亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        反相離子對-高效液相色譜法同時測定葛根芩連湯中13種有效成分及其在配伍機(jī)制研究中的應(yīng)用

        2021-08-24 12:02:36孫曉祝趙云麗于治國
        中草藥 2021年16期
        關(guān)鍵詞:全方葛根芩組方

        張 也,孫曉祝,于 淼,趙云麗,于治國

        反相離子對-高效液相色譜法同時測定葛根芩連湯中13種有效成分及其在配伍機(jī)制研究中的應(yīng)用

        張 也,孫曉祝,于 淼,趙云麗,于治國*

        沈陽藥科大學(xué)藥學(xué)院,遼寧 沈陽 110016

        研究葛根芩連湯不同組方中活性成分含量的差異,揭示其藥效物質(zhì)的變化規(guī)律,進(jìn)而從化學(xué)層面探究葛根芩連湯的配伍規(guī)律。采用反相離子對-高效液相色譜法測定葛根芩連湯不同組方配伍中13種有效成分(葛根素、大豆苷元、黃芩苷、漢黃芩苷、漢黃芩素、小檗堿、巴馬汀、藥根堿、黃連堿、甘草素、異甘草苷、甘草酸和甘草次酸)的含量。色譜柱為Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相為3.5 mmol/L庚烷磺酸鈉溶液(含體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸)-乙腈(含體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸),梯度洗脫,體積流量為1 mL/min;檢測波長為270 nm;柱溫35 ℃;進(jìn)樣量為20 μL。葛根芩連湯中13種有效成分均基線分離、峰形對稱,經(jīng)方法學(xué)驗證各項效能指標(biāo)均符合定量分析要求。不同組方配伍中活性成分的含量變化規(guī)律:葛根與黃芩、黃連配伍時,葛根中的葛根素與大豆苷元以及黃芩中的黃芩苷含量均顯著增加;黃芩、黃連與炙甘草配伍時,其中的黃芩苷、漢黃芩苷、漢黃芩素和小檗堿等有效成分均有增加,同時甘草中的甘草酸亦有顯著增加;全方配伍時各有效成分均有不同程度增加。所建立的方法可用于葛根芩連湯及其組方的配伍規(guī)律研究。葛根芩連湯全方配伍對葛根與黃芩、黃連及炙甘草中有效成分的溶出均起到促進(jìn)作用。其中,臣藥黃芩、黃連能顯著促進(jìn)君藥葛根中有效成分的溶出,起到輔佐君藥的作用;而佐使藥炙甘草不僅可促進(jìn)臣藥中有效成分的溶出,同時可在一定程度上增強(qiáng)臣藥對君藥的輔佐作用,起到協(xié)調(diào)全方、增效減毒的作用。

        葛根芩連湯;組方配伍;反相離子對-高效液相色譜法;葛根;黃芩;黃連;甘草;葛根素;大豆苷元;黃芩苷;漢黃芩苷;漢黃芩素;小檗堿;巴馬汀;藥根堿;黃連堿;甘草素;異甘草苷;甘草酸;甘草次酸

        中藥方劑是中藥臨床應(yīng)用的主要形式,是其辨證施治的重要環(huán)節(jié)。方劑的配伍理論是中藥復(fù)方用藥的核心問題,其基本理論包含“七情合和”和“君臣佐使”理論。所謂“君臣佐使”,是從多元用藥的角度來論述各藥在方劑中的地位及配伍后的性–效變化規(guī)律。目前,針對配伍規(guī)律的研究已成為中藥方劑研究的熱點,揭示方劑配伍規(guī)律的科學(xué)內(nèi)涵已成為中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究的主要構(gòu)成部分[1]。深入探究分析方劑配伍規(guī)律這一重要環(huán)節(jié),有利于中醫(yī)藥學(xué)朝著現(xiàn)代化的方向發(fā)展并加快中醫(yī)藥學(xué)的現(xiàn)代化速度。

