池志珍 黃鎔章 王煒辰 鄭時楨 郭曉芳 吳學輝

福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院，福建 福州 350004

急性腎損傷是臨床最常見的急危重癥之一，其發(fā)病率約為30%，并且與患者的預后不良有關(guān)，全球每年約有400萬例死于急性腎損傷，且發(fā)病率和死亡率不斷攀升，造成嚴重的健康和經(jīng)濟問題[1]。目前，臨床上對于急性腎損傷提倡早發(fā)現(xiàn)、早治療，國內(nèi)外對其干預研究還處于探索階段，還沒有治療效果良好的藥物[2]。急性腎損傷所涉及的發(fā)病機制包括炎癥、氧化應激和凋亡等，其中炎癥反應被認為是細胞病理損傷的關(guān)鍵致病因素，其導致的病理損傷貫穿于多種腎臟病發(fā)生、發(fā)展的過程中。

五節(jié)芒為禾本科多年生草本植物五節(jié)芒Miscanthusfloridulus(Lab.) Warb. ex Schum. et Laut.的莖，其性平，味甘、淡，具有清熱通淋、祛風除濕的功效[3]。臨床上常用于治療熱淋、白濁、白帶、急性腎孟腎炎、泌尿道結(jié)石等[4]。五節(jié)芒主要含有木脂素類、甾醇類、苷類等成分[5]，近年來有研究發(fā)現(xiàn)，五節(jié)芒的苷類成分可明顯抑制脂多糖LPS引起的NF-κB激活，具有一定的抗炎活性[4]，但目前有關(guān)它的藥理作用研究未見系統(tǒng)的研究和報導。本研究采用阿霉素致BLAB/C小鼠腎損傷，建立急性腎損傷小鼠模型，研究五節(jié)芒水煎液對小鼠腎組織的保護作用，為臨床應用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 BLAB/C 小鼠，清潔級，雄性，18～21 g，50只，上海斯萊克實驗動物有限責任公司，合格證號 SCXK(滬)：2017-0005。

1.2 試驗藥品 五節(jié)芒莖，采自閩侯縣鴻尾鄉(xiāng)里頭村，由池志珍等鑒定為禾本科芒屬植物五節(jié)芒Miscanthusfloridulus(Lab.) Warb.ex Schum.et Laut.。鹽酸貝那普利片，北京諾華制藥有限公司，批號：X2893；阿霉素，瀚暉制藥有限公司，批號：19019833。

1.3 五節(jié)芒水煎液的制備 取干燥的五節(jié)芒100 g切成小段，置于容器內(nèi)，加12倍量的水浸泡30 min，加熱至沸騰(需時時攪拌)后保持60 min，濾出藥液，再加12倍量水加熱至沸騰(需時時攪拌)后保持30 min，濾出藥液，合并兩次的藥液，蒸發(fā)濃縮成0.5 g·mL-1生藥量的水煎劑。

1.4 實驗方法

1.4.1 小鼠腎損傷模型的建立、分組與給藥 雄性BLAB/C小鼠50只，按體重隨機分為5組，即：正常對照組、模型組、五節(jié)芒低、高劑量組、陽性對照組，每組10只。除正常對照組外，其它4組小鼠均尾靜脈一次性注射11 mg·kg-1體重的阿霉素溶液[5]。從造模第2天開始各組分別按劑量灌胃給藥，五節(jié)芒高劑量組給予10.0 g·kg-1五節(jié)芒水煎劑，五節(jié)芒低劑量組給予5.0 g·kg-1五節(jié)芒水煎劑，陽性對照組給予2 mg·kg-1貝那普利混懸液，給藥體積按20 mL· Kg-1體重灌胃，正常對照組與模型組給予等體積的蒸餾水，每天1次，連續(xù)灌胃給藥4周。

1.4.2 小鼠血清中尿素氮和肌酐的含量測定 末次給藥24 h后，摘眼球取血，離心(3000 rpm，10 min)，取血清，采用全自動生化分析儀分別檢測血清中尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的含量。

1.4.3 小鼠腎臟指數(shù) 采血后，處死小鼠，打開小鼠腹腔，摘取右側(cè)腎臟稱量，并計算腎臟指數(shù)。計算公式如下：小鼠腎臟指數(shù)=小鼠腎臟的質(zhì)量/小鼠體質(zhì)量× 100% 。

1.4.4 小鼠腎組織中炎癥因子IL-8的含量測定 取右側(cè)腎臟，稱重，加PBS液，用電動勻漿器勻漿，離心取上清液，按照ELISA試劑盒說明書操作，用酶標儀在450 nm 波長下測定吸光度(OD 值)，通過標準曲線計算腎組織勻漿上清液中小鼠IL-8含量。

