楊婷婷 黃小雨 李鳳展 劉 壇 王瑩瑩 耿德勤 張 勇

特發(fā)性面神經(jīng)麻痹又稱貝爾麻痹，是一種常見的顱神經(jīng)病變，為非特異性炎癥導致的周圍性面癱[1]。研究表明面部表情肌的癱瘓往往對患者的生活質(zhì)量及心理健康造成很大的影響[2,3]。因此，積極尋找發(fā)生特發(fā)性面神經(jīng)麻痹的早期預測指標對特發(fā)性面神經(jīng)麻痹患者的管理及預防具有十分重要的意義。目前該疾病病因尚不十分明確，可能與免疫系統(tǒng)失衡密切相關[4]。記憶性T細胞(memory T cell，Tm)是參與機體免疫防御和抗原清除的一類重要免疫細胞亞群，可以針對外來及異種抗原產(chǎn)生迅速且高效的免疫應答，一直以來在抗感染及疫苗研制領域受到廣泛關注[5]。然而，目前關于記憶性T細胞亞群在特發(fā)性面神經(jīng)麻痹中的研究較少。本研究旨在探究特發(fā)性面神經(jīng)麻痹患者外周血CD4+記憶性T細胞亞群表達變化，并分析其對特發(fā)性面神經(jīng)麻痹的診斷價值。

對象與方法

1.對象：選取2017年8月～2020年10月徐州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的53例特發(fā)性面神經(jīng)麻痹患者作為實驗組。實驗組納入標準：①符合中國特發(fā)性面神經(jīng)麻痹診治指南2016版的診斷標準[6]；②所有患者發(fā)病在1周以內(nèi)。排除標準：①近3個月有活動性耳科疾病者；②顱內(nèi)占位、吉蘭巴雷等引起的繼發(fā)性面神經(jīng)麻痹；③中樞性面神經(jīng)麻痹；④高血壓、糖尿病、心力衰竭、肝臟、腎臟功能損害；⑤近期細菌感染；⑥合并結締組織病等自身免疫病患者。選擇同時期的50例健康對照者作為對照組。對照組納入標準：①各項體檢指標無異常；②半年內(nèi)無外傷及其他疾病史；③無其他合并癥。本研究經(jīng)徐州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院醫(yī)學倫理學委員會批準，所有研究對象均簽署知情同意書。

2.方法：所有研究對象均于入院第2天清晨空腹抽取2ml EDTA抗凝靜脈血，采用人淋巴細胞分離液(天津灝洋生物公司)通過密度梯度離心法分離得到外周血單個核細胞(PBMC)，經(jīng)PBS洗滌離心后加入鼠抗人CD3-APC-Cy7抗體、鼠抗人CD4-APC抗體、鼠抗人CD45RA-V450抗體、鼠抗人CCR7-BV510抗體(美國BD公司)，同時設同型對照管，室溫避光孵育15min后，采用LSRF ortessa型流式細胞儀(美國BD公司)檢測CD4+TCM及CD4+TEM細胞，其表型分別為CD3+CD4+CD45RA-CCR7+和CD3+CD4+CD45RA-CCR7-[7]。同時收集患者血常規(guī)檢驗中淋巴細胞、中性粒細胞及血小板計數(shù)，計算NLR與PLR值。

結 果

1.一般資料比較：實驗組與對照組性別、年齡、血小板計數(shù)、淋巴細胞計數(shù)及PLR比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與對照組比較，實驗組中性粒細胞計數(shù)及NLR值更高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，表1)。

表1 實驗組與對照組一般資料比較

2.實驗組與對照組外周血CD4+記憶性T細胞亞群比較：實驗組CD4+TCM細胞百分率為30.06%±9.48%，對照組CD4+TCM細胞百分率為33.06%±8.53%，兩組比較差異無統(tǒng)計學意義(t=1.686,P=0.095)；實驗組CD4+TEM細胞百分率為55.70%±12.63%，對照組CD4+TEM細胞百分率為34.57%±8.80%，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(t=-9.896,P=0.000，圖1)。

圖1 實驗組與對照組外周血CD4+TCM細胞及CD4+TEM細胞百分率比較A.CD4+CD45RA-CCR7+中央型記憶T淋巴細胞(CD4+TCM)及CD4+CD45RA- CCR7-效應型記憶T淋巴細胞(CD4+TEM)流式細胞術設門圖；B.實驗組與對照組外周血CD4+TCM細胞及CD4+TEM細胞百分率柱狀圖分析