        方劑治療各種病癥的功效在于其含有進(jìn)入人體后能發(fā)揮療效的化學(xué)成分作為物質(zhì)基礎(chǔ)。不同的方劑配伍存在不同的藥效物質(zhì),且方劑中的藥效物質(zhì)不等于組成該方所用各單味藥的有效物質(zhì)的簡單加和[2]。這是由于方劑在煎煮等制劑過程中,每種藥味的成分會相互影響,產(chǎn)生增溶、助溶或沉淀,甚至水解、氧化等物理或化學(xué)作用而改變藥效物質(zhì)的溶出度,組成的各單味藥所含的化學(xué)成分之間會發(fā)生物理或化學(xué)作用(如增溶、鹽化、絡(luò)合、氧化、水解和還原),進(jìn)而導(dǎo)致這些成分量與質(zhì)的變化,從而影響到方劑臨床療效[3]。故研究中藥方劑組方的配伍變化對其藥效物質(zhì)的影響可從化學(xué)層面探索方劑組方的配伍規(guī)律。近幾年,基于葛根芩連湯(Gegen Qinlian Decoction,GQD)的配伍機(jī)制研究,主要采用拆方指紋圖譜[4]、藥代動力學(xué)[5]、Caco-2細(xì)胞模型[6]、體外腸吸收特征[7]等研究方法,對于GQD抗腹瀉[8]、抗菌、抗病毒、解熱[9]以及治療糖尿病等藥理作用進(jìn)行配伍機(jī)制研究。針對于煎煮過程中GQD各單味藥材中有效成分的溶出差異及相互影響,王鈺樂[11-13]等分別對其主要成分葛根素、黃芩苷、小檗堿及甘草次酸在不同配伍條件下煎煮液含量的差異,結(jié)果顯示黃芩與黃連共同煎煮,煎煮液會產(chǎn)生大量沉淀,由于沉淀的夾帶與包夾作用可能導(dǎo)致有效成分含量的減少;另外,黃連中的小檗堿等生物堿成分與黃芩中的黃芩苷及甘草中的甘草酸等成分都會在煎煮中生成難溶性鹽而形成沉淀。綜合已有測定分析方法,對于其不同藥味有效成分的測定需采用不同的色譜條件及檢測波長,并且不同學(xué)者采用不同組方配比及煎煮條件,可導(dǎo)致結(jié)果的差異。因此,為探索方劑的配伍規(guī)律,建立可同時測定多種有效成分的測定分析方法以及基于體外煎煮過程中GQD有效成分含量的變化規(guī)律仍有進(jìn)一步研究的必要。

        本實驗采用離子對-反相高效液相色譜法可對GQD中13種有效成分進(jìn)行同時測定,探討方劑配伍對其主要有效成分的影響。本研究將方劑拆分為葛根組(君藥)、黃芩/黃連組(臣藥)、葛根-黃芩/黃連組(君藥-臣藥)、炙甘草組(佐使藥)、黃芩/黃連-炙甘草組(臣藥-佐使藥)5個組方及GQD全方組,以探索臣藥(黃芩/黃連)對君臣藥(葛根)以及佐使藥(甘草)對君藥與臣藥的配伍影響,進(jìn)而從化學(xué)層面探索GQD的配伍規(guī)律。

        1 儀器與材料

        LC-10A型高效液相色譜系統(tǒng)、LC-10Avp輸液泵、SPD-10Avp紫外檢測器、SIL-10AF自動進(jìn)樣器,日本Shimadzu公司;BS110型電子分析天平,北京Sartorius儀器系統(tǒng)有限公司;AB135-S電子天平,瑞士Mettler-Toledo公司;EYEL4型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,上海愛朗儀器有限公司;FD-1D-50型真空冷凍干燥器,北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司;KQ-250E超聲波清洗儀,昆山市超聲儀器有限公司;GENIUS 3渦旋混合器,德國IKA公司;Research移液器,2~20 μL、20~200 μL、100~1000 μL,德國Eppendorf公司。

        甲酸,色譜級,天津科密歐化學(xué)試劑有限公司;乙腈,色譜級,天津市康科德科技有限公司;庚烷磺酸鈉,色譜級,日本東京化成工業(yè)株式會社;水,純化水,杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司;對照品葛根素(批號MUST-16111007)、大豆苷元(批號MUST- 17101202)、黃芩苷(批號MUST-16111113)、漢黃芩苷(批號MUST-16111611)、漢黃芩素(批號MUST-17062507)、小檗堿(批號MUST-16111115)、巴馬?。ㄅ朚UST-17022604)、藥根堿(批號MUST-17041801)、黃連堿(批號MUST-17072010),質(zhì)量分?jǐn)?shù)均>98.0%,成都曼思特生物科技有限公司;對照品甘草素(批號131127)、異甘草苷(批號140827)、甘草酸(批號150328)、甘草次酸(批號150325),質(zhì)量分?jǐn)?shù)均>98.0%,成都克洛瑪生物技術(shù)有限公司。葛根、黃芩、黃連、炙甘草均購于國大藥房(沈陽),分別經(jīng)沈陽藥科大學(xué)藥學(xué)院于治國教授鑒定為豆科葛屬植物野葛(Willd.) Ohwi的干燥根、唇形科黃芩屬植物黃芩Georgi的干燥根、毛莨科黃連屬植物黃連Franch.(味連)的干燥根莖、豆科甘草屬植物甘草Fisch.的干燥根和根莖的炮制加工品。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 色譜條件

