張雪瑩 朱彤 樊賽軍

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所，天津市放射醫(yī)學(xué)與分子核醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 300192

隨著核技術(shù)的發(fā)展和核能應(yīng)用的增多，核泄漏或核戰(zhàn)爭(zhēng)發(fā)生的可能性增加，一旦事故發(fā)生，人們將受到電離輻射造成的不可逆損傷。核工業(yè)的從業(yè)人員也存在潛在風(fēng)險(xiǎn)，若意外暴露于電離輻射下，輕者可導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生病理變化，重者會(huì)損傷其組織和器官[1-2]。核在醫(yī)療中的應(yīng)用越來(lái)越多，比如放療是癌癥患者常用的治療方法。其射線產(chǎn)生的不良反應(yīng)包括急性胃腸道反應(yīng)、皮膚反應(yīng)，程度從輕微皮疹、水腫、腹瀉、嘔吐到嚴(yán)重潰瘍、組織器官的壞死、瘺及其他并發(fā)癥的發(fā)生[3]。約85%接受放療的患者會(huì)出現(xiàn)中度至重度的不良反應(yīng)，但是臨床上沒(méi)有用于評(píng)價(jià)放射性不良反應(yīng)嚴(yán)重程度及預(yù)后的有效指標(biāo)。早期準(zhǔn)確診斷輻射損傷是目前臨床上急需的。然而，利用穩(wěn)定的染色體畸變進(jìn)行輻射損傷診斷的生物劑量法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且有許多局限性，不適合對(duì)受照個(gè)體進(jìn)行快速地判斷和分類[4-5]。

秀麗隱桿線蟲(chóng)（Caenorhabditis elegans，簡(jiǎn)稱線蟲(chóng)）是第一個(gè)基因組被完全測(cè)序的多細(xì)胞生物[6]。目前的研究數(shù)據(jù)表明，38%以上的線蟲(chóng)蛋白表達(dá)基因與人類同源，60%～80%的人類基因都可在線蟲(chóng)基因組中找到同源基因，其中包括40%的人類疾病相關(guān)基因[7]。因此，線蟲(chóng)作為一種模式生物已被廣泛應(yīng)用于人類疾病的研究。線蟲(chóng)獨(dú)特的神經(jīng)元結(jié)構(gòu)決定了它具有靈敏的嗅覺(jué)[8-10]。有研究結(jié)果表明，野生型線蟲(chóng)對(duì)人類腫瘤細(xì)胞的分泌物、腫瘤組織以及腫瘤患者的尿液具有趨向性，但對(duì)健康者的尿液沒(méi)有趨向性，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)，線蟲(chóng)能通過(guò)嗅覺(jué)神經(jīng)元“感覺(jué)”到尿液中的氣味[11-12]。這種趨向性已在乳腺癌、宮頸癌和黑色素瘤等多種類型腫瘤中得到證實(shí)[13]。由此可見(jiàn)，通過(guò)嗅覺(jué)靈敏的線蟲(chóng)對(duì)患者的體液氣味進(jìn)行分析，可以更好地觀察和預(yù)測(cè)疾病的發(fā)生發(fā)展[14-18]。

本研究通過(guò)全身照射建立小鼠輻射損傷模型，利用線蟲(chóng)的嗅覺(jué)，研究其對(duì)照射后小鼠和未照射小鼠的尿液是否表現(xiàn)出不同的趨向性、照射劑量和照射后不同時(shí)間的關(guān)系、照射后小鼠的尿液中是否有吸引線蟲(chóng)的代謝性物質(zhì)等，為臨床輻射損傷的診斷和治療提供新思路，為輻射損傷代謝標(biāo)志物的研究打基礎(chǔ)，以期開(kāi)發(fā)出一種用于臨床的放射性核素造成不良反應(yīng)的評(píng)估體系。

1 材料與方法

1.1 小鼠的飼養(yǎng)

