王 瑤，袁星星，田春燕，李竹英

（1. 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040；2. 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040；3. 黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院南崗分院，黑龍江哈爾濱 150006）

哮喘是一種由多種炎癥細(xì)胞、結(jié)構(gòu)細(xì)胞及細(xì)胞組份共同參與的慢性異質(zhì)性疾病，以氣道炎癥、氣道高反應(yīng)性和可逆性氣流受限為主要特征［1］。據(jù)調(diào)查結(jié)果顯示，全球每年因哮喘死亡的人數(shù)高達(dá)38萬(wàn)，并且隨著工業(yè)化的發(fā)展和環(huán)境污染的加劇還在不斷增加，因此哮喘已成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一［2，3］。一項(xiàng)納入67 項(xiàng)橫斷面研究的薈萃分析結(jié)果顯示，我國(guó)成人哮喘的患病率為1.81%，并且呈現(xiàn)逐年升高的趨勢(shì)［4］。因此，有效控制哮喘的發(fā)病對(duì)于提高哮喘患者生存質(zhì)量和減輕社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)具有重要的意義。

巨噬細(xì)胞作為抵御病原微生物入侵的第一道防線，能夠通過(guò)多種途徑在宿主防御、炎癥反應(yīng)和組織修復(fù)中發(fā)揮重要的作用［5］。肺組織巨噬細(xì)胞是呼吸系統(tǒng)中重要的免疫細(xì)胞之一，通過(guò)極化成不同的表型從而參與炎癥的發(fā)生與控制［6］。Ⅱ型固有淋巴細(xì)胞（type 2 innate lymphoid cells，ILC2）是先天免疫系統(tǒng)中重要的效應(yīng)細(xì)胞，有研究證實(shí)其能夠通過(guò)調(diào)控肺泡巨噬細(xì)胞的M2 型極化，從而促進(jìn)肺上皮干細(xì)胞的增殖和分化和肺組織發(fā)育［7-9］。因此，本研究通過(guò)觀察哮喘小鼠肺組織中ILC2 和M2 型肺泡巨噬細(xì)胞數(shù)量的變化，從而進(jìn)一步明確平喘顆粒抑制哮喘氣道炎癥、改善氣道重塑的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)C57BL/6 小鼠（雌性，6～8 周齡），體質(zhì)量18～20 g，購(gòu)于北京Charles River 公司（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證：SCXK（京）2016-0011）。飼養(yǎng)條件：溫度：23℃～25℃，濕度：46%～56%，自由飲水、攝食，同時(shí)給予光照12 h。實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格遵循科技部頒發(fā)的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)》中的有關(guān)規(guī)定［10］。

1.2 藥物與試劑

平喘顆粒（組成：淫羊藿、炙麻黃、太子參、黃芪、五味子、款冬花、地龍、罌粟殼和知母按照4∶2∶3∶3∶3∶3∶2∶1∶2 的比例），實(shí)驗(yàn)灌胃前制備成含藥量為1 080 g/L 的溶液；氫氧化鋁佐劑購(gòu)于美國(guó)賽默飛公司（貨號(hào)：77161）；卵清蛋白購(gòu)于美國(guó)Sigma公司（貨號(hào)：A5253，純度：62%～88%）；抗白介素33（interleukin 33，IL-33）、腫瘤發(fā)生抑制蛋白2（suppression of tumorigenicity 2，ST2）、Linage、干 細(xì)胞 抗 原1（stem cell antigen 1，SCA-1）、CD90.2、CD11b、F4/80、CD206 和 炎 癥 區(qū) 域（found in inflammatory zone 1，F(xiàn)IZZ1）抗體均購(gòu)于美國(guó)Abcam 公 司（貨 號(hào)：ab187060、ab25877、ab93898、ab236486，ab269343，ab184307，ab16911，ab125028、ab271225）；抗精氨酸酶-1（arginase-1，Arg1）、β-actin抗體和辣根過(guò)氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標(biāo)記的二抗均購(gòu)于美國(guó)CST 公司（貨號(hào)：#13120、#93668、#4970、#7076）；蘇木素伊紅染色試劑盒（Hematoxylin-Eosin，HE）、過(guò)碘酸-雪夫染色液試劑盒（periodic acid schiff，PAS）和Masson 三色染色試劑盒均購(gòu)于北京索萊寶科技有限公司（貨號(hào)：G1120、G1281、G1340）；小 鼠IL-4、IL-5、IL-13 和IL-33 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）試劑盒購(gòu)于江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司（貨號(hào)：MM-0165M2、MM-0164M2、MM-0173M2MM-0935M2）；SYBR Premix Ex Taq 試劑盒和轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)于日本Takara 公司（貨號(hào)：RR420、639503）。