        色譜柱為Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);柱溫35 ℃;流動相為3.5 mmol/L庚烷磺酸鈉溶液(含0.1%甲酸,A)-乙腈(含0.1%甲酸,B),梯度洗脫程序見表1;體積流量1 mL/min;檢測波長270 nm;進(jìn)樣量20 μL。

        2.2 溶液的制備

        2.2.1 對照品溶液的制備

        (1)對照品儲備液的制備:取葛根素、大豆苷元、黃芩苷、漢黃芩苷、漢黃芩素、小檗堿、巴馬汀、藥根堿、黃連堿、甘草素、異甘草苷、甘草酸和甘草次酸各約10 mg,精密稱定,分置10 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,得質(zhì)量濃度分別為1.00、1.01、1.00、1.00、1.00、1.01、1.00、1.00、1.00、1.01、1.00、0.98、0.90 mg/mL的各對照品儲備液,于4 ℃冰箱中保存。

        表1 不同配伍的GQD含量測定梯度洗脫程序

        (2)混合對照品溶液的制備:分別精密吸取上述各對照品儲備液2.00 mL(葛根素)、0.20 mL(大豆苷元)、1.00 mL(黃芩苷)、0.50 mL(漢黃芩苷)、0.20 mL(漢黃芩素)、1.00 mL(小檗堿)、0.50 mL(巴馬?。?、0.05 mL(藥根堿)、0.50 mL(黃連堿)、0.20 mL(甘草素)、0.20 mL(異甘草苷)、0.50 mL(甘草酸)、0.20 mL(甘草次酸),置于同一100 mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度并搖勻,制成混合對照品溶液。混合對照品溶液中各組分的質(zhì)量濃度分別為含200 μg/mL(葛根素)、20.2 μg/mL(大豆苷元)、100 μg/mL(黃芩苷)、50 μg/mL(漢黃芩苷)、20 μg/mL(漢黃芩素)、101 μg/mL(小檗堿)、50 μg/mL(巴馬?。? μg/mL(藥根堿)、50 μg/mL(黃連堿)、20.2 μg/mL(甘草素)、20 μg/mL(異甘草苷)、49 μg/mL(甘草酸)和18 μg/mL(甘草次酸)。

        2.2.2 GQD組方提取物及供試品溶液的制備 全方160 g,方中各味藥材比例(葛根-黃芩-黃連-甘草)為8∶3∶3∶2。參照《中國藥典》2020年版一部葛根芩連丸[14]的“制法”操作:取黃芩、黃連各30 g,分別加入20倍量的50%乙醇,浸泡24 h后,再用20倍量50%乙醇滲漉,滲漉液減壓回收乙醇并適當(dāng)濃縮,備用。另取葛根80 g,加入8倍量水,煎煮(回流)30 min;加入黃芩和黃連滲漉后的藥渣及炙甘草20 g,再加水至全方10倍量,繼續(xù)煎煮1.5 h,分取煎液;藥渣再加入10倍量水,繼續(xù)煎煮1.5 h,分取煎液;合并煎液,濾過,濃縮,加入黃芩和黃連的滲漉濃縮液。將濃縮液冷凍干燥成粉末,得各組方提取物。各組方提取物的產(chǎn)率約為40%(表2)。

        不同配伍組方煎煮時,根據(jù)各組方所含藥材,同法制備。

        精密稱取GQD各組方提取物約200 mg,置100 mL量瓶中,加入甲醇約80 mL,使其溶解,超聲(250 W、40 kHz)處理30 min,用甲醇稀釋至刻度,混勻,靜置,濾過,棄去初濾液,取續(xù)濾液,作為GQD不同組方的供試品溶液。

        2.3 方法學(xué)考察

        2.3.1 特異性試驗 取空白溶劑甲醇,以及“2.2”項下制備的混合對照品溶液和GQD全方(GQLD組)供試品溶液各20 μL,按照“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣檢測,記錄色譜圖見圖1??梢?,13種成分色譜峰分離度良好,空白溶劑及方劑中其他組分對測定無干擾。

        表2 不同配伍的GQD組方提取物產(chǎn)率

        2.3.2 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2”項下制備的混合對照品溶液0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mL,分別置于10 mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,即得到系列質(zhì)量濃度的對照品溶液。按照“2.1”項下色譜條件分別進(jìn)樣20 μL,記錄色譜圖。以各成分進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)()、峰面積為縱坐標(biāo)(),用最小二乘法進(jìn)行線性回歸,得回歸方程及線性范圍見表3。同時將混合對照品溶液稀釋后進(jìn)樣,根據(jù)峰高以信噪比(/)3確定檢測限(LOD),/10確定定量限(LOQ),結(jié)果如表3所示。

