楊忠明

（長江師范學(xué)院現(xiàn)代農(nóng)業(yè)與生物工程學(xué)院，重慶 408100）

運輸應(yīng)激是在運輸途中禁食、限飼、顛簸、摩擦、冷熱等環(huán)境變化和心理壓力等應(yīng)激源的綜合作用下，機體產(chǎn)生本能的適應(yīng)性和防御性反應(yīng)[1]。血液生化指標(biāo)變化可提示存在應(yīng)激反應(yīng)及細(xì)胞損傷，其原因可能是由于長途運輸中的不良應(yīng)激導(dǎo)致多種細(xì)菌和病毒的混合感染[2]。據(jù)相關(guān)報道，運輸對驢血液中的多個生化指標(biāo)具有顯著性影響[3]；4 h 運輸可致大約克和杜×長×大豬血液中肌酸激酶（CK）分別增高373.48%和366.42%[4]；運輸應(yīng)激對試驗牛的生化指標(biāo)有明顯改變[5]。目前，對牛、山羊、豬、驢運輸應(yīng)激后CK、乳酸脫氫酶（LDH）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、無機離子、pH 等方面的研究較多，但目前還沒有關(guān)于運輸應(yīng)激對雞的生化指標(biāo)和無機離子影響的研究。在實際生產(chǎn)中家禽一般采用公路運輸[6]，肉雞宰前運輸時間一般都在2 h 左右[7]。本試驗對比分析了達(dá)上市日齡（60 d）和上市體重（2.3～2.5 kg）的青腳麻雞[8]在運輸前后血清CK、LDH、ALT、AST、ALP、無機離子等指標(biāo)的變化，探討運輸應(yīng)激與血液生化指標(biāo)變化的關(guān)系，為運輸后正常飼養(yǎng)提供指導(dǎo)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計 在某大型養(yǎng)雞場中抽取60 只體格健壯、精神正常、體重2.3～2.5 kg、60 日齡的青腳麻雞（公雞），隨機分為4 組。在運輸前0.5 h，測定各試驗組的血液生化指標(biāo)和無機離子濃度。運輸2 h 后，4 組分別在正常飼養(yǎng)0.5 h 及1、3、5 d 后測定血液生化指標(biāo)，并與運輸前各組指標(biāo)和無機離子濃度進(jìn)行比較。。

1.2 試驗儀器 全自動生化分析儀（美國貝克曼庫爾特AU680），ST16R 臺式高速冷凍離心機Thermo（賽默飛世爾科技有限公司）。

1.3 主要試劑 CK、LDH、ALT、AST、ALP 試劑盒為寧波美康生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.4 飼養(yǎng)管理及運輸 運輸前后4 組試驗動物飼料和飼養(yǎng)管理方式不變，試驗日糧參照NRC（2012）家禽營養(yǎng)需要配制，并結(jié)合試驗肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，采用特驅(qū)518商品肉雞全價料(營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)：水分≤14.0 %、粗蛋白質(zhì)≥16.0 %、粗纖維≤6.0 %、粗灰分≤7.0 %、蛋氨酸0.32～0.90 %、鈣0.6～1.3 %、總磷≥0.55 %。試驗肉雞平養(yǎng)，免疫程序按照常規(guī)免疫進(jìn)行，自由采食和飲水。運輸前試驗雞群禁水禁食，運輸過程中相對濕度75%，溫度21～25℃；裝箱密度為5 只/籠，籠子集中堆放；車速40～60 km/h，運輸時間2 h，約100 km。

1.5 血樣采集與處理 分別在運輸前0.5 h 對60 只試驗青腳麻雞和2 h 運輸結(jié)束后飼養(yǎng)0.5 及飼養(yǎng)1、3、5 d組2 次雞翅靜脈采血2 mL，制備血清，-20℃保存，并于24 h 內(nèi)送檢。

1.6 生化指標(biāo)及血清無機離子測定 采用全自動生化分析儀檢測CK、LDH、ALT、AST、ALP 指標(biāo)。采用全自動生化分析儀檢測Na+（焦銻酸鉀比濁法）、K+（四苯硼鈉比濁法）、Cl-（硫氰酸汞比色法）、Ca2+（甲基麝香草酚藍(lán)法）、P（鉬藍(lán)法）。