1.3 方法

1.3.1 分組與造模 小鼠按照體重隨機(jī)分為空白組、模型組、平喘顆粒組和IL-33 組，每組10 只。除空白組外，余下3 組小鼠參照課題組前期研究造模的方法構(gòu)建哮喘小鼠模型［11］，具體方法如下：分別于實(shí)驗(yàn)的第1 天、第7 天和第14 天將含有2.5 mg 的氫氧化鋁佐劑和25 μg 的OVA 的生理鹽水250 μL腹腔注射，并于實(shí)驗(yàn)的21～27 d 采用2%OVA 連續(xù)霧化激發(fā)，1 次/d，每次30 min。而空白組小鼠則給予等劑量的生理鹽水腹腔注射和霧化替代致敏和激發(fā)。同時(shí)，分別于實(shí)驗(yàn)的第1 天起，各組給予相應(yīng)的藥物進(jìn)行干預(yù)，其中平喘顆粒組給予31.2 g/kg 的平喘顆粒水溶液進(jìn)行灌胃治療，IL-33 組于第1 天、第7 天 和 第14 天 致 敏 后1 h 給 予10 μg/kg 的IL33 中和抗體進(jìn)行氣管滴注，而空白組和模型組小鼠則給予等體積的生理鹽水灌胃和氣管滴注替代治療，每日一次，連續(xù)治療14 d。各組小鼠于末次霧化激發(fā)后24 h，以1%戊巴比妥鈉40 mg/kg 腹腔注射麻醉后收集肺泡灌洗和肺組織用于指標(biāo)檢測(cè)。

1.3.2 肺組織病理學(xué) 取右肺組織固定于10%甲醛中，24 h 后乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋后制備切片。按照染色試劑盒說(shuō)明書分別進(jìn)行HE、PAS 和Masson 染色，并在光鏡下觀察肺組織病理學(xué)改變。參照文獻(xiàn)［11］中方法，通過(guò)HE 染色評(píng)估支氣管炎性細(xì)胞浸潤(rùn)并對(duì)其進(jìn)行評(píng)分；同時(shí)，采用Image J 軟件計(jì)算PAS 陽(yáng)性染色面積和氣道膠原染色面積，并對(duì)其進(jìn)行評(píng)分。

1.3.3 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn) 將收集到的肺泡灌洗液靜置后1 500 r/min 離心10 min，取上清，采用ELISA 法檢測(cè)各組小鼠肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、IL-13 和IL-33 的含量。實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格參照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.3.4 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR） 取適量肺組織，加入預(yù)冷的Trizol 溶液提取總RNA，凝膠電泳和分光光度計(jì)檢測(cè)RNA分子量和純度。取8 μL 總RNA，加入反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液后42℃孵育60 min 合成cDNA。以cDNA 為模板進(jìn)行擴(kuò)增，按照SYBR Premix Ex Taq 試劑盒說(shuō)明書將各試劑進(jìn)行混勻后上機(jī)檢測(cè)。PCR 引物序列如 下，IL-4：上 游：5′-TACCAGGAGCCA TATCCACGGATG-3′，下游：5′-TGTGGTGTTCTTCGTTGCTGTGAG-3′，長(zhǎng) 度183 bp；IL-5：上 游：5′-GGCCACTGCCATGGAGATTCC-3′，下 游：5′-AGCCTCAT CGTCTCATTGCTTGTC-3′，長(zhǎng) 度340 bp；IL-13：上 游：5′-CGGCAGCATGGTAT GGAGTGTG-3′，下 游：5′-GGAGGCTGGAGACCGTAGTGG-3′，長(zhǎng) 度123 bp；IL-33：上游：5′-CAATCAGGCGACGGTGTGGATG-3′，下 游 ： 5′-GGAGTAGTCCTTGTC GTTGGCATG-3′，長(zhǎng) 度 247 bp；GAPDH：上 游：5′-GGGTGTGAACCACGAGA AAT-3′，下 游：5′-CCTTCCACAATGCCAAAGTT-3′，長(zhǎng)度191 bp。擴(kuò)增條件：95 ℃30 s，95 ℃5 s，60 ℃30 s，共40個(gè)循環(huán)。以GAPDH為內(nèi)參基因，以目標(biāo)基因與GAPDH擴(kuò)增產(chǎn)物的2–ΔΔCt比值分析計(jì)算各個(gè)組的表達(dá)情況。