        A-空白溶劑 B-混合對照品溶液 C-葛根組 D-黃芩/黃連組 E-葛根-黃芩/黃連組 F-炙甘草組 G-黃芩/黃連-炙甘草組 H-GQD組 1-葛根素 2-黃芩苷 3-異甘草苷 4-大豆苷元 5-甘草素 6-漢黃芩苷 7-巴馬汀 8-黃連堿 9-藥根堿 10-小檗堿 11-甘草酸 12-甘草次酸 13-漢黃芩素

        2.3.3 精密度試驗 取按照“2.2.1”項下方法制備的混合對照品溶液,按照“2.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄色譜圖,計算13種成分峰面積的RSD值,結(jié)果見表4。13種成分峰面積的RSD值在0.8%~2.7%,結(jié)果表明儀器精密度良好。

        2.3.4 重復(fù)性試驗 取GQD全方提取物6份,分別按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,按照“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣,計算質(zhì)量分?jǐn)?shù)與RSD值,結(jié)果見表4。13種成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD值在0.9%~3.1%,表明該方法重復(fù)性良好。

        2.3.5 穩(wěn)定性試驗 取GQD全方提取物,按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,置于自動進(jìn)樣室(4 ℃)中,按照“2.1”項下色譜條件,分別于0、2、4、8、12、24 h后進(jìn)樣,記錄色譜圖,計算各成分峰面積的RSD值,結(jié)果見表4。13種成分峰面積的RSD值均在1.1%~2.8%,表明供試品溶液在自動進(jìn)樣室放置24 h內(nèi)的穩(wěn)定性良好。

        表3 GQD中13種成分線性關(guān)系、檢測限及定量限

        表4 GQD中13種成分的精密度、重復(fù)性與加樣回收率實驗結(jié)果

        2.3.6 加樣回收率試驗 分別精密稱取葛根素119.5 mg、大豆苷元3.69 mg、黃芩苷83.24 mg、漢黃芩苷24.46 mg、漢黃芩素1.23 mg、小檗堿48.25 mg、巴馬汀14.12 mg、藥根堿9.18 mg、黃連堿14.50 mg、甘草素10.90 mg、異甘草苷10.25 mg、甘草酸12.21 mg和甘草次酸1.26 mg,置于同一10 mL量瓶中,以甲醇溶解并定容至刻度,作為加標(biāo)溶液。精密稱取已測定的GQD全方,制備配伍提取物200 mg,平行取6份,置于100 mL量瓶中,各加入加標(biāo)溶液1 mL。按照“2.2.2”項下方法處理樣品,再按照“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣,記錄色譜圖,用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算13種成分的含量,扣除本底量,根據(jù)加入量計算回收率,結(jié)果見表4。各成分平均加樣回收率為98.20%~101.28%,RSD值在0.89%~3.40%,表明方法準(zhǔn)確度良好。

        2.4 GQD各組方提取物的含量測定

        取GQD不同配伍組方提取物各3份,按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,再按照“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析,得到色譜圖。按照“2.3.2”項下回歸方程計算含量,并按照全方的生藥量折算,計算每克生藥量所含有效成分的質(zhì)量,結(jié)果見表5。

        表5 GQD各組方提取物中有效成分的含量 (, n = 3)

        與單方組比較:*<0.05**<0.01;與葛根-黃芩/黃連組比較:#<0.05##<0.01;與黃芩/黃連-炙甘草組比較:v<0.05vv<0.01

        *< 0.05**< 0.01single herb;#< 0.05##< 0.01GG-QL group;v< 0.05vv< 0.01QL-GC group

        可見,不同組方配伍中活性成分的含量變化規(guī)律:葛根與黃芩、黃連配伍時,葛根中的葛根素與大豆苷元以及黃芩中的黃芩苷含量均顯著增加;黃芩、黃連與炙甘草配伍時,其中的黃芩苷、漢黃芩苷、漢黃芩素和小檗堿等有效成分均有增加,同時甘草中的甘草酸亦有顯著增加;全方配伍時各有效成分均有不同程度增加。

        3 討論

        本研究建立離子對高效液相色譜法試圖從藥材的煎煮制備過程中,以GQD中的各有效成分的溶出量解釋方劑配伍的合理性,為從化學(xué)層面揭示方劑“君臣佐使”的配伍規(guī)律進(jìn)行了有意義的嘗試。