1.4.5 腎組織病理學觀察 采血后，處死小鼠，打開小鼠腹腔，摘取左腎，福爾馬林固定左腎組織，經(jīng)石蠟包埋、切片、HE染色后，光鏡下觀察腎組織病理變化。

2 結(jié)果

2.1 五節(jié)芒水煎液對腎損傷小鼠體重的影響 用阿霉素造模后，模型組小鼠體重與正常對照組比較，明顯減輕(P<0.05)，給藥組在給藥1周后，給藥組體重較模型組明顯增加(P<0.05)，隨著時間延長，給藥組與模型組的體重差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 對阿霉素致腎炎小鼠實驗前后體重表

2.2 五節(jié)芒水煎液對腎損傷小鼠血清中BUN和Cr含量的檢測 與正常對照組相比，模型組小鼠血清中BUN和Cr的含量明顯升高(P<0.01)；與模型組相比，五節(jié)芒低、高劑量組及陽性對照組小鼠血清中的 BUN和 Cr的含量均明顯降低(P<0.05或0.01)。見表2。

表2 各組小鼠血清中BUN、Cr的比較

2.3 五節(jié)芒水煎液對小鼠腎臟指數(shù)的影響 與正常對照組相比，模型組小鼠腎臟指數(shù)明顯增大(P<0.01)；與模型組相比，五節(jié)芒低、高劑量組及陽性對照組小鼠腎臟指數(shù)均明顯降低(P<0.05)。見表3。

表3 各組小鼠腎臟指數(shù)的比較

2.4 五節(jié)芒水煎液對腎組織中炎癥因子IL-8含量的影響 與正常對照組比，模型組腎組織中 IL-8的含量明顯增加(P<0.01)；與模型組相比，五節(jié)芒低、高劑量組及陽性對照組小鼠腎組織中的炎癥因子IL-8含量均明顯減少(P<0.05或0.01)。見表4。

表4 各組對小鼠腎組織中炎癥因子IL-8含量的影響

2.5 腎組織病理學觀察 高倍鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，正常對照組小鼠腎組織形態(tài)學正常，造模組小鼠腎小體毛細血管球體積增大，腎小球內(nèi)細胞數(shù)量上升，包含大量紅細胞，腎小囊層結(jié)構(gòu)被破壞，毛細血管球被擠壓并伴炎癥細胞浸潤，腎小管管腔可見炎癥細胞浸(如圖紅色箭頭)潤。五節(jié)芒低、高劑量組及陽性對照組小鼠腎組織上述損傷程度均較模型組小。如圖1所示。

圖1 各組小鼠腎臟病理鏡檢圖 (HE×400)

3 討論

阿霉素是一種抗腫瘤的抗生素，它對RNA和DNA的合成具有抑制作用，其誘導的急性腎損傷是一個成熟的和高重復性的腎病模型[6-7]。本實驗采用一次性尾靜脈注射阿霉素11 mg·kg-1致BLAB/C小鼠腎損傷模型，腎組織病理學觀察結(jié)果顯示造模組小鼠腎小體毛細血管球體積增大，腎小球內(nèi)細胞數(shù)量上升，包含大量紅細胞，腎小囊層結(jié)構(gòu)被破壞，毛細血管球被擠壓并伴炎癥細胞浸潤，腎小管管腔可見炎癥細胞浸潤，符合急性腎損傷表現(xiàn)，與文獻[6]研究相一致。

本研究利用阿霉素誘導小鼠腎損傷模型探討五節(jié)芒水煎液對小鼠腎損傷的保護作用，研究結(jié)果顯示，與正常對照組相比，模型組小鼠腎臟指數(shù)及血清BUN、Cr 水平升高，同時模型組腎病粒結(jié)構(gòu)嚴重損傷，腎小管上皮細胞空泡及顆粒變性，腎小囊層結(jié)構(gòu)被破壞，毛細血管球被擠壓并伴炎癥細胞浸潤，腎小管管腔可見炎癥細胞浸，符合急性腎損傷炎癥反應等表現(xiàn)[6]。與模型組相比，五節(jié)芒水煎液低、高劑量組血清中BUN、Cr水平明顯下降，腎組織病理損傷變化部分得到恢復，這些結(jié)果提示五節(jié)芒水煎液能夠改善腎功能和腎組織的損傷。同時結(jié)果發(fā)現(xiàn)與模型組相比，五節(jié)芒水煎液低、高劑量組腎組織中的炎癥因子IL-8含量明顯減少，提示五節(jié)芒水煎液可改善炎癥反應，這與文獻[5]中報道的一致。綜上所述，五節(jié)芒水煎液對阿霉素誘導的小鼠腎損傷具有保護作用，為其在治療急性腎損傷方面提供了理論依據(jù)，但其作用機制仍需進一步研究。