1.3.5 流式細(xì)胞術(shù) 取適量肺組織研磨后以細(xì)胞過(guò)濾器過(guò)濾后置于EP 管中，加入銨-氯-鉀裂解緩沖液與冰上裂解細(xì)胞懸液中的紅細(xì)胞，離心棄上清，加入1 mL 的磷酸緩沖鹽溶液洗滌后繼續(xù)離心棄上清。加入磷酸緩沖鹽溶液以制備單細(xì)胞懸液，并調(diào)整細(xì)胞濃度。分別以Linage、SCA-1 和CD90.2 標(biāo)記為ILC2，CD11b、F4/80 及CD206 標(biāo)記M2 型巨噬細(xì)胞，4 ℃避光孵育30 min。離心棄上清，加入200 μL磷酸緩沖鹽溶液后以40 μL 的多聚甲醛固定，上機(jī)檢測(cè)，并應(yīng)用CytExpert 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理及分析。

1.3.6 蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western blot） 取適量肺組織剪碎后冰上裂解，離心取上清，BCA 法測(cè)定蛋白濃度，上樣，電泳，轉(zhuǎn)膜，5%脫脂牛奶室溫封閉1 h，TBST 洗膜3 次，每次5 min，加入稀釋的ST-2，F(xiàn)IZZ1、Arg-1 和β-actin 抗體，4℃孵育過(guò)夜，TBST洗膜后加入HRP 標(biāo)記的二抗于37℃繼續(xù)孵育1 h，加入適量ECL 顯影，于凝膠成像系統(tǒng)中分析目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS23.0 軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）的形式表示。多組間的比較采用單因素方差分析（ANOVA），組間兩兩的比較采用LSD 檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 平喘顆粒對(duì)氣道炎癥及膠原沉積的影響

造模后小鼠氣道周圍可見(jiàn)大量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)伴有管腔狹窄，同時(shí)可見(jiàn)大量的杯狀細(xì)胞化生和膠原沉積，與空白組相比，模型組炎癥評(píng)分、PAS 評(píng)分和膠原染色面積明顯增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。平喘顆粒組和IL-33 組氣道周圍炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、杯狀細(xì)胞化生和膠原沉積情況明顯改善，其中炎癥評(píng)分、PAS 評(píng)分和膠原染色面積與模型組比較明顯降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)圖1、表1。

表1 平喘顆粒對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥及膠原沉積的影響（n=10，±s）Tab 1 Effect of Pingchuan granules on airway inflammation and collagen deposition in asthmatic mice（n=10，±s）

表1 平喘顆粒對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥及膠原沉積的影響（n=10，±s）Tab 1 Effect of Pingchuan granules on airway inflammation and collagen deposition in asthmatic mice（n=10，±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

組別空白組模型組平喘顆粒組IL-33 組膠原染色面積（%）2.30±0.18 11.87±1.53*4.45±0.31#4.18±0.29#279.005 0.000 FP炎癥評(píng)分（分）0.10±0.32 3.40±0.52*1.40±0.52#1.10±0.57#80.093 0.000 PAS 評(píng)分（分）0.20±0.42 3.00±0.67*1.50±0.71#1.00±0.67#35.468 0.000