1.7 統(tǒng)計分析 采用SPSS 17.0 軟件和Excel 2003 進(jìn)行One-Way ANOVA 統(tǒng)計分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。P＜0.01 表示與運輸前0.5 h 差異極顯著，P＜0.05 表示與運輸前0.5 h 差異顯著，P＞0.05 表示與運輸前0.5 h差異不顯著。

2 結(jié)果

2.1 運輸應(yīng)激對青腳麻雞血清生化指標(biāo)的影響 由表1 可見，與運輸前相比，CK 濃度在運輸后1 d 極顯著升高，在運輸后3 d 顯著升高，而運輸后0.5 h 和運輸后5 d 無顯著差異。與運輸前相比，LDH 在運輸后3 d 顯著升高，運輸后0.5 h 和1、5 d 無顯著差異。運輸后ALT 濃度較運輸前均升高（P＞0.05）。運輸后AST 的濃度與運輸前相比均升高，運輸后0.5 h、運輸后1 d 與運輸前差異極顯著，運輸后3 d 與運輸前差異顯著，運輸后5 d與運輸前無顯著性差異。運輸后ALP 濃度與運輸前相比均降低，運輸后0.5 h、運輸后1 d 和3 d 與運輸前差異極顯著，運輸后5 d 與運輸前無顯著性差異。

表1 運輸應(yīng)激對青腳麻雞血清生化指標(biāo)的影響（n=15） U/L

2.2 運輸應(yīng)激對青腳麻雞血清無機離子的影響 由表2可見，運輸后K+濃度與運輸前相比均降低，運輸后1 d降到最低（P＜0.01），運輸后3 d 較運輸前顯著減少；而運輸后0.5 h 和運輸后5 d 無顯著差異。與運輸前相比，Na+濃度在運輸后0.5 h 升高，運輸后1、3、5 d 均降低，在運輸后3 d 降到最低，與對照組差異顯著，而運輸后0.5 h及1、5 d 無顯著差異。Cl-濃度在運輸后0.5 h 和1、3 d較運輸前均升高，運輸后3 d 升至最高（P＜0.01），運輸后5 d 低于運輸前水平（P＞0.05）。運輸后Ca2+濃度與運輸前相比均降低。運輸后P 濃度較運輸前均降低（P＞0.05）。

3 討 論

3.1 運輸應(yīng)激對青腳麻雞血清生化指標(biāo)的影響 血液生化指標(biāo)是反映動物運輸應(yīng)激時體內(nèi)物質(zhì)代謝和某些組織器官機能狀態(tài)變化的一個重要特征[9]。CK 功能與細(xì)胞內(nèi)能量轉(zhuǎn)換、肌肉收縮、ATP 再生直接相關(guān)[10]。血液中CK 活性的升高可在一定程度上反映機體組織受損失以及損傷的程度[11]，其活性顯著升高表明肌細(xì)胞的膜系統(tǒng)受損[12]。本試驗與吳學(xué)壯等[13]研究結(jié)果一致，運輸應(yīng)激后青腳麻雞血清中的CK 含量顯著升高，原因可能是青腳麻雞在運輸中由于應(yīng)激源的刺激，導(dǎo)致肌肉損傷和疲勞引起肌細(xì)胞的膜系統(tǒng)受損，致使其體內(nèi)CK含量升高。LDH 在糖代謝中催化丙酮酸向酵解方向產(chǎn)生乳酸[14]。在正常情況下，細(xì)胞膜的完整性可以保證LDH 極少透出細(xì)胞膜而進(jìn)入機體組織液[15]；因此，即使有少量組織壞死，也可導(dǎo)致體內(nèi)血液中LDH 含量上升[16]。本試驗中，運輸應(yīng)激導(dǎo)致青腳麻雞血清中LDH含量明顯上升，這與王國艮等[17]研究的結(jié)論相似，原因可能是青腳麻雞在本次運輸途中，多種細(xì)菌和病毒的混合感染對其機體的組織有損傷，導(dǎo)致血清中LDH 含量上升。ALT 主要集中存在于肝臟中，在運輸應(yīng)激作用下，動物過度緊張，皮膚毛細(xì)血管充血，肝臟相對缺血缺氧，肝臟細(xì)胞通透性增強，ALT 從肝臟轉(zhuǎn)移到血液中。劉犇[18]研究發(fā)現(xiàn)，運輸應(yīng)激會使豬ALT 明顯增高，與本試驗結(jié)果基本一致。AST 主要存在肝細(xì)胞線粒體內(nèi)，當(dāng)肝臟發(fā)生損傷或者嚴(yán)重壞死時，將會引起血液中AST濃度的急劇升高。在運輸后AST 濃度顯著性升高也說明運輸應(yīng)激對青腳麻雞肝功能影響較大[19]。Mousaie 等[20]研究發(fā)現(xiàn)，對山羊進(jìn)行運輸應(yīng)激試驗，運輸后血清AST顯著升高，與本試驗結(jié)果基本一致。ALP 是反映成骨細(xì)胞活性、骨生成狀況和鈣、磷代謝的重要生化指標(biāo)[21]。王莉梅等[22]研究發(fā)現(xiàn)，運輸后安格斯牛血液中ALP 下降顯著，與本研究結(jié)果符合。

