-10A-1B）存放于大理大學(xué)生藥學(xué)教研室。

2 提取與分離

芡歐鼠尾草地上部分樣品（21 kg）干燥粉碎后，采用丙酮150 L在室溫下冷浸提取3次，每次浸泡24 h，提取濃縮后得浸膏（1.5 kg）。浸膏經(jīng)丙酮溶解，經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-丙酮（9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、0∶10）為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，用薄層色譜（TLC）檢測(cè)，合并相同組分后得到6個(gè)極性段Fr. A～F。餾分Fr. D（140 g）用聚酰胺拌樣，以乙醇-水系統(tǒng)（5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1）為洗脫劑，經(jīng)反相MCI柱色譜進(jìn)行梯度洗脫，用TLC檢測(cè)，合并相同組分后得到4個(gè)極性段：Fr. D.1～D.4。Fr. D.2（0.9 g）經(jīng)過(guò)半制備HPLC（25%乙腈）純化得到化合物1（23 mg，R＝28 min）。餾分Fr. C（300 g）用聚酰胺拌樣，以乙醇-水系統(tǒng)（5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1）為洗脫劑，經(jīng)MCI柱色譜分離，用TLC檢測(cè)，合并相同組分后得到3個(gè)極性段Fr. C.1～C.3。Fr. C.3（7 g）經(jīng)硅膠柱色譜以石油醚-氯仿-醋酸乙酯（3∶1∶1）為洗脫劑洗脫為3部分，F(xiàn)r. C.3.1～C.3.3。Fr. C.3.1（0.6 g）經(jīng)過(guò)半制備HPLC（40%乙腈）純化得到化合物3（20 mg，R＝25 min）和2（3.8 mg，R＝33 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

表1 化合物1的1H-和13C-NMR (600/150 MHz, CD3OD) 數(shù)據(jù)

化合物1的相對(duì)構(gòu)型是由ROESY實(shí)驗(yàn)確定的（圖2）。ROESY譜中H-6b/H-10, H-7/H-10, H-6a/H-19a, H2-19/H3-20的相關(guān)點(diǎn)顯示H2-19和H3-20是α-構(gòu)型，H-7和H-10是β-構(gòu)型。因7-OH和12-OH均為仲醇，所以本實(shí)驗(yàn)采用改良的Mosher法[13]確定了C-7和C-12的絕對(duì)構(gòu)型，其中化合物1的()-α甲氧基三氟甲基苯基乙酸 [()-MTPA] 和()-MTPA酯在H-6、H-11、H-14、H-17的化學(xué)位移差ΔH（ΔH＝ δ－δ）分別為0、+0.2、+0.03、+0.05、?0.08、?0.27、?0.07，由此可確定C-7和C-12的絕對(duì)構(gòu)型為7和12（圖3），結(jié)合化合物1的相對(duì)構(gòu)型，確定該化合物的絕對(duì)構(gòu)型為5,7,9,10,12。因此，化合物1的結(jié)構(gòu)鑒定為(5,7,9,10,12)-二羥基-8,17-二去氫車桑子內(nèi)酯，為1個(gè)新化合物，命名為芡歐鼠尾內(nèi)酯A。

化合物2：白色粉末，分子式C20H28O4，1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 6.76 (1H, d,= 3.0 Hz, H-3), 1.94 (1H, q,= 6.6 Hz, H-8), 4.79 (1H, dd,= 6.9, 3.2 Hz, H-12), 6.42 (1H, brs, H-14), 7.39 (1H, brs, H-15), 7.36 (1H, s, H-16), 0.92 (3H, d,= 6.6 Hz, H-17), 1.30 (3H, s, H-19), 0.74 (3H, s, H-20)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 17.9 (t, C-1), 27.0 (t, C-2), 134.4 (d, C-3), 141.4 (s, C-4), 37.7 (s, C-5), 35.6 (t, C-6), 27.4 (t, C-7), 37.4 (d, C-8), 39.4 (s, C-9), 46.8 (d, C-10), 45.8 (t, C-11), 63.3 (d, C-12), 130.9 (s, C-13), 108.4 (d, C-14), 138.7 (d, C-15), 143.5 (d, C-16), 16.3 (q, C-17), 172.0 (s, C-18), 20.6 (q, C-19), 18.2 (q, C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照一致[14]，故鑒定化合物2為12-hydroxyhardwickic acid。

圖2 化合物1的1H-1H COSY、HMBC、ROESY相關(guān)信號(hào)