清潔級(jí)C57/BL6 品系雄性小鼠168 只，6～7 周齡，體重（20±2）g，購(gòu)自北京華阜康生物科技有限公司[許可證號(hào)：SCXK（京）2020-0004]。均飼養(yǎng)于無(wú)特定病原體級(jí)動(dòng)物房，控制室內(nèi)溫度25℃左右，相對(duì)濕度（60±5）%，保持12 h/12 h 的明暗循環(huán)，小鼠隨意采食全價(jià)鼠飼料及清潔水。

1.2 小鼠的照射和分組

使用加拿大Best Theratronics 公司Gammacell?40 Exactor 照射儀，137Cs γ 射線對(duì)小鼠進(jìn)行全身照射，劑量率為0.84 Gy/min。按照區(qū)組隨機(jī)法分為對(duì)照組和照射組，其中對(duì)照組為未照射小鼠，照射組為不同劑量、不同時(shí)間點(diǎn)照射后的小鼠。

1.3 小鼠尿液的收集

將小鼠固定，輕柔按壓小鼠腹部，待有尿液流出，用1.5 mL 離心管分別收集每只小鼠的尿液（50～100 μL），放入臺(tái)式高速離心機(jī)（美國(guó)Thermo公司Micro21R 型），12 000 r/min 離心（離心半徑8 cm）10 min，將上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中，立刻加到培養(yǎng)皿上進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.4 線蟲(chóng)的培養(yǎng)

線蟲(chóng)均為N2 品系野生型（軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院張成崗研究員饋贈(zèng)），使用固體NGM 培養(yǎng)基（3 g/L NaCl、2.5 g/L 細(xì)菌蛋白胨、5 mg/L 膽固醇和1.5%瓊脂高溫高壓滅菌后，加入至已過(guò)濾除菌的1 mol/L PBS 25 mL、1 mol/L MgSO41 mL 和1 mol/L CaCl21 mL 溶液中）及OP50 大腸桿菌進(jìn)行培養(yǎng)。涂布適量菌液（約1 mL）至固體NGM 培養(yǎng)基（90 mm 平皿）中后風(fēng)干表面液體，將線蟲(chóng)挑至培養(yǎng)基上，20℃培養(yǎng)箱（RQX-250 型，青島名博環(huán)?？萍加邢薰荆┲械怪门囵B(yǎng)。

1.5 線蟲(chóng)的同步化

培養(yǎng)線蟲(chóng)至L4 產(chǎn)卵期，在體視顯微鏡（日本尼康公司SMZ1270 型）下觀察到有大部分線蟲(chóng)已產(chǎn)卵。用M9 緩沖液（6 g/L Na2HPO4、3 g/L KH2PO4和5 g/L NaCl）將線蟲(chóng)清洗下來(lái)，收集到1.5 mL 離心管中，2000 r/min 離心（離心半徑8 cm）2 min 后棄上清。加入1 mL 卵回收裂解液（0.5 mol/L NaOH和0.5% NaClO 溶于M9 緩沖液）后劇烈震蕩15～30 s，2000 r/min 離心（離心半徑8 cm）2 min 后棄上清。加入1 mL M9 緩沖液清洗裂解體系，重復(fù)清洗2 次，隨后用100 μL 的M9 緩沖液重懸，加入到無(wú)OP50 大腸桿菌的NGM 培養(yǎng)基（35 mm 平皿）上，置于20℃培養(yǎng)箱中孵化24 h。待所有卵在培養(yǎng)基上孵化至L1 幼蟲(chóng)期后，將幼蟲(chóng)轉(zhuǎn)移至含OP50大腸桿菌的NGM 培養(yǎng)基（90 mm 平皿）上繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)至L3 幼蟲(chóng)期用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.6 線蟲(chóng)的趨化實(shí)驗(yàn)

將小鼠分為7.5 Gy 照射組和對(duì)照組，每組12 只，于照射后24 h 收集每只小鼠尿液。將90 mm平皿NGM 培養(yǎng)基平均劃分為8 個(gè)扇形，于每個(gè)扇形靠培養(yǎng)皿邊緣畫(huà)一個(gè)直徑為10 mm 的圓形區(qū)域，將照射組和對(duì)照組小鼠的尿液分別間隔滴于同一培養(yǎng)皿的8 個(gè)圓形區(qū)域中，含有線蟲(chóng)約700 條的M9 緩沖液滴至中心區(qū)域，靜置30 min，拍照記錄，而后置于體視顯微鏡下觀察并統(tǒng)計(jì)每個(gè)圓形區(qū)域中線蟲(chóng)的數(shù)量，計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)3 次，取平均值，然后分別計(jì)算不同區(qū)域內(nèi)線蟲(chóng)的百分?jǐn)?shù)。

