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        廣西德保黃精炮制前后的液相圖譜變化研究

        2021-08-19 00:45:24趙秋華黃元河潘喬丹陸海峰
        中國民族民間醫(yī)藥 2021年12期
        關(guān)鍵詞:皂苷元生品薯蕷

        趙秋華 黃元河 潘喬丹 陸海峰

        右江民族醫(yī)學院,廣西 百色 533000

        黃精為百合科植物滇黃精PolygonatumkingianumColl.et Hemsl.黃精PolygonatumsibiricumRed.或多花黃精PolygonatumcyrtonemaHua的干燥根莖。按形狀不同,習稱“大黃精”“雞頭黃精”“姜形黃精”,其性平、味甘,具有補氣養(yǎng)陰、健脾、潤肺、益腎的功效[1]。近年來有關(guān)黃精化學成分研究報道日趨增多,至今已確定其中主要含有多糖、低聚糖、皂苷、氨基酸等活性成分,其中薯蕷皂苷是黃精屬植物主要成分之一[2]?,F(xiàn)代藥理研究表明,黃精具有抗氧化和抗衰老、改善學習記憶、降血糖、抗動脈粥樣硬化、抗菌抗病毒、抗腫瘤等藥理作用[3]。蘇仕林[4]對德保黃精進行植物學研究,發(fā)現(xiàn)由于山地開發(fā),重采輕護,黃精資源銳減,而且生產(chǎn)周期長,產(chǎn)量非常有限。本研究通過對比德保黃精炮制后的液相圖譜變化分析,以期為德保黃精藥材質(zhì)量標準和進一步開發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。

        1 儀器與材料

        1.1 儀器 島津LC-20A高效液相色譜儀,Eclipse XDB-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm,5μm),sartorius CPA64分析天平,HC-5002S數(shù)控型臺式超聲波清洗機,超純水機。

        1.2 材料 黃精藥材(購于靖西端午藥市,采自德??h),經(jīng)右江民族醫(yī)學院基礎(chǔ)醫(yī)學院黃元河副教授鑒定為百合科植物黃精的根莖。黃酒(紹興女兒紅釀酒有限公司,酒精度%vol:14.0),薯蕷皂苷元(111539-200001),購于中國食品藥品檢定研究所。色譜級乙腈(MACKLIN),色譜級甲醇(TEDIA),其余試劑為分析純,水為超純水。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 色譜條件

        2.1.1 色譜條件 島津LC-20A高效液相色譜儀,Eclipse XDB-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈和水為流動相,采用二元梯度洗脫(梯度洗脫程序見表1),流速1 mL/min,檢測波長200 nm,柱溫30 ℃,進樣量20 μL。

        表1 梯度洗脫程序

        2.2 對照品溶液的制備 精確稱取薯蕷皂苷元適量,加甲醇溶解后配制成0.18 mg/mL的對照品溶液,0.22 μm微孔濾膜濾過,備用。

        2.3 供試品溶液的制備

        2.3.1 生品黃精 將黃精除去雜質(zhì),洗凈,略潤,切厚片,干燥,得生品黃精。將黃精藥材粉碎成粗粉,精確稱取黃精粉末2 g,加入70%乙醇40 mL,超聲提取2次,每次30 min,抽濾,合并濾液,旋干,浸膏加10 mL甲醇定容,放置過夜,0.22 μm微孔濾膜濾過,取濾液作為供試品溶液。

        2.3.2 酒黃精 將生品黃精,加入黃酒燜潤(每100 g黃精,用黃酒20 g), 高壓鍋蒸制2 h,取出稍晾,干燥。將酒黃精粉碎成粗粉,精確稱取黃精粉末2 g,加入70%乙醇40 mL,超聲提取2次,每次30 min,抽濾,合并濾液,旋干,浸膏加10 mL甲醇定容,放置過夜,0.22 μm微孔濾膜濾過,取濾液作為供試品溶液。

        2.4 方法學考察

        2.4.1 精密度試驗 精密吸取薯蕷皂苷元對照品10 μL,按照2.1.1色譜條件,連續(xù)進樣5次進行測定,測得峰面積RSD為0.46%,表明儀器精密度良好。