圖3 Mosher法實(shí)驗(yàn)結(jié)果

化合物3：白色粉末，分子式C20H22O6，1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 2.09 (2H, m, H-1), 5.94 (1H, m, H-2), 5.66 (1H, m, H-3), 2.80 (1H, m, H-4), 1.96 (1H, m, H-6a), 1.33 (1H, m, H-6b), 1.80 (1H, m, H-7a), 2.42 (1H, m, H-7b), 1.97 (1H, m, H-10), 2.39 (1H, dd,= 15.0, 4.0 Hz, H-11a), 1.80 (1H, dd,= 15.0, 12.0 Hz, H-11b), 5.27 (1H, dd,= 12.0, 4.0 Hz, H-12), 6.47 (1H, s, H-14), 7.43 (1H, brs, H-15), 7.48 (1H, brs, H-16), 4.18 (1H, d,= 7.8 Hz, H-19a), 4.06 (1H, dd,= 7.8, 2.0 Hz, H-19b), 0.94 (3H, s, H-20)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3):22.1 (t, C-1), 128.8 (d, C-2), 121.0 (d, C-3), 52.0 (d, C-4), 40.8 (s, C-5), 33.2 (t, C-6), 27.6 (t, C-7), 75.6 (s, C-8), 39.3 (s, C-9), 38.0 (d, C-10), 34.1 (t, C-11), 71.8 (d, C-12), 124.5 (s, C-13), 108.5 (d, C-14), 143.8 (d, C-15), 139.8 (d, C-16), 172.0 (s, C-17), 175.4 (s, C-18), 71.1 (t, C-19), 17.3 (q, C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照一致[15]，故鑒定化合物3為14-triene-17,12:18,19-diolide。

4 改良的Mosher實(shí)驗(yàn)

將化合物1（6 mg）溶于干燥的二氯甲烷中，隨后按順序加入()-MTPA（12 mg，3∶1），二環(huán)己基碳二亞胺（16 mg，5∶1）和4-二甲氨基吡啶（26 mg，12∶1），在氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫?cái)嚢?4 h，待反應(yīng)完全，直接濃縮蒸干，經(jīng)硅膠柱色譜，以石油醚-氯仿-異丙醇（2∶17∶1）為洗脫劑分離得到()-MTPA酯（1）2 mg。運(yùn)用上述同樣的步驟得到()-MTPA酯（1）2 mg。

5 討論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)芡歐鼠尾草地上部分的化學(xué)成分進(jìn)行研究，從中分離得到3個(gè)克羅烷型二萜，結(jié)構(gòu)鑒定確定化合物1為新化合物，此類成分多具有拒食活性[10]，為完善實(shí)驗(yàn)，充分了解芡歐鼠尾草的物質(zhì)基礎(chǔ)及活性成分，下一步將進(jìn)行拒食活性篩選。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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A new diterpenoid from

GUAN Qin1, ZHANG Hai-zhu1, 2, FAN Min1, 2

1. College of Pharmacy, Dali University, Dali 671000, China 2. Key Laboratory for Development of Genuine Medicinal Materials Resources Development in WestYunnan Province of Yunnan University, Dali 671000, China

To study the chemical constituents of the aerial parts of.The compounds were isolated and purified by various modern chromatographies, and their structures were identified by spectroscopic data and modified Mosher's method.Three compounds were isolated from the acetone extract of the aerial parts of., which were elucidated as (5,7,9,10,12)-dihydroxy-8,17-didehydrohautriwaic lactone (1), 12-hydroxyhardwickic acid (2) and 14-triene- 17,12:18,19-diolide (3).Compound 1 is a new diterpenoid, named hispanlactone A, and compound 3 is isolated from this plant for the first time.

L.;-clerodane; diterpenoid; hispanlactone A; 14-triene-17,12:18,19-diolide

R284.1

A

0253 - 2670(2021)16 - 4779 - 04

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.16.002

2021-02-04

大理大學(xué)博士科研啟動(dòng)項(xiàng)目（KY1819212210）；大理州科技計(jì)劃重大項(xiàng)目（D2019NA03）；云南省地方高校聯(lián)合專項(xiàng)（202001BA070001-104）

管 芹（1996—），女，在讀碩士研究生，從事中藥資源化學(xué)研究。E-mail: 1253595744@qq.com

范 敏（1988—），女，講師，博士，碩士生導(dǎo)師，從事中藥資源化學(xué)研究。Tel: (0872)2257411 E-mail: fanmin@dali.edu.cn

[責(zé)任編輯 王文倩]