3.特發(fā)性面神經(jīng)麻痹的危險因素分析：單因素Logistic回歸分析，影響特發(fā)性面神經(jīng)麻痹的危險因素包括CD4+TEM細胞、NLR及中性粒細胞計數(shù)(P<0.05，表2)。將上述因素代入多因素Logistic回歸方程，結果顯示，CD4+TEM細胞及NLR是影響特發(fā)性面神經(jīng)麻痹的獨立危險因素(P<0.05，表3)。

表2 特發(fā)性面神經(jīng)麻痹的單因素Logistic回歸性分析

表3 特發(fā)性面神經(jīng)麻痹的多因素Logistic回歸性分析

4.CD4+TEM細胞及NLR兩指標對特發(fā)性面神經(jīng)麻痹的預測價值分析：ROC曲線分析顯示CD4+TEM細胞及NLR的曲線下面積分別為0.910(95%CI: 0.851～0.969，P=0.000)和0.783(95%CI: 0.690～0.875，P=0.000，圖2)。其中CD4+TEM細胞的曲線下面積大于NLR(Z=2.255，P=0.024)。

圖2 CD4+TEM細胞及NLR兩指標對特發(fā)性面神經(jīng)麻痹的診斷價值A.CD4+TEM細胞；B.NLR

討 論

近年來研究顯示，特發(fā)性面神經(jīng)麻痹發(fā)病主要歸因于循環(huán)免疫細胞介導的免疫炎性反應，其中CD4+T細胞已被證實與特發(fā)性面神經(jīng)麻痹密切相關[4,8]。然而，CD4+T細胞在特發(fā)性面神經(jīng)麻痹中的研究尚不深入，具有一定的局限性，其診斷陽性率有待進一步提高。鑒于特發(fā)性面神經(jīng)麻痹患者恢復過程緩慢，部分患者甚至出現(xiàn)不可逆的面部表情功能喪失，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。因此，尋找新的指標預測特發(fā)性面神經(jīng)麻痹發(fā)生對提高特發(fā)性面神經(jīng)麻痹患者的臨床治療療效及預后有著極其重要的臨床意義。

CD4+記憶性T細胞是機體免疫防御和抗原清除系統(tǒng)的重要組成部分，可以針對外來及異種抗原產(chǎn)生迅速且高效的免疫應答，一直以來在抗感染及疫苗研制領域受到廣泛關注[9～12]。Sallusto等[13]首次根據(jù)Tm細胞的遷移能力及功能不同分為CD4+的中央型記憶性T細胞(TCM)和效應型記憶性T細胞(TEM)。TCM細胞主要存在于淋巴器官,具有自我更新的能力。在機體受到抗原刺激后，TCM細胞能夠迅速轉化為TEM細胞，并長期存在于外周中，產(chǎn)生IFN-γ、IL-17等炎性因子發(fā)揮效應功能[9，10,14]。目前，在結核、病毒等感染性疾病中已有研究報道CD4+TEM表達增加，并且有望成為臨床診斷該類感染性疾病的新型觀察指標[15, 16]。然而尚無關于CD4+Tm細胞亞群在特發(fā)性面神經(jīng)麻痹患者中的表達研究。

本研究對特發(fā)性面神經(jīng)麻痹患者外周血CD4+TCM和CD4+TEM細胞進行了比較分析，發(fā)現(xiàn)特發(fā)性面神經(jīng)麻痹患者與健康對照組比較，CD4+TEM細胞表達明顯增加，而CD4+TCM細胞表達兩組比較差異無統(tǒng)計學意義，提示CD4+TEM細胞與特發(fā)性面神經(jīng)麻痹密切相關。除了檢測CD4+Tm細胞亞群表達水平，本研究還分析比較了兩組患者NLR及PLR情況，與既往研究報道一致[17]。本研究發(fā)現(xiàn)特發(fā)性面神經(jīng)麻痹患者中性粒細胞計數(shù)及NLR顯著高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義，而兩組PLR比較差異無統(tǒng)計學意義。上述指標經(jīng)Logistic回歸分析顯示CD4+TEM細胞、NLR為影響特發(fā)性面神經(jīng)麻痹的危險因素。此外，本研究還進一步通過繪制ROC曲線發(fā)現(xiàn)CD4+TEM細胞及NLR對特發(fā)性面神經(jīng)麻痹具有較好的預測價值，其中CD4+TEM細胞預測效果更佳。因此早期進行CD4+TEM細胞檢測，同時聯(lián)合NLR，有利于特發(fā)性面神經(jīng)麻痹的早期識別，從而早期干預以改善患者的預后。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)特發(fā)性面神經(jīng)麻痹患者和健康對照組外周血CD4+TEM細胞、NLR比較差異有統(tǒng)計學意義，且對特發(fā)性面神經(jīng)麻痹具有較好的診斷價值，為特發(fā)性面神經(jīng)麻痹的臨床診斷與治療提供一定的理論依據(jù)。