孫知雨

（華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣東 廣州 510631）

陽光玫瑰葡萄屬歐美雜交種，但具有典型的歐亞種特性。該品種果穗呈圓錐形，果穗質(zhì)量600 g左右，大穗可達(dá)1 800 g，平均單果質(zhì)量8～12 g；果粒著生緊密，呈橢圓形，黃綠色，果面有光澤，果粉少；果肉鮮脆多汁，有玫瑰香味，可溶性固形物含量在20%左右，最高可達(dá)26%；鮮食品質(zhì)極優(yōu)，是目前市場上最受歡迎的葡萄品種之一［1］。為了進(jìn)行優(yōu)良陽光玫瑰葡萄果苗的快速繁育，并保持該品種的優(yōu)良特征，宜采用組織培養(yǎng)方式進(jìn)行繁殖。對葡萄進(jìn)行組織培養(yǎng)的研究已多有報(bào)道［2-10］，但是關(guān)于陽光玫瑰葡萄組織培養(yǎng)的論文僅有1篇［11］。為了解影響陽光玫瑰組織培養(yǎng)效果的條件，此試驗(yàn)對陽光玫瑰葡萄的組織培養(yǎng)和快速繁殖技術(shù)進(jìn)行研究，為陽光玫瑰葡萄的快速繁殖提供參考。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料選取陽光玫瑰葡萄春季萌發(fā)的10 cm長的莖段，在室內(nèi)去掉葉片，流水沖洗30 min，去掉頂梢最嫩的一段，剪成帶1個(gè)芽的莖段。將莖段放在超凈工作臺(tái)上，先用70%的酒精浸泡60 s，然后用0.1%氧化汞消毒9 min，再用無菌水涮洗3次，每次5 min。在無菌接種盤或者無菌培養(yǎng)皿上，切掉葡萄帶芽莖段兩端，然后將莖段接種在啟動(dòng)培養(yǎng)基上。

1.2 啟動(dòng)培養(yǎng)

B5為葡萄外植體芽誘導(dǎo)的基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中添加植物生長調(diào)節(jié)劑6-BA和NAA。6-BA的濃度分為4個(gè)梯度，分別為0.5 mg/L、1.0 mg/L、1.5 mg/L和2.0 mg/L，NAA的濃度為0.5 mg/L。此次試驗(yàn)接種30瓶，每瓶1個(gè)外植體，設(shè)3次重復(fù)。外植體生長30 d，調(diào)查統(tǒng)計(jì)葡萄無菌芽的誘導(dǎo)成功率。

1.3 增殖培養(yǎng)

將誘導(dǎo)成功的葡萄組培苗在用無菌操作條件下切下，接種到預(yù)先配制好的增殖培養(yǎng)基上。增殖培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基與啟動(dòng)培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基相同，6-BA的濃度分為4個(gè)梯度，從0.5 mg/L到2.0 mg/L，按照每個(gè)梯度增加0.5 mg/L設(shè)置，植物生長調(diào)節(jié)劑IBA的濃度選擇0.3 mg/L和0.5 mg/L。接種20瓶，每瓶4株苗，3次重復(fù)。生長30 d，調(diào)查統(tǒng)計(jì)組培苗的平均增殖系數(shù)和平均株高，篩選出適合組培苗增殖的6-BA與IBA濃度組合。

1.4 生根培養(yǎng)

將增殖培養(yǎng)基上生長30 d的組培苗，接種到生根培養(yǎng)基上。生根培養(yǎng)基選用1/2B5，IBA濃度設(shè)置3個(gè)梯度水平（從0.5 mg/L到1.5 mg/L，按照每個(gè)梯度增加0.5 mg/L設(shè)置），NAA濃度設(shè)置3個(gè)濃度（從0.1 mg/L到0.3 mg/L）。每處理接種20瓶，每瓶4株，3次重復(fù)。生長28 d，調(diào)查統(tǒng)計(jì)平均每株組培苗的生根數(shù)、平均根長和平均生根率，篩選出適合組培苗生根的IBA與NAA濃度組合。