1.7 線蟲(chóng)的爬行實(shí)驗(yàn)

如圖1 所示，使用90 mm 平皿NGM 培養(yǎng)基，在距培養(yǎng)皿中心40 mm 的兩端各劃出以該點(diǎn)為圓心的直徑為10 mm 的圓形區(qū)域，將下述實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和照射組小鼠的尿液分別滴至兩側(cè)圓形區(qū)域中心，水平放置確保液滴不會(huì)外溢或擴(kuò)散，將有約100 條線蟲(chóng)的M9 緩沖液滴于培養(yǎng)皿中心，靜置30 min，置于體視顯微鏡下觀察并統(tǒng)計(jì)每個(gè)圓形區(qū)域中線蟲(chóng)的數(shù)量。計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)3 次，取平均值，然后分別計(jì)算不同區(qū)域內(nèi)線蟲(chóng)的百分?jǐn)?shù)。

圖 1 秀麗隱桿線蟲(chóng)爬行實(shí)驗(yàn)方法的示意圖Figure 1 Schematic diagram of experimental method ofCaenorhabditis elegans crawling

（1）照射后不同時(shí)間點(diǎn)的爬行實(shí)驗(yàn)：將小鼠分為7.5 Gy 照射組和對(duì)照組，每組12 只，于照射后0、2、4、8、12、24、48、72 h 收集每只小鼠的尿液。

（2）不同劑量照射后的爬行實(shí)驗(yàn)：將小鼠分為2、4、6 Gy 照射組和對(duì)照組，每組12 只，于照射后24 h 收集每只小鼠的尿液。

（3）時(shí)間與劑量之間的正交實(shí)驗(yàn)：將小鼠分為2、4、6 Gy 照射組和對(duì)照組，每組12 只，于照射后4、8、24 h 收集每只小鼠的尿液。

（4）風(fēng)扇實(shí)驗(yàn)和加熱實(shí)驗(yàn)：將小鼠分為7.5 Gy 照射組和對(duì)照組，每組12 只，于照射后24 h 收集每只小鼠的尿液。在滴加小鼠的尿液后進(jìn)行風(fēng)扇實(shí)驗(yàn)，即在培養(yǎng)皿一側(cè)打開(kāi)小風(fēng)扇進(jìn)行吹風(fēng)，使培養(yǎng)皿表面氣體流動(dòng)，吹風(fēng)30 min 后進(jìn)行爬行實(shí)驗(yàn)。在加熱實(shí)驗(yàn)中，分別取每只小鼠的尿液后稱重，放在干浴鍋中98℃高溫加熱5 min，將小鼠尿液中可揮發(fā)物質(zhì)盡量蒸發(fā)，再次稱重，比較尿液蒸發(fā)前后的重量差異，待30 min 尿液冷卻后進(jìn)行爬行實(shí)驗(yàn)。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 25.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)用±s表示，在方差齊的條件下，2 組間的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；小鼠尿液加熱前后的比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 線蟲(chóng)的趨向性

趨化實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2A，結(jié)果顯示線蟲(chóng)對(duì)照射后小鼠的尿液有明顯趨向性，與對(duì)照組相比，照射組區(qū)域內(nèi)聚集了更多的線蟲(chóng)。0.5 h 后，對(duì)照組有約（1.83±0.17）%的線蟲(chóng)，而照射組線蟲(chóng)達(dá)（14.17±1.01）%，二者的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.002，圖2B）。

2.2 照射后不同時(shí)間點(diǎn)的爬行實(shí)驗(yàn)

