●劉香香 陳思婷 董志國 王 堅 趙建國

（1.五指山市動物疫病預防控制中心 海南 五指山 572200；2.中國熱帶農業(yè)科學院椰子研究所 海南 文昌 571339；3.海南大學動物科技學院 海南 ?？?570228；4.海南大學生命科學學院 海南 海口 570228；5.海南大學全健康研究院 海南 ?？?570228）

高效、生態(tài)、循環(huán)和智慧農業(yè)是我國脫貧攻堅和鄉(xiāng)村振興的主要發(fā)展方向。海南省林木資源豐富，不僅有豐富的天然林，而且人工林木種植面積發(fā)展迅速，椰子、檳榔、橡膠和觀賞、果木林均適合發(fā)展林下經(jīng)濟[1]。林下養(yǎng)羊是充分利用林間牧草資源和林蔭環(huán)境的一種新型養(yǎng)羊模式，不僅可以利用林下生物資源，增加農戶經(jīng)濟收入，而且可以提供足夠的空間環(huán)境，滿足動物福利要求。然而，海南高溫、高濕的氣候環(huán)境易導致黑山羊熱應激，盡管海南黑山羊對濕熱環(huán)境有較強的適應性，但較高的環(huán)境溫度和相對濕度對黑山羊的生理機能和生產(chǎn)性能都會產(chǎn)生不同程度的影響[2-3]。熱應激狀態(tài)下，山羊可通過運動行為，改變體液理化指標以調整自身的產(chǎn)熱和散熱，維持體溫恒定[4]。具體表現(xiàn)在心率、呼吸頻率增加，直腸溫度升高，體液中電解質、血象指標改變等[5]。本文以海南黑山羊為研究對象，探討熱應激狀態(tài)林下生境養(yǎng)殖黑山羊其各項生理參數(shù)的變化規(guī)律，篩選海南黑山羊適應性和耐熱性的適宜評價指標，為預防和減緩林下養(yǎng)殖黑山羊的熱應激提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

75%酒精，批號：20200206，天津市津東天正精細化學試劑廠；獸用全自動血細胞分析儀：Vetscan HM5790-0000 型，Abaxis Inc；高速冷凍離心機：H1850R 型，長沙高新技術產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)湘儀離心機儀器有限公司；生物安全柜：HR40-II A2 型，青島海爾特種電器有限公司；立式自動壓力蒸汽滅菌鍋：G154TW 型，致微（廈門）儀器有限公司；溫濕度計：272-A型，衡水創(chuàng)紀儀器儀表有限公司；秒表：TA228 型，深圳金拓佳電子科技有限公司；可調微量移液槍（1000 μL、200 μL），Thermo。

1.2 試驗動物與管理

供試黑山羊來自海南文昌某黑山羊養(yǎng)殖合作社（東經(jīng)110°72′，北緯19°61′）。羊舍結構為上下雙層磚木結構，上層供羊只休息、采食，下層收集糞尿，便于清理。羊舍結構堅固，抗風耐用。每棟羊舍建有20個羊欄，羊欄分列左右兩側，中間有過道。在不同羊舍隨機選擇發(fā)育正常、健康無病的成年海南黑山羊60只（雌雄各半），依次編號（黃色耳標，便于識別）。早晚補飼精料，羊群自由飲水，羊舍日常管理規(guī)范，定期對羊群免疫、驅蟲。

1.3 試驗方案

每月隨機選擇3 d晴好天氣，10:00～16:00監(jiān)測林下環(huán)境溫度和相對濕度，記錄干濕球示數(shù)。人工采集羊只靜脈血1 mL，檢測血常規(guī)等生理指標。同時，監(jiān)測放牧羊群體溫（直腸溫度）、呼吸頻率，并觀察羊群高溫、高濕氣候條件下的行為規(guī)律。

1.4 溫濕指數(shù)與熱應激程度判定

溫濕指數(shù)（THI）是評價外界環(huán)境舒適度和動物熱應激程度的指標。在林下黑山羊活動區(qū)域，距離地面約1.5 m處懸掛3只干濕球溫度計，避免黑山羊觸及。每日10:00、12:00、14:00和16:00記錄干球溫度（Td）和濕球溫度（Tw），并計算當日高溫時段平均溫濕指數(shù)（THI），計算 公 式 如 下：THI=0.72×（Td+Tw）+40.6[6]。當55≤THI≤70時，黑山羊無熱應激反應；當70＜THI＜75時，黑山羊處于輕微熱應激；當75≤THI≤85時，黑山羊處于中度熱應激；當THI＞85時，黑山羊處于嚴重熱應激[6-8]。

1.5 檢測指標與方法

體溫（直腸溫度）：騎跨握角保定，獸用體溫計，使用前將水銀柱甩至35 ℃以下，消毒棉擦拭并涂潤滑劑后，緩慢插入肛門內，保持3～5 min后取出，擦凈體溫計上的糞便，查看讀數(shù)[9]。呼吸頻率：羊保定5～10 min后，使用聽診器在肺臟體表投影區(qū)聽呼吸音計數(shù)[10]。血常規(guī)指標：血液樣品使用一次性采血針和EDTA-K2一次性真空采血管采集，采集后迅速搖勻（顛倒5～6次），置于保溫箱中（內置冰袋），送往實驗室檢測（4 h內完成），主要檢測指標包括白細胞計數(shù)（WBC，109/L）、淋巴細胞計數(shù)（LYM，109/L）、單核細胞計數(shù)（MON，109/L）、中性粒細胞計數(shù)（NEU，109/L）、紅細胞計數(shù)（RBC，1012/L）、血紅蛋白含量（HGB，g/dL）、紅細胞比容（HCT，%）。

1.6 數(shù)據(jù)處理

使用Excel 2020軟件進行數(shù)據(jù)的整理，組間比較采用SPSS19.0軟件進行獨立樣本t檢驗，結果采用“平均值±標準差”表示。

2 結果與分析

2.1 監(jiān)測時間、環(huán)境溫濕指數(shù)與熱應激程度

林下試驗環(huán)境全年不同月份監(jiān)測時間、環(huán)境溫濕指數(shù)與對應熱應激程度，見表1。無熱應激時間為11月、12月和翌年1月、2月，平均溫濕指數(shù)依次為68.14、65.19、59.11和61.33；輕微熱應激時間為3月、4月、9月和10月，平均溫濕指數(shù)依次為72.14、73.82、71.68和70.55；中度熱應激時間為5月、6月、7月和8月，平均溫濕指數(shù)依次為77.47