3.2 運輸應(yīng)激對青腳麻雞血清無機離子的影響 K+和Na+對維持細(xì)胞正常滲透壓和生理功能有著不可替代的作用。2 h 運輸應(yīng)激導(dǎo)致青腳麻雞高度緊張，呼吸加劇，大量排放CO2。機體為了保持平衡，必將排出血液里Na+、K+，使得機體血漿滲透壓下降，引起皮質(zhì)醇增加。當(dāng)機體皮質(zhì)醇水平增加后，又能加強Na+的重吸收，K+的排出，導(dǎo)致K+明顯下降。孫曉晨[23]研究指出，2 h 運輸使空白對照組血清內(nèi)K+下降、Na+上升，與本次試驗測定結(jié)果一致。在運輸結(jié)束后，正常飼養(yǎng)中，由于青腳麻雞體內(nèi)調(diào)節(jié)作用，K+和Na+均有一定的波動，但是在運輸結(jié)束后5 d 左右恢復(fù)到運輸前的正常值。關(guān)于Cl-在應(yīng)激作用下發(fā)生變化的報道較少。劉鈾等[24]在維生素E 防治肉雞熱應(yīng)激機理的初步研究表明，熱應(yīng)激會導(dǎo)致Cl-減少。本試驗在運輸青腳麻雞試驗后導(dǎo)致Cl-升高，在運輸后1、3 d 與運輸前差異極顯著，其原因可能是天氣太熱，導(dǎo)致動物呼吸速率加快或者乳酸含量升高所致。由于Na+和Cl-是以氯化鈉的形式存在，Na+濃度升高后就要結(jié)合Cl-。因此，血清中Na+濃度的升高必然會引起Cl-的增加，所以這種協(xié)同性表現(xiàn)在運輸后0.5 h 最為明顯。有關(guān)研究證實，血清鈣和血清無機磷都會因為熱應(yīng)激而下降，而且血清無機磷的下降速度更快[25]。本試驗運輸后0.5 h 試驗雞血清P 下降很快，其原因可能是在運輸過程中溫度偏高所引起。Ca2+下降也可能是氫離子濃度和碳酸根離子濃度明顯下降，導(dǎo)致機體內(nèi)酸堿失去平衡，動物體有機酸分泌增加，血液pH 降低，Ca2+與有機酸結(jié)合，導(dǎo)致血中Ca2+下降。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，2 h 運輸應(yīng)激會引起青腳麻雞血液生化指標(biāo)中的CK、LDH、ALT、AST、ALP 和無機離子K+、Na+、Cl-發(fā)生明顯變化；在運輸結(jié)束正常飼養(yǎng)5 d 后上述指標(biāo)恢復(fù)至運輸前正常水平，說明運輸后正常飼養(yǎng)5 d 能有效降低運輸應(yīng)激對雞的影響。