唐炳娣

（惠州市第三人民醫(yī)院，廣東 惠州 516002）

新生兒ABO溶血病（Hemolytic disease of the newborn，ABO-HDN）是一種同族免疫性溶血性貧血。此病的發(fā)生主要是由于母嬰血型不合所致。ABO-HDN是引發(fā)新生兒高膽紅素血癥的主要病因。研究發(fā)現(xiàn)，孕婦機(jī)體受到胎兒紅細(xì)胞抗原的刺激，會(huì)產(chǎn)生免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，IgG）類血型抗體。此抗體可經(jīng)胎盤屏障進(jìn)入到胎兒的體內(nèi)，可對(duì)其血液中的紅細(xì)胞產(chǎn)生致敏作用，進(jìn)而可引發(fā)免疫性溶血[1-2]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)母嬰ABO血型系統(tǒng)不合的發(fā)生率較高。在產(chǎn)前對(duì)孕婦進(jìn)行IgG血型抗體效價(jià)檢測(cè)具有重要的臨床意義[3]。本次研究主要是探討對(duì)血型為O型Rh（D）的孕婦進(jìn)行產(chǎn)前IgG血型抗體效價(jià)檢測(cè)的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究的對(duì)象是2019年6月至2020年6月期間在惠州市第三人民醫(yī)院進(jìn)行ABO血型鑒定血型為O型Rh（D）的238例單胎妊娠孕婦。本次研究對(duì)象的納入標(biāo)準(zhǔn)是：1）身體健康；2）未出現(xiàn)孕期并發(fā)癥、合并癥；3）年齡在20～40歲之間；4）自愿參加本次研究，并簽署了《知情同意書》。本次研究對(duì)象的排除標(biāo)準(zhǔn)是：1）進(jìn)行產(chǎn)前不規(guī)則抗體檢測(cè)的結(jié)果呈陽(yáng)性；2）有輸血史；3）存在自身免疫性溶血性疾病或其他原因引起的溶血性疾病。在這些孕婦中，年齡最小的21歲，年齡最大的37歲，平均年齡為（31.27±3.21）歲；其孕周為21～25周，平均孕周為（22.92±0.31）周。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)試劑及儀器 本次研究使用的檢測(cè)試劑是：1）ABO血型反定型用紅細(xì)胞試劑盒、ABO血型卡、抗人球蛋白檢測(cè)卡（微柱凝膠法）。以上檢測(cè)試劑購(gòu)自長(zhǎng)春博訊生物技術(shù)有限責(zé)任公司。2）抗D〔免疫球蛋白M（Immunoglobulin M，IgM）+IgG〕血型定型試劑，購(gòu)自長(zhǎng)春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司。3）抗A、抗B血型定型試劑，購(gòu)自上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司。4）2-巰基乙醇（2-Me），本試劑購(gòu)自上海血液生物責(zé)任有限公司。5）孵育器、專用離心機(jī)，購(gòu)自長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司。

1.2.2 檢測(cè)方法 采集每例孕婦的靜脈血。對(duì)采集到的靜脈血樣本進(jìn)行ABO血型鑒定、IgG血型抗體效價(jià)檢測(cè)。對(duì)這些孕婦的血液樣本進(jìn)行ABO血型鑒定的方法是：1）采取微柱凝膠法對(duì)孕婦的血型進(jìn)行正反定型。2）采用抗A、抗B、抗D標(biāo)準(zhǔn)血清及ABO反定型用紅細(xì)胞進(jìn)行正反定型，復(fù)核孕婦的血型。對(duì)這些孕婦的血液樣本進(jìn)行IgG血型抗體效價(jià)檢測(cè)的方法是：參考2-Me試劑說(shuō)明書，將本次試驗(yàn)分成三個(gè)步驟：第一步，將這些孕婦的血液樣本放到離心機(jī)中進(jìn)行離心處理。分離出血清后，將血清樣本與2-Me試劑分別按照1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512、1:1024的比例在標(biāo)記好的試管中進(jìn)行稀釋。第二步，將稀釋液放到37℃的恒溫水浴箱中進(jìn)行IgM抗體裂解處理，時(shí)間為15min。采用ABO反定型用紅細(xì)胞溶液對(duì)裂解后的溶液進(jìn)行驗(yàn)證，判斷是否完全裂解。如果裂解后的溶液未完全裂解，需要將其放到0.9%的生理鹽水中稀釋后重新裂解。再次對(duì)裂解后的溶液進(jìn)行IgM抗體裂解處理。第三步，將裂解后的溶液加入到0.8%A型或B型反定型用紅細(xì)胞溶液，使這兩種溶液的比例為1:1。將這兩種溶液加入到抗人球蛋白微柱凝膠卡中，測(cè)定IgG血型抗體效價(jià)。這些孕婦分娩后，均對(duì)其新生兒進(jìn)行ABO-HDN檢測(cè)，方法是：采用微柱凝膠法對(duì)新生兒進(jìn)行血型檢測(cè)、ABO-HDN檢測(cè)〔間接抗人球蛋白試驗(yàn)、直接抗人球蛋白試驗(yàn)及抗體釋放試驗(yàn)〕。其中，參考抗人球蛋白卡試劑說(shuō)明書進(jìn)行間接抗人球蛋白試驗(yàn)、直接抗人球蛋白試驗(yàn)?？贵w釋放試驗(yàn)可分成三個(gè)步驟：1）用生理鹽水洗滌壓積紅細(xì)胞，共洗滌3～5次；2）在洗滌后的壓積紅細(xì)胞中添加等體積的生理鹽水，充分混勻，放置于56℃的浴箱中，處理10min；3）對(duì)壓積紅細(xì)胞和生理鹽水的混合溶液進(jìn)行離心處理后，取出上清液，添加抗人球卡，且加入洗滌末次的上清液，以此作為陰性對(duì)照，完成抗體檢測(cè)。