        3.1 分析方法的建立與優(yōu)化

        反相離子對色譜法通過在流動相中加入與待測組分離子電荷相反的離子對試劑以形成離子對,從而改善其保留與分離[15-16]。對于生物堿類弱堿性的藥物,常用烷基磺酸鹽陰離子對試劑,本研究對于離子對試劑進(jìn)行了考察與優(yōu)化,分別對常用的3種離子對試劑戊烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉、十二烷基磺酸鈉進(jìn)行試驗,使用庚烷磺酸鈉時,出峰時間適宜且與其他成分可良好分離。而后對其使用濃度進(jìn)行了優(yōu)化,考察了2.5~5.0 mmol/L的分離效率,結(jié)果顯示在其濃度為3.5 mmol/L時,生物堿之間的可獲得基線分離、色譜峰對稱性良好、且經(jīng)方法學(xué)驗證各項效能指標(biāo)均符合定量分析要求。

        本研究建立的分析方法-離子對反相液相色譜法不僅能夠有效地解決小檗堿、巴馬汀、藥根堿、黃連堿等生物堿成分色譜峰的拖尾問題,并可同時測定GQD中13種成分,包括不同種類的化合物,黃酮類、異黃酮類、異喹啉類生物堿、皂苷類等成分,為含有相同藥味的中藥方劑復(fù)雜藥效成分的測定提供方法參考。

        3.2 GQD制備方法選擇

        GQD出自于張仲景的《傷寒論》,該方由葛根、黃芩、黃連和甘草4味中藥組成,具有解表清里,升清止痢之功效。其中葛根為君藥,其主要成分為葛根素(異黃酮類),既可解表退熱,又能升發(fā)脾胃清陽之氣而止利;以苦寒的黃芩、黃連為臣藥,黃芩的主要成分為黃芩苷、漢黃芩苷,漢黃芩素(黃酮類、黃酮苷類及黃酮醇類);黃連的主要成分為小檗堿、巴馬汀、藥根堿和黃連堿(異喹啉類生物堿),具有清熱燥濕、直清里熱之功效;甘草為佐使藥,其主要成分為甘草素、異甘草苷、甘草酸和甘草次酸(甘草黃酮類、甘草皂苷類),以協(xié)調(diào)諸藥。四藥配伍,表里同治,共成清熱解肌之劑。

        關(guān)于GQD處方及其煎煮方法,《傷寒論》中記載全方組成為葛根半斤,黃芩三兩,黃連三兩,炙甘草二兩。在現(xiàn)代研究中,方中葛根、黃芩、黃連、炙甘草的配比是5∶3∶3∶2還是8∶3∶3∶2,學(xué)術(shù)界尚有分歧。據(jù)文獻(xiàn)考證后認(rèn)為葛根、黃芩、黃連、甘草的配比為8∶3∶3∶2更符合原方[17-19]。本研究基于臨床用藥考慮,參考《中國藥典》2020年版中葛根芩連丸制備方法。另對比《傷寒論》記載:“四味,以水八升,先煮葛根,減二升,內(nèi)諸藥,煮取二升,去滓”,藥典方法增加了黃芩、黃連于醇中浸泡及滲漉的過程,這一過程可增加藥味中脂溶性的成分溶出,也可以防止小檗堿、黃芩苷類等有效成分在長時間煎煮過程中而氧化分解造成損失。綜合整體考量,將葛根芩連丸的制備方法用于本研究中方劑及組方的提取制備條件。

        綜合各學(xué)者已有研究,可知黃芩-黃連藥對共同煎煮及與方中葛根、甘草等藥味煎煮過程中產(chǎn)生沉淀,且沉淀中含有小檗堿、黃芩苷等成分。亦有研究認(rèn)為該沉淀為黃芩中的黃芩苷與小檗堿等生物堿反應(yīng)形成的不穩(wěn)定復(fù)合物,在溶液pH值改變時能發(fā)生沉淀溶解或聚集等現(xiàn)象[20]。本研究對于黃芩、黃連分別進(jìn)行浸泡滲漉,而后加水與其他藥材共同煎煮,趁熱過濾后,僅可觀察到少量沉淀。同時,本實驗中采用超聲提取法制備不同組方配伍的提取物進(jìn)一步減少沉淀對于有效成分的含量的影響。超聲提取法可利用超聲波的空化作用、機(jī)械效應(yīng)和熱效應(yīng)等加速有效物質(zhì)的釋放、擴(kuò)散和溶解,顯著提高提取效率的提取方法。超聲提取法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于中藥材有效成分的提取及分析方法前處理的過程中[19]。與已有研究對比,排除煎煮液沉淀影響后,本研究對于不同組方13種有效成分的進(jìn)行同時測定,分析方法簡便可行,分析結(jié)果平行可比。