1.5 培養(yǎng)條件

啟動(dòng)培養(yǎng)和增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基均添加白砂糖30 g/L，生根培養(yǎng)基添加白砂糖20 g/L，每升培養(yǎng)基添加瓊脂粉6.5 g，培養(yǎng)基pH值調(diào)整為6.5。組培苗室的室內(nèi)溫度控制在（25±1）℃，光照時(shí)間每天14 h，光照強(qiáng)度為培養(yǎng)架正常兩根日光燈管（距離組培瓶40 cm）。

2 結(jié)果與分析

2.1 啟動(dòng)培養(yǎng)

在葡萄組培苗誘導(dǎo)過程中，莖段基部先形成愈傷組織，然后腋芽開始萌發(fā)，一般15 d可以看到外植體芽長到1 cm左右，25 d外植體芽長到3 cm長，并且整個(gè)外植體沒有細(xì)菌和霉菌污染，就確定為外植體芽誘導(dǎo)成功。從表1可看出，隨著植物生長調(diào)節(jié)劑6-BA濃度的不斷升高，芽的誘導(dǎo)率先升高后下降；葡萄成芽率最高為76.7%，此時(shí)6-BA的濃度為1.5 mg/L。在6-BA濃度為2.0 mg/L時(shí)，莖段基部愈傷組織增多，影響芽的誘導(dǎo)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，篩選出最佳培養(yǎng)基及植物生長調(diào)節(jié)劑配比為B5+6-BA（1.5 mg/L）+NAA（0.5mg/L）。

表1 葡萄陽光玫瑰的啟動(dòng)培養(yǎng)

2.2 增殖培養(yǎng)

從表2可看出，將經(jīng)過啟動(dòng)培養(yǎng)的芽接種到增殖培養(yǎng)基上，當(dāng)IBA濃度為0.3 mg/L時(shí)，隨著6-BA濃度的升高，陽光玫瑰葡萄的增殖系數(shù)不斷升高，平均株高先降低后升高再降低；當(dāng)IBA濃度為0.5 mg/L時(shí)，隨著6-BA濃度的升高，陽光玫瑰葡萄的增殖系數(shù)先升高后降低，平均株高先升高后降低。當(dāng)6-BA相同時(shí)，除了6-BA濃度為2.0 mg/L時(shí)，植物生長調(diào)節(jié)劑IBA濃度為0.3 mg/L的增殖系數(shù)高于IBA濃度為0.5 mg/L的增殖系數(shù)，其余均為IBA濃度為0.5 mg/L的增殖系數(shù)高于IBA濃度為0.3 mg/L的增殖系數(shù)。

表2 陽光玫瑰葡萄的增殖培養(yǎng)

2.3 生根培養(yǎng)

在增殖培養(yǎng)基上生長的叢生芽長到3 cm以上時(shí)，可以轉(zhuǎn)接到葡萄生根培養(yǎng)基上。葡萄組培苗在生根培養(yǎng)基中10 d有根眼出現(xiàn)，20 d根可長到2 cm左右，根數(shù)2～4條。由表3可看出，在IBA相同濃度下，隨著NAA濃度的升高，葡萄組培苗的平均生根條數(shù)、生根率和平均根長均呈現(xiàn)不斷升高趨勢；在NAA相同濃度下，隨著IBA濃度的不斷升高，平均生根條數(shù)呈現(xiàn)先升高后降低，平均根長表現(xiàn)為先升高后降低；NAA濃度為0.1 mg/L和0.2 mg/L時(shí)，隨IBA濃度的不斷升高，生根率呈現(xiàn)為不斷升高；NAA濃度為0.3 mg/L時(shí)，隨IBA濃度的升高，生根率呈現(xiàn)為先升高后下降。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，1/2B5+IBA（1.0mg/L）+NAA（0.3mg/L）的培養(yǎng)基最適合陽光玫瑰葡萄生根，生根率達(dá)到96.5%。

表3 陽光玫瑰葡萄的生根培養(yǎng)

3 結(jié)語

通過對陽光玫瑰葡萄當(dāng)年生莖段進(jìn)行組培快繁試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，最佳外植體芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為B5添加6-BA（1.5 mg/L）和NAA（0.5 mg/L），最適合的增殖培養(yǎng)基為B5添加植物生長調(diào)節(jié)劑6-BA（1.5 mg/L）和IBA（0.5 mg/L），最適合的生根培養(yǎng)基為B5添加植物生長調(diào)節(jié)劑IBA（1.0 mg/L）和NAA（0.3 mg/L）。