1.3 ABO-HDN的診斷標(biāo)準(zhǔn)

將進(jìn)行抗體釋放試驗(yàn)的結(jié)果呈陽(yáng)性作為診斷ABOHDN的標(biāo)準(zhǔn)，綜合分析新生兒血紅蛋白、膽紅素的水平及其臨床癥狀，用以輔助診斷ABO-HDN[4]。具體的診斷標(biāo)準(zhǔn)如表1所示。

表1 ABO-HDN的診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

將本次研究的所得數(shù)據(jù)均錄入Excel 2010中校對(duì)，采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。計(jì)量資料用±s表示，用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用%表示，用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 這些孕婦進(jìn)行產(chǎn)前IgG血型抗體效價(jià)檢測(cè)的結(jié)果

在這些孕婦中，進(jìn)行產(chǎn)前IgG血型抗體效價(jià)檢測(cè)的結(jié)果為＜1:64、1:64、1:128、1:256、≥1:512的孕婦分別有61例、57例、43例、53例、24例，所占的比例分別為25.63%、23.95%、18.07%、22.27%、10.08%。詳見表2。

表2 這些孕婦進(jìn)行產(chǎn)前IgG血型抗體效價(jià)檢測(cè)的結(jié)果（n=238）

2.2 不同產(chǎn)前IgG血型抗體效價(jià)孕婦的新生兒ABO-HDN的檢出率

在這些孕婦的新生兒中，共檢出147例ABO-HDN患兒，占61.76%（147/238）。進(jìn)行產(chǎn)前IgG血型抗體效價(jià)檢測(cè)的結(jié)果為＜1:64、1:64、1:128、1:256、≥1:512孕婦的新生兒ABO-HDN的檢出率分別為47.54%、54.39%、69.77%、71.70%、79.17%。詳見表3。

表3不同產(chǎn)前IgG血型抗體效價(jià)孕婦的新生兒ABO-HDN的檢出率

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)，在產(chǎn)前動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)孕婦的IgG血型抗體效價(jià)對(duì)預(yù)測(cè)ABO-HDN具有重要的指導(dǎo)意義[5]。胎兒血液中的紅細(xì)胞抗原免疫母體所產(chǎn)生的IgG血型抗體，可通過(guò)胎盤屏障與胎兒紅細(xì)胞血型抗原相結(jié)合。存在此情況的產(chǎn)婦分娩后，其新生兒肝脾腫大、膽紅素腦病的發(fā)生率較高[6]。在產(chǎn)前檢測(cè)孕婦的IgG血型抗體效價(jià)，可輔助診斷其血液中有無(wú)IgG類血型抗體，據(jù)此采取相應(yīng)的干預(yù)措施，積極地預(yù)防ABO-HDN。在納入本次研究的238例孕婦中，IgG血型抗體效價(jià)以低效價(jià)為主。這提示，在日常檢測(cè)中，需要注意預(yù)防漏檢低效價(jià)的血液樣本。

本次研究的結(jié)果證實(shí)，孕婦產(chǎn)前IgG血型抗體效價(jià)越高，其新生兒發(fā)生ABO-HDN的風(fēng)險(xiǎn)越高。臨床上可將產(chǎn)前IgG血型抗體效價(jià)檢測(cè)法應(yīng)用于預(yù)測(cè)ABO-HDN中。