圖1 平喘顆粒對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥及膠原沉積的影響Fig 1 Effect of Pingchuan granule on airway inflammation and collagen deposition in asthmatic mice

2.2 平喘顆粒對(duì)肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、IL-13 和IL-33 蛋白表達(dá)的影響

與空白組相比，模型組肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、IL-13 和IL-33 的含量顯著增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。平喘顆粒和IL-33 均能明顯抑制肺泡灌洗液中炎性細(xì)胞因子的含量，與模型組比較，平喘顆粒組和IL-33 組肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、IL-13 和IL-33 的含量明顯降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 平喘顆粒對(duì)肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、IL-13 和IL-33 蛋白表達(dá)的影響（pg/mL，n=10，±s）Tab 2 Effect of Pingchuan granules on IL-4，IL-5，IL-13 and IL-33 protein expression in alveolar lavage fluid（pg/mL，n=10，±s）

表2 平喘顆粒對(duì)肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、IL-13 和IL-33 蛋白表達(dá)的影響（pg/mL，n=10，±s）Tab 2 Effect of Pingchuan granules on IL-4，IL-5，IL-13 and IL-33 protein expression in alveolar lavage fluid（pg/mL，n=10，±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

組別空白組模型組平喘顆粒組IL-33 組IL-33 5.76±0.48 17.83±2.27*7.84±1.31#7.30±1.29#138.400 0.000 FP IL-4 0.60±0.16 2.18±0.34*1.36±0.21#1.23±0.15#81.437 0.000 IL-5 0.06±0.02 3.30±0.95*1.37±0.21#1.33±0.16#73.659 0.000 IL-13 2.16±0.23 12.39±1.05*4.49±0.32#4.62±0.22#613.416 0.000

2.3 平喘顆粒對(duì)肺組織中IL-4、IL-5、IL-13 和IL-33 mRNA 表達(dá)的影響

與肺泡灌洗液中炎癥細(xì)胞因子的趨勢(shì)相同，模型 組 肺 組 織 中IL-4、IL-5、IL-13和IL-33mRNA 的表達(dá)較空白組明顯增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而平喘顆粒組和IL-33 組肺組織中IL-4、IL-5、IL-13和IL-33mRNA 的表達(dá)明顯降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 平喘顆粒對(duì)肺組織中IL-4、IL-5、IL-13 和IL-33 mRNA 表達(dá)的影響（n=10，±s）Tab 3 Effect of Pingchuan Granules on the expression of IL-4，IL-5，IL-13 and IL-33 mRNA in lung tissue（n=10，±s）

表3 平喘顆粒對(duì)肺組織中IL-4、IL-5、IL-13 和IL-33 mRNA 表達(dá)的影響（n=10，±s）Tab 3 Effect of Pingchuan Granules on the expression of IL-4，IL-5，IL-13 and IL-33 mRNA in lung tissue（n=10，±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

組別空白組模型組平喘顆粒組IL-33 組IL-33 1.00±0.01 3.81±0.65*1.64±0.20#1.67±0.27#112.836 0.000 FP IL-4 1.00±0.01 3.81±0.43*2.28±0.34#2.27±0.39#118.041 0.000 IL-5 1.00±0.01 3.80±0.52*3.09±0.22#3.04±0.17#166.570 0.000 IL-13 1.00±0.02 5.18±1.03*2.76±0.27#2.75±0.28#96.930 0.000

2.4 平喘顆粒對(duì)肺組織中ILC2 和M2 型巨噬細(xì)胞數(shù)量的影響

與空白組比較，模型組小鼠肺組織中ILC2 和M2 型巨噬細(xì)胞的數(shù)量顯著增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。平喘顆粒和IL-33 均能明顯降低肺組織中ILC2 和M2 型巨噬細(xì)胞的數(shù)量，與模型組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)圖2、表4。

表4 平喘顆粒對(duì)肺組織中ILC2 和M2 型巨噬細(xì)胞數(shù)量的影響（%，n=10，±s）Tab 4 Effect of Pingchuan granules on the number of ILC2 and M2 macrophages in lung tissue（%，n=10，±s）

