陳利輝

（中紡檢測（福建）有限公司，福建泉州 362000）

傳統(tǒng)檢測方法存在種種缺陷，難以滿足實(shí)際檢測準(zhǔn)確性需要，因此有必要加強(qiáng)對高效液相色譜法合成色素檢測分析，更好地保障食品安全。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)儀器

高效液相色譜儀，型號為島津LC-2030C；真空脫氣機(jī)，型號為島津LC-2030C系列，與高效液相色譜儀配套；自動(dòng)進(jìn)樣器；二極管陣列檢測器（PDA）；ProElut PWA-2固相萃取柱，規(guī)格為150 mg/6 mL。

1.2 試驗(yàn)試劑

乙酸銨溶液，濃度為0.02 mol/L；提取溶劑；質(zhì)量濃度為0.500 g/L的日落黃、檸檬黃、胭脂紅、莧菜紅、亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)溶液，質(zhì)量濃度為1.00 g/L的赤蘚紅、誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)溶液，質(zhì)量濃度為93.5%的酸性紅標(biāo)準(zhǔn)品。

1.3 試驗(yàn)方法

稱取1 g樣品，并將其置于50 mL離心管中，然后再加入20 mL的提取溶劑，漩渦振蕩處理2 min。接著，超聲提取10 min。再于6 000 r/min條件下進(jìn)行離心處理，提取上層清液。在此基礎(chǔ)上，再取下層殘留物，加入10 mL提取溶劑，再進(jìn)行漩渦振蕩處理2 min，超聲提取15 min，于6 000 r/min的條件下，離心處理溶液2 min，再次收集上層提取物[1-2]。針對下層提取物，再按照上述步驟，重復(fù)提取3次，將上述提取3次的上層清液合并在一起，置于40 ℃水浴條件下，然后進(jìn)行減壓蒸發(fā)濃縮，在濃縮至3 mL后，加入2 mL水，混勻，用甲酸將溶液pH調(diào)至5左右。采用ProElut PWA-2固相萃取柱，實(shí)施凈化處理。依次加入5 mL甲酸溶液（體積分?jǐn)?shù)為2%）、水與甲醇（體積分?jǐn)?shù)為2%），實(shí)施小柱沖洗，同樣棄掉流出液，用洗耳球吹干小柱[3]。加入5 mL氨水-甲醇（15+85）溶液，對小柱實(shí)施洗脫處理，并完成洗脫液的收集。然后將其置于50 ℃的環(huán)境下，實(shí)施氮吹操作，在吹至0.5 mL后，采用濃度為0.02 mol/L乙酸銨溶液進(jìn)行定容，在定容至1 mL后，0.45 μm膜過濾，檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 色素提取方法選擇

由于蛋白質(zhì)不溶于乙醇，因此可采用乙醇將不溶于水的蛋白質(zhì)除去，成功分離色素，為提高分離效果，再加入少量氨水，使色素在乙醇中充分溶解，進(jìn)一步降低色素的提取難度[4]。因此，本次試驗(yàn)選用乙醇-乙腈-甲醇-氨水混合溶液作為提取溶劑。

2.2 色譜條件選擇

在本次試驗(yàn)中，采用了3種不同流動(dòng)相對樣品實(shí)施分析，即乙腈-水、乙腈-乙酸銨和甲醇-乙酸銨。由試驗(yàn)結(jié)果知，乙腈-水為流動(dòng)相，難以有效分離合成色素；而采用甲醇-乙酸銨，只能夠分離部分合成色素；當(dāng)采用乙腈-乙酸銨流動(dòng)相時(shí)，上述8種合成色素均能夠得到有效的分離，且獲得的峰形也比較優(yōu)秀[5]。為進(jìn)一步驗(yàn)證這一結(jié)果，確定流動(dòng)相濃度，試驗(yàn)采用了0.01～0.05 mol/L的5種不同濃度乙酸銨溶液進(jìn)行對比。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)采用質(zhì)量濃度為0.02 mol/L的乙酸銨溶液時(shí)，上述8種合成色素有最佳的分離效果，后續(xù)若繼續(xù)增加該濃度數(shù)值，相應(yīng)峰形和分離效果改善均不明顯，甚至還出現(xiàn)下降的趨勢?；诖?，本次試驗(yàn)選用質(zhì)量濃度為0.02 mol/L的乙酸銨溶液作為流動(dòng)相色譜條件。

2.3 精密度和回收試驗(yàn)

在試驗(yàn)開展的過程中，采用空白豬大腸樣品，并在此基礎(chǔ)上，加入了8種合成色素標(biāo)準(zhǔn)溶液，不同標(biāo)準(zhǔn)溶液的檢出限濃度分別為標(biāo)準(zhǔn)檢出限度的1倍、2倍及10倍，并在試驗(yàn)方法的指導(dǎo)下，完成樣品的處理，并平行測定6次，計(jì)算回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。由表1可知，各色素的加標(biāo)回收率在84.5%～99.1%，RSD在1.4%～2.5%，與最終檢測要求相符合。除此之外，試驗(yàn)改變了檢測樣品后，比如采用了茶葉等，最終回收率與精密度結(jié)果依然符合檢測 要求。

表1 精密度與回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=6）

3 結(jié)語

綜上所述，加強(qiáng)對食品中常見的食品合成色素的檢測，要采用高效液相色譜法測定復(fù)雜食品基質(zhì)的合成色素。試驗(yàn)結(jié)果表明，該檢測方法能夠有效彌補(bǔ)傳統(tǒng)檢測方法的缺陷，提高了檢測效果，能夠大面積推廣應(yīng)用。