        3.3 配伍對于方中君藥、臣藥及佐使藥的影響

        君藥葛根中的葛根素在與臣藥及佐使藥配伍時均可增加其溶出,在全方中含量最高;大豆苷元在與臣藥配伍時含量顯著升高,在全方中含量略低與配伍組,但仍高于葛根組。

        臣藥中黃芩苷、漢黃芩苷在與君藥及佐使藥配伍時均可增加其溶出,在全方中含量最高;漢黃芩素與甘草配伍時溶出增加。小檗堿、巴馬汀和黃連堿在與君藥葛根及佐使藥甘草配伍時均可增加其溶出,在全方中含量最高;其中,君藥對于小檗堿的溶出影響更大,佐使藥對于巴馬汀、藥根堿和黃連堿的溶出影響更大。

        佐使藥甘草中的甘草素、異甘草苷和甘草次酸均在全方中含量最高,而甘草酸在與臣藥配伍組含量最高,說明臣藥對于促進(jìn)其溶出的影響更大。

        綜上,GQD全方配伍時對方中有效成分的溶出均有一定的促進(jìn)的作用。其中,臣藥能顯著促進(jìn)君藥有效成分的溶出,起到輔佐君藥的作用;而佐使藥炙不僅可促進(jìn)臣藥中有效成分的溶出,同時也增強(qiáng)了臣藥對君藥的輔佐作用,起到協(xié)調(diào)全方以更好發(fā)揮藥效的作用。

        針對不同組方溶出變化的探究,葛根素屬于弱酸性化合物,在不同pH值背景下溶解度不同,隨著臣藥中黃芩苷、小檗堿等堿性成分的溶出,使得溶液pH值發(fā)生改變,促進(jìn)了葛根素,大豆苷元的溶出。另有研究表明[21],甘草中的三萜苷類成分(甘草酸等)在結(jié)構(gòu)上,同時存在親水(2個葡萄糖醛酸殘基)和疏水(三萜配基)部分具有表面活性的作用,當(dāng)其濃度達(dá)到臨界膠束濃度時,形成膠束,將難溶性藥物包裹于膠束內(nèi)部,增加了難溶性藥物溶解度。這種增溶作用除對于煎煮制備過程的影響,對于藥物在體內(nèi)的吸收的影響以及不同組方有效成分的含量是否引起其于體內(nèi)的藥效變化仍需進(jìn)一步探究,另外,藥味于體內(nèi)發(fā)揮藥效的原因是體外含量差異還是體內(nèi)相互作用的結(jié)果仍需進(jìn)一步探討,對于影響藥味相互作用及方劑配伍規(guī)律的關(guān)鍵因素可開展進(jìn)一步探究。本研究從藥材煎煮制備過程中產(chǎn)生的含量差異進(jìn)行測定,為進(jìn)一步的方劑配伍研究提供了數(shù)據(jù)支持與研究基礎(chǔ)。

        利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

        [1] 張滕, 任明, 郭利平. 方劑配伍與組分配伍的理論淵源和相關(guān)性分析 [J]. 遼寧中醫(yī)雜志, 2017, 44(2): 267-269.

        [2] 徐硯通. 方劑配伍的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵探討 [J]. 中草藥, 2015, 46(4): 465-469.

        [3] Zhou M M, Hong Y L, Lin X. Recent pharmaceutical evidence on the compatibility rationality of traditional Chinese medicine [J]., 2017, 206: 363-375.

        [4] 任蕾, 孫偉衛(wèi), 李亞妮, 等. 葛根芩連湯及其拆方配伍FTIR圖譜比較研究 [J]. 遼寧中醫(yī)雜志, 2015, 42(4): 830-834.

        [5] 張藝竹, 安叡, 袁瑾, 等. 基于藥代動力學(xué)參數(shù)分析比較葛根芩連湯的不同配伍腸吸收特性 [J]. 藥學(xué)學(xué)報, 2013, 48(10): 1611-1617.

        [6] 張伯莎, 安叡, 王躍,等. 葛根芩連湯有效成分不同配伍的腸吸收Caco-2細(xì)胞模型研究 [J]. 中藥材, 2012, 35(9): 1460-1463.

        [7] 郭友立. 葛根芩連湯沉淀物溶出度及鹽酸小檗堿、葛根素配伍腸吸收變化的研究 [D]. 廣州: 南方醫(yī)科大學(xué), 2010.