如圖3 所示，7.5 Gy 照射后8 h 時(shí)線蟲(chóng)開(kāi)始出現(xiàn)聚集，這說(shuō)明此時(shí)小鼠尿液中產(chǎn)生了相關(guān)代謝物，且該代謝物在照射后72 h 并未消失，同樣可吸引線蟲(chóng)在尿液區(qū)域內(nèi)聚集。與對(duì)照組線蟲(chóng)的百分?jǐn)?shù)相比，照射組在照射后8、12、24、48、72 h 時(shí)的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.073、42.947、53.333、67.518、61.250，均P＜0.01）。

圖 2 秀麗隱桿線蟲(chóng)對(duì)7.5 Gy 照射后24 h 小鼠尿液的趨向性 A 圖中左側(cè)為培養(yǎng)皿的圖片（C 為對(duì)照組小鼠尿液的區(qū)域；IR 為照射組小鼠尿液的區(qū)域），右側(cè)為體視顯微鏡下秀麗隱桿線蟲(chóng)的圖片。a 表示與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=20.105，P=0.002）Figure 2 Tendency of Caenorhabditis elegans to urine of mice 24 h after 7.5 Gy irradiation

圖 3 7.5 Gy 照射后不同時(shí)間點(diǎn)小鼠尿液中秀麗隱桿線蟲(chóng)的百分?jǐn)?shù) a 表示與對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.073～67.518，均P＜0.01）Figure 3 Percentage of Caenorhabditis elegans in urine of mice at different time points after 7.5 Gy irradiation

圖 4 不同劑量照射后24 h 小鼠尿液中秀麗隱桿線蟲(chóng)的百分?jǐn)?shù) A 為秀麗隱桿線蟲(chóng)的百分?jǐn)?shù)；B 為體視顯微鏡下秀麗隱桿線蟲(chóng)的圖片。a 表示與對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=11.955、30.320、51.463，均P＜0.001）Figure 4 Percentage of Caenorhabditis elegans in urine of mice at 24 hours after different doses of irradiation

2.3 不同劑量照射后的爬行實(shí)驗(yàn)

如圖4 所示，2 Gy 照射后小鼠的尿液可吸引線蟲(chóng)聚集，照射組區(qū)域的線蟲(chóng)百分?jǐn)?shù)為（69.58±7.00）%、對(duì)照組為（29.33±5.79）%。同樣，4、6 Gy照射組也有線蟲(chóng)聚集[照射組線蟲(chóng)的百分?jǐn)?shù)分別為（84.42±5.55）%和（88.58±3.45）%、對(duì)照組分別為（11.58±3.60）%和（9.08±2.19）%]，與對(duì)照組相比，經(jīng)不同劑量照射后小鼠的尿液中線蟲(chóng)的百分?jǐn)?shù)均增加，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.001）。由此可知，線蟲(chóng)靈敏的嗅覺(jué)可識(shí)別2 Gy 及以上劑量照射后小鼠的尿液。

2.4 時(shí)間與劑量之間的正交實(shí)驗(yàn)

由表1 可知，在2、4、6 Gy 不同劑量照射4 h后，小鼠尿液中無(wú)相關(guān)代謝物，其線蟲(chóng)的百分?jǐn)?shù)與對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.152、-1.012、-0.087，均P＞0.05）；在照射后8 h，不同劑量照射組小鼠尿液的線蟲(chóng)百分?jǐn)?shù)與對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.001）。這表明在照射后8 h 時(shí)，不論照射劑量多少，該代謝途徑已經(jīng)產(chǎn)生。

2.5 風(fēng)扇實(shí)驗(yàn)和加熱實(shí)驗(yàn)

風(fēng)扇實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，照射組和對(duì)照組的線蟲(chóng)百分?jǐn)?shù)均增多，但二者的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[（3.17±1.37）%對(duì)（2.38±1.26）%，t=1.250，P＞0.05]，即風(fēng)扇實(shí)驗(yàn)后線蟲(chóng)不能識(shí)別照射后小鼠的尿液而產(chǎn)生聚集。加熱實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，小鼠尿液加熱前后整體重量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[（1.060±0.028）g 對(duì)（1.051±0.026）g，t=-11.814，P＜0.001]，這表示有大量組分揮發(fā)；蒸發(fā)后尿液的線蟲(chóng)爬行結(jié)果顯示，照射組和對(duì)照組的線蟲(chóng)百分?jǐn)?shù)均增多，但二者的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[（17.46±11.00）%對(duì)（12.70±9.91）%，t=0.585，P＞0.05]，即經(jīng)加熱后的小鼠尿液并不能被線蟲(chóng)識(shí)別出是否經(jīng)過(guò)照射。因此，我們認(rèn)為照射后小鼠尿液中能被線蟲(chóng)特異性識(shí)別的物質(zhì)為揮發(fā)性代謝物。