        2.4.2 重復性試驗 取生品黃精5份,制備成供試品溶液,按照2.1.1色譜條件,重復進行測定,計算RSD值,測得峰面積RSD為1.85%,表明該方法重復性良好。

        2.4.3 穩(wěn)定性試驗 取生品黃精藥材制備成供試品溶液,按照2.1.1色譜條件,分別于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h進行測定,測得峰面積RSD為1.74%,表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

        2.5 結(jié)果 將德保黃精樣品分別按2.3方法制成供試品溶液,按色譜條件測定。通過色譜圖結(jié)果分析比較,生品黃精檢測出19個色譜峰,其中3號為薯蕷皂苷元;酒黃精檢測出20個色譜峰,其中8號為薯蕷皂苷元。通過色譜圖綜合對比(色譜圖1 為薯蕷皂苷元標準品,在條件探索中發(fā)現(xiàn)其在20 min左右出峰,后面無色譜峰,故保留時間設(shè)置為30 min,樣品保留時間設(shè)置為65 min),生品黃精及酒黃精均含有薯蕷皂苷元,但是炮制后薯蕷皂苷元含量下降,且酒黃精產(chǎn)生了新的色譜峰,生品黃精有的色譜峰在酒黃精中也未檢測到。如圖1所示,生品黃精的7、13、16、17號峰在酒黃精中未檢測到,生品黃精的3、11號峰的峰面積明顯變??;另外,酒黃精中產(chǎn)生2、4、5、6、7號新的色譜峰。由實驗結(jié)果可推斷德保黃精炮制前后,化學成分發(fā)生了變化,有待進一步研究,以確定消失或新產(chǎn)生的是何化學成分。

        圖1 薯蕷皂苷元對照品及德保黃精色譜圖

        3 討論

        3.1 黃精的炮制 黃精生用刺激咽喉,接觸過生黃精或其汁液的皮膚會產(chǎn)生瘙癢感,故須經(jīng)過炮制后才可用于臨床[5]。有文獻報道高壓蒸制酒黃精的外觀色澤、質(zhì)地、氣味、口感等性狀與常壓蒸制酒黃精無差異,可以達到傳統(tǒng)蒸制的要求,而且高壓蒸制酒黃精技術(shù)可顯著節(jié)省炮制時間,有效提高生產(chǎn)效率[6],因此本次實驗采取高壓蒸制的方法。通過對比黃精炮制前后色譜圖,推斷黃精炮制后原有的一些色譜峰消失與降低刺激性相關(guān)。

        3.2 黃精的液相圖譜變化 黃精藥材在廣西德保以野生為主,采挖后大多泡酒服用。薯蕷皂苷元藥理作用明顯,具有抗腫瘤、抗心血管系統(tǒng)及雌激素樣作用,是合成甾體激素類藥物的前體[7],被認為是黃精發(fā)揮作用的真正有效成分[8]。通過對比生品黃精與酒黃精色譜圖,炮制后薯蕷皂苷元含量下降。有研究認為[9],薯蕷皂苷元是其它許多皂苷元的前體,而通過炮制是否將使其轉(zhuǎn)化為其它皂苷元而使炮制品中薯蕷皂苷元含量下降? 本實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),此推斷可能性較大,黃精炮制后在降低刺激性副作用的同時,能增強藥物補脾潤肺、益腎的作用。黃精炮制后藥效增強是否還與黃精中其它成分的含量變化有關(guān),則有待后續(xù)研究確定。

        3.3 黃精的質(zhì)量評價 在本實驗中,對比等度洗脫和梯度洗脫的色譜圖,黃精炮制后黃精的色譜峰有變化,表明薯蕷皂苷元含量并不能作為衡量黃精質(zhì)量的唯一標準,黃精中尚有多糖、人參皂苷等多種活性成分。黨艷妮等[10]通過中藥網(wǎng)絡(luò)藥理學數(shù)據(jù)庫和分析平臺,發(fā)現(xiàn)黃精中已鑒定的39個化合物,其中18個具有良好的藥物代謝性質(zhì)的化合物,黃精可通過多成分、多靶點及多通絡(luò)的作用機制發(fā)揮其抗腫瘤活性。因此對德保黃精進行化學成分檢測和多成分綜合分析,可為德保黃精藥材質(zhì)量標準和進一步開發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。

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