        [8] Xu B L, Zhang G J, Ji Y B. Active components alignment of Gegenqinlian decoction protects ulcerative colitis by attenuating inflammatory and oxidative stress [J]., 2015, 162: 253-260.

        [9] Liu T, Li R Y, Cui Y,. Metabonomic analysis of plasma biochemical changes in pyrexia rats after treatment with Gegenqinlian decoction, aspirin and itraconazole by UHPLC-FT-ICR-MS [J]., 2020, 10(6): 581-587.

        [10] 王鈺樂, 劉文, 楊道斌, 等. 葛根芩連湯不同配伍對炙甘草指紋圖譜中甘草酸的影響 [J]. 遼寧中醫(yī)雜志, 2017, 44(11): 2368-2372.

        [11] 戴開金, 羅佳波, 譚曉梅, 等. 葛根芩連湯不同配伍對葛根素含量的影響 [J]. 中草藥, 2003,34(6): 506-508

        [12] 陳麗紅, 王強(qiáng). 葛根芩連湯不同配伍對黃芩苷、小檗堿含量的影響 [J]. 西北藥學(xué)雜志, 2005, 20(4): 147-149.

        [13] 譚曉梅, 戴開金, 羅佳波, 等. 葛根芩連湯不同配伍對黃芩苷含量的影響 [J]. 中草藥, 2003, 34(7): 598-600.

        [14] 中國藥典[S]. 一部. 2020: 1712-1713.

        [15] Nwokeoji A O, Earll M E, Kilby P M,. High resolution fingerprinting of single and double-stranded RNA using ion-pair reverse-phase chromatography [J]., 2019, 1104: 212-219.

        [16] Kim Y, Na D H. Simultaneous determination of cysteamine and cystamine in cosmetics by ion-pairing reversed-phase high-performance liquid chromatography [J]., 2019, 35(2): 161-165.

        [17] 劉宇政, 章軍, 王躍生, 等. 葛根芩連湯劑量相關(guān)問題探討 [J]. 中國實驗方劑學(xué)雜志, 2010, 16(16): 216-218.

        [18] 文穎娟, 周永學(xué), 張養(yǎng)生. 葛根芩連湯用藥劑量探析 [J]. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2011, 13(8): 82-83.

        [19] 崔向微, 張貴君, 李慧, 等. “葛根芩連湯”兩種配伍比例的化學(xué)藥效組分比較分析 [J]. 中成藥, 2009, 31(2): 263-266.

        [20] Chandra-Hioe M V, Xu H Arcot J. The efficiency of ultrasonic-assisted extraction of cyanocobalamin is greater than heat extraction [J]., 2020, 6(1):e03059.

        [21] 雷艷麗, 孫磊, 隋宏, 等. 黃芩苷-小檗堿復(fù)合物的形成規(guī)律 [J]. 中成藥, 2018, 40(3): 577-582.

        [22] 薛禾菲, 張琬靖, 劉沛, 等. 甘草酸的增溶作用探究 [J]. 中國民族民間醫(yī)藥, 2020, 29(14): 13-17.

        Simultaneous determination of 13 active components in Gegen Qinlian Decoction by reversed-phase ion pair-high performance liquid chromatography and its application in compatibility mechanism exploration

        ZHANG Ye, SUN Xiao-zhu, YU Miao, ZHAO Yun-li, YU Zhi-guo

        College of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China

        To study the content differences of active ingredients among various formula in Gegen Qinlian Decoction (GQD, 葛根芩連湯) to reveal the change law of pharmacodynamic substance and explore the compatibility rule of GQD based on chemistry level.Reversed-phase ion pair-high performance liquid chromatography was established to determinate the content of 13 active components (puerarin, daidzein, baicalin, wogonoside, wogonin, berberine, jatrorrhizine, palmatine, coptisine, liquiritigenin, isoliquiritin, glycyrrhizic acid, glycyrrhetinic acid) in various formula of GQD. Separation was performed on Diamonsil C18column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm). Mobile phase consisted of 3.5 mmol/L sodium heptane sulfonate solution (containing 0.1% formic acid by volume) and acetonitrile (containing 0.1% formic acid by volume) and followed by gradient elution at the flow rate of 1 mL/min. The detection wavelength was 270 nm, and the column temperature was 35 ℃; The injection volume was 20 μL.All the 13 components in GQD were separated from baseline and symmetrical in peak shape. The effectiveness indexes were verified by the methodology to meet the requirements of quantitative analysis. Changes rules for content of active ingredients in different combinations: The contents of puerarin and daidzein in Gegen (, PLR) and baicalin in Huangqin (, SR) were significantly increased when PLR was compatible with SR and Huanglian (, CR). When SR and CR were combined with Zhigancao (etcum, GRRPM), the active components such as baicalin, wogonoside, wogonin and berberine were increased, and the glycyrrhizic acid in GRRPM was also significantly increased. All the active components were increased in different degrees when the formula was combined with the whole formula.The established method can be used to study the compatibility of GQD and its formulations. The combination of GQD can promote the dissolution of active components in PLR, SR, CR and GRRPM. Among them, SR and CR could significantly promote the dissolution of the effective components in PLR, and play the role of adjutant to PLR; And assistant medicine GRRPM not only can promote the dissolution of effective components from the minister medicine, at the same time can be enhanced to a certain extent minister medicine adjuvant role of monarch medicine, have the effect of coordination of all parties to improve effect and decrease toxicity.