表 1 不同劑量照射后不同時(shí)間點(diǎn)小鼠尿液中秀麗隱桿線蟲(chóng)的百分?jǐn)?shù)（ ±s，%）Table 1 Percentage of Caenorhabditis elegans in urine of mice at different time points after different doses of irradiation( ±s, %)

表 1 不同劑量照射后不同時(shí)間點(diǎn)小鼠尿液中秀麗隱桿線蟲(chóng)的百分?jǐn)?shù)（ ±s，%）Table 1 Percentage of Caenorhabditis elegans in urine of mice at different time points after different doses of irradiation( ±s, %)

注：a 表示與對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=17.628～133.349，均P＜0.001）

組別 4 h 8 h 24 h對(duì)照組（n=12） 20.00±2.04 21.00±1.41 20.17±1.75 2 Gy照射組（n=12） 22.25±2.99 63.25±7.55a 83.92±4.27a 4 Gy照射組（n=12） 18.58±3.26 77.33±8.77a 88.50±3.34a 6 Gy照射組（n=12） 19.92±1.97 72.58±6.14a 88.75±1.76a

3 討論

由于核污染等意外照射引起的電離輻射暴露可造成人體多處組織和器官損傷，同時(shí)在體內(nèi)誘導(dǎo)一系列氧化應(yīng)激反應(yīng)，從而導(dǎo)致機(jī)體功能障礙[19]，因此，當(dāng)意外發(fā)生時(shí)，對(duì)受照人群的快速辨別成為臨床上急需解決的問(wèn)題之一。然而，由于個(gè)體差異，臨床上現(xiàn)有的診斷方法僅能從表觀癥狀對(duì)暴露于電離輻射的人群進(jìn)行區(qū)分，經(jīng)常導(dǎo)致進(jìn)一步的臨床指導(dǎo)和治療出現(xiàn)拖延。因此，我們需要一種可用于快速評(píng)估個(gè)人輻射劑量的生物標(biāo)志物，已有研究者利用定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)定量分析輻射誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)表達(dá)，篩選出了一些特異度高、靈敏度好的輻射標(biāo)志物[20-21]，但這些方法所用到的組織樣本需要活檢，并不適用于大規(guī)模的輻射暴露。目前已知與腫瘤預(yù)后相關(guān)的揮發(fā)性化合物存在于尿液中[22-23]，且國(guó)外已有研究者嘗試使用嗅覺(jué)靈敏的生物，如豬、狗、線蟲(chóng)等，以及電子氣味識(shí)別系統(tǒng)對(duì)患者的體液氣味進(jìn)行分辨，以此獲得更好的疾病預(yù)測(cè)和臨床指導(dǎo)[23-25]，但是關(guān)于輻射劑量生物標(biāo)志物的研究仍以蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)為主，尚未有關(guān)于尿液揮發(fā)性代謝物和輻照暴露的報(bào)道。故人群意外暴露于電離輻射后，識(shí)別尿液中的揮發(fā)性代謝物有待成為早期評(píng)估個(gè)人輻射劑量和輻射損傷程度的方法之一，此法快速、樣本采集方便且無(wú)創(chuàng)，可更好地幫助輻照后區(qū)域劑量重建、評(píng)估患者預(yù)后情況、指導(dǎo)早期用藥和手術(shù)，從而制定最佳的治療策略。