表4 平喘顆粒對(duì)肺組織中ILC2 和M2 型巨噬細(xì)胞數(shù)量的影響（%，n=10，±s）Tab 4 Effect of Pingchuan granules on the number of ILC2 and M2 macrophages in lung tissue（%，n=10，±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

組別空白組模型組平喘顆粒組IL-33 組M2 型巨噬細(xì)胞的數(shù)量5.96±0.43 12.04±2.26*7.39±0.61#7.74±0.69#44.627 0.000 FP ILC2 的數(shù)量3.47±0.21 9.69±0.90*5.37±0.43#5.31±0.27#253.573 0.000

圖2 平喘顆粒對(duì)肺組織中ILC2 和M2 型巨噬細(xì)胞數(shù)量的影響Fig 2 The effect of Pingchuan granule on the number of ILC2 and M2 macrophages in lung tissue

2.5 平喘顆粒對(duì)ST-2、FIZZ1 和Arg-1 蛋白表達(dá)的影響

與空白組相比，模型組肺組織中ST-2、FIZZ1和Arg-1 蛋白的表達(dá)顯著增加，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。平喘顆粒和IL-33 均能明顯降低肺組織中ST-2、FIZZ1 和Arg-1 蛋白的表達(dá)，與模型組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表5、圖3。

圖3 平喘顆粒對(duì)ST-2、FIZZ1 和Arg-1 蛋白表達(dá)的影響Fig 3 Effect of Pingchuan granules on the expression of ST-2，F(xiàn)IZZ1 and Arg-1 protein

表5 平喘顆粒對(duì)ST-2、FIZZ1 和Arg-1 蛋白表達(dá)的影響（n=10，±s）Tab 5 Effect of Pingchuan granules on ST-2，F(xiàn)IZZ1 and Arg-1 protein expression（n=10，±s）

表5 平喘顆粒對(duì)ST-2、FIZZ1 和Arg-1 蛋白表達(dá)的影響（n=10，±s）Tab 5 Effect of Pingchuan granules on ST-2，F(xiàn)IZZ1 and Arg-1 protein expression（n=10，±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05。

組別空白組模型組平喘顆粒組IL-33 組Arg-1/β-actin 0.33±0.03 0.79±0.12*0.49±0.12#0.58±0.13#32.599 0.000 FP ST-2/β-actin 0.22±0.07 0.90±0.17*0.46±0.17#0.33±0.19#253.573 0.000 FIZZ1/β-actin 0.14±0.04 0.77±0.11*0.27±0.12#0.30±0.14#36.369 0.000

3 討論

固有淋巴細(xì)胞（innate lymphoid cells，ILCs）是一類新發(fā)現(xiàn)的具有淋巴細(xì)胞特征而又不同于B 細(xì)胞和T 細(xì)胞的淋巴細(xì)胞群體，主要分布于淋巴器官、非淋巴器官、黏膜組織及血液中，作為Th2 的“鏡像細(xì)胞”在哮喘氣道炎癥中發(fā)揮著重要的作用［12］。ILC 起源于共同淋巴樣祖細(xì)胞并在多種細(xì)胞因子的作用下，經(jīng)過(guò)自然殺傷細(xì)胞前體細(xì)胞和共同輔助性固有淋巴樣細(xì)胞前體細(xì)胞階段后，最終發(fā)育成ILCs。根據(jù)轉(zhuǎn)錄因子的不同，ILCs 可分為ILC1、ILC2 和ILC3 三個(gè)亞群，其中ILC2 以不表達(dá)或者低表達(dá)Lineage 識(shí)別分子和高表達(dá)SCA1、CD90.2 和c-Kit 等 表 面 分 子 為 主 要 特 征［13-15］。ILC2 亞 群 通 過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子維甲酸相關(guān)孤兒受體γt（retinoid-related orphan receptor γt，RORγt）并 分 泌IL-4、IL-5和IL-13 等Th2 型炎性細(xì)胞因子從而影響哮喘的發(fā)生與發(fā)展。作為ILC2 的經(jīng)典活化因子，IL-33 通過(guò)與細(xì)胞表面的ST-2 受體結(jié)合，從而激活I(lǐng)LC2 并分泌大量Th2 型炎癥因子［16］。本研究結(jié)果顯示，平喘顆粒能夠減少哮喘小鼠模型肺泡灌洗液中和肺組織中IL-4、IL-5、IL-13 和IL-33 的表達(dá)，下調(diào)肺組織中ST-2 蛋白和ILC2 的數(shù)量，從而抑制ILC2 的活化。