        Gegen Qinlian Decoction; compatibility rules; reversed-phase ion-pair HPLC;;;;et; puerarin; daidzein; baicalin; wogonoside; wogonin; berberine; jatrorrhizine; palmatine; coptisine; liquiritigenin; isoliquiritin; glycyrrhizic acid; glycyrrhetinic acid

        R286.02

        A

        0253 - 2670(2021)16 - 4852 - 08

        10.7501/j.issn.0253-2670.2021.16.010

        2021-04-20

        國家自然科學(xué)基金資助項目(81573629)

        張 也(1996—),女,碩士研究生,研究方向為藥物分析學(xué)。Tel: 18641433969 E-mail: 18641433969@163.com

        于治國,博士生導(dǎo)師,教授,主要從事藥品質(zhì)量控制與藥代動力學(xué)的研究。E-mail: zhiguo-yu@163.com

        [責(zé)任編輯 鄭禮勝]

        猜你喜歡
        全方葛根芩組方
        The role of intestinal flora on tumorigenesis, progression,and the efficacy of PD-1/PD-L1 antibodies in colorectal cancer
        薏苡附子敗醬散對腸上皮細(xì)胞屏障損傷的保護(hù)作用研究
        Shunxin decoction (順心組方) improves diastolic function in rats with heart failure with preserved ejection fraction induced by abdominal aorta constriction through cyclic guanosine monophosphatedependent protein kinase Signaling Pathway
        蒙醫(yī)藥清瘟殺黏類方劑組方的知識發(fā)現(xiàn)研究
        珍珠舌草膠囊揮發(fā)油對胃癌細(xì)胞增殖與凋亡的影響及機(jī)制研究
        化瘀通絡(luò)中藥全方及拆方對DN大鼠血液相關(guān)指標(biāo)及腎臟足細(xì)胞ZO-1表達(dá)的干預(yù)作用
        葛根芩連丸UPLC指紋圖譜建立及7種成分測定
        中成藥(2018年5期)2018-06-06 03:11:53
        部頒標(biāo)準(zhǔn)中治療風(fēng)溫中成藥的組方規(guī)律
        中成藥(2018年1期)2018-02-02 07:20:22
        針灸聯(lián)合中藥組方治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的探討
        葛根芩連湯治療潰瘍性結(jié)腸炎的研究進(jìn)展※
        国产高潮视频在线观看| 97女厕偷拍一区二区三区| 91精品国产乱码久久中文| 亚洲日韩欧美一区、二区| 国产免费午夜a无码v视频| 激情中文丁香激情综合| 极品少妇高潮在线观看| 超碰人人超碰人人| 精品香蕉久久久爽爽| 成人午夜免费福利| 99久久精品人妻一区| 人人妻人人澡人人爽超污| 处破痛哭a√18成年片免费| 91福利国产在线观看网站| 国产成人精品一区二区不卡| 亚洲av综合一区二区在线观看| 日日躁夜夜躁狠狠久久av| 吃下面吃胸在线看无码| av天堂免费在线播放| 国产成人精品午夜二三区波多野| 无码国产亚洲日韩国精品视频一区二区三区 | 老岳肥屁熟女四五十路| 亚洲熟妇无码av在线播放 | 国产乱子轮xxx农村| 亚洲不卡av不卡一区二区| 男女上床视频在线观看| 日本一区二区三区人妻| 亚洲av无码国产精品色午夜洪| 九九99国产精品视频| 免费女女同黄毛片av网站| 免费欧洲毛片a级视频老妇女| 免费大片黄在线观看| 国产高跟丝袜在线诱惑| 国产亚洲一区二区三区| 草草久久久无码国产专区| 亚洲综合色婷婷久久| 91久久国产香蕉熟女线看| 国产精品亚洲αv天堂无码| 国产一区二区三区小说| av免费在线播放一区二区| 亚洲av综合av国产av中文|