在本研究中，尿液均經(jīng)離心后使用，前期發(fā)現(xiàn)線蟲(chóng)對(duì)不離心的尿液同樣具有趨向性，因此尿液中的沉淀物質(zhì)對(duì)線蟲(chóng)趨向性無(wú)影響，但為了便于實(shí)驗(yàn)統(tǒng)一，本研究一律采用離心法。在照射后不同時(shí)間點(diǎn)的爬行實(shí)驗(yàn)中，對(duì)于受照射后小鼠尿液產(chǎn)生代謝物的時(shí)間，我們展開(kāi)了以時(shí)間為軸的取樣方式，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)小鼠受照8 h 后，線蟲(chóng)可通過(guò)其尿液識(shí)別受照個(gè)體。由于線蟲(chóng)對(duì)未照射小鼠尿液并無(wú)排斥性，因此，對(duì)照組小鼠尿液中線蟲(chóng)百分?jǐn)?shù)在8 h 后明顯低于8 h 前，這是由于線蟲(chóng)在未照射小鼠尿液中屬于隨機(jī)分散分布，并無(wú)規(guī)律，同樣在其他結(jié)果中也出現(xiàn)此情況，并未明顯聚集。在劑量與時(shí)間的關(guān)系實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)照射劑量在2 Gy 時(shí)，照射組小鼠尿液仍吸引線蟲(chóng)聚集，且不論劑量高低，均在8 h時(shí)出現(xiàn)差異，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而低于2 Gy 劑量照射時(shí)，小鼠尿液中揮發(fā)性代謝物是否依然可以吸引線蟲(chóng)，有待進(jìn)一步驗(yàn)證。風(fēng)扇實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，線蟲(chóng)是通過(guò)氣味辨別照射后小鼠尿液的。加熱實(shí)驗(yàn)中，照射組與對(duì)照組無(wú)明顯差異，這表明加熱后照射組小鼠的尿液中不再具有特異性代謝物，因而判斷小鼠尿液中吸引線蟲(chóng)的代謝物為揮發(fā)性物質(zhì)?？紤]到進(jìn)一步臨床應(yīng)用將脫離線蟲(chóng)模式，未來(lái)我們的工作中將不再使用線蟲(chóng)進(jìn)行更低劑量的檢測(cè)，而是使用氣相色譜-質(zhì)譜分析直接對(duì)該氣質(zhì)代謝物進(jìn)行鑒定和定量。已有研究對(duì)血吸蟲(chóng)感染的小鼠尿液進(jìn)行氣質(zhì)代謝物分析，其中馬尿酸鹽被指出與感染有關(guān)[26]。在未來(lái)的工作中，我們也將對(duì)照射后小鼠的尿液進(jìn)行氣質(zhì)代謝物分析，由于物種差異，當(dāng)憑借該代謝物進(jìn)行臨床早期診斷時(shí)，人類受到射線照射后該代謝物在尿液中的出現(xiàn)時(shí)間有待更多考證。

在本研究中，小鼠輻射損傷模型是通過(guò)2、4、6 Gy 或7.5 Gy 全身照射建成的，因此不同劑量照射對(duì)小鼠身體造成的損傷有所不同。其中2 Gy 或4 Gy 照射可能造成小鼠造血系統(tǒng)的損傷，而7.5 Gy則可能造成小鼠全身不同器官不同程度的損傷。其中包括腎臟，腎臟的損傷對(duì)尿液質(zhì)量及成分有所影響，因此，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果不排除腎臟損傷造成對(duì)小鼠尿液質(zhì)量的影響?；谝陨显?，對(duì)尿液中氣質(zhì)標(biāo)志物的篩選至關(guān)重要。在未來(lái)工作中，可采用不同動(dòng)物模型，使用氣相色譜-質(zhì)譜分析代謝組學(xué)方法從尿液中篩選表達(dá)代謝產(chǎn)物，并分析生物標(biāo)志物與輻射劑量的關(guān)系，為探索一種新的方便可行的診斷方法提供依據(jù)。

利益沖突本研究由署名作者按以下貢獻(xiàn)聲明獨(dú)立開(kāi)展，不涉及任何利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明張雪瑩負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)的實(shí)施、數(shù)據(jù)的處理、論文的撰寫(xiě)；朱彤負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)思路的提供與設(shè)計(jì)、論文的修訂；樊賽軍負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)思路的提供與設(shè)計(jì)。