巨噬細(xì)胞是肺組織中最豐富的免疫細(xì)胞群，主要包括肺間質(zhì)巨噬細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞，其中肺泡巨噬細(xì)胞與哮喘的關(guān)系最為密切［17］。免疫微環(huán)境對(duì)肺泡巨噬細(xì)胞的功能具有主要的作用，呼吸道過(guò)敏原通過(guò)激活肺上皮細(xì)胞或其他免疫細(xì)胞群從而釋放多種細(xì)胞因子影響肺泡巨噬細(xì)胞的遷移與極化。根據(jù)巨噬細(xì)胞激活的后的功能狀態(tài)，可以將其分為經(jīng)典激活型（M1 型）和替代激活型（M2 型）兩種類型，其中M2 型巨噬細(xì)胞主要由IL-4 和IL-13 誘導(dǎo)。有研究證實(shí)，M2 型巨噬細(xì)胞過(guò)度活化會(huì)增加炎癥細(xì)胞募集、增加黏液分泌以及氣道高反應(yīng)性，而抑制M2 巨噬細(xì)胞的活化能夠明顯減輕曲霉孢子所引起的氣道高反應(yīng)性和氣道炎癥［18］。此外，還有研究表示，M2 型巨噬細(xì)胞還可以通過(guò)高表達(dá)FIZZ1及Arg-1 從而參與哮喘氣道重塑［19］。因此研究巨噬細(xì)胞的極化在哮喘中的作用，尤其是平喘顆粒對(duì)M2 型巨噬細(xì)胞的影響，對(duì)了全面闡釋平喘顆粒抑制哮喘氣道重塑的作用具有十分重要的意義。本研究結(jié)果顯示，平喘顆粒能夠顯著降低肺組織中M2 型巨噬細(xì)胞的數(shù)量，同時(shí)下調(diào)肺組織中FIZZ1和Arg-1 蛋白的表達(dá)。

平喘顆粒由淫羊藿、炙麻黃、太子參、黃芪、五味子、款冬花、地龍、罌粟殼和知母組成，是導(dǎo)師李竹英教授治療哮喘緩解期的經(jīng)驗(yàn)處方，具有益氣溫陽(yáng)、化痰平喘的功效［20］。方中以炙麻黃和淫羊藿共同作為君藥，具有宣肺溫陽(yáng)平喘的作用；以太子參、黃芪補(bǔ)氣生津，不僅可助君藥溫陽(yáng)又不會(huì)引起津液耗傷，共為臣藥。五味子、款冬花、地龍斂肺止咳、化痰平喘，作為佐藥。罌粟殼助五味子斂肺止咳，知母潤(rùn)肺止咳，專入肺腎二經(jīng)，共為使藥。本研究結(jié)果顯示，平喘顆粒能夠降低哮喘小鼠模型氣道炎癥水平，并且抑制上皮杯狀細(xì)胞化生和膠原沉積，對(duì)氣道重塑具有較好的改善作用。

綜上所述，平喘顆?？梢愿纳葡瓪獾乐厮?，其作用機(jī)制主要是通過(guò)抑制ILC2 介導(dǎo)的M2 型巨噬細(xì)胞極化實(shí)現(xiàn)的。

作者貢獻(xiàn)度說(shuō)明：

王瑤：指標(biāo)檢測(cè)及論文撰寫；袁星星：動(dòng)物造模及藥物干預(yù)，數(shù)據(jù)分析；田春燕：動(dòng)物造模及藥物干預(yù)；李竹英：課題設(shè)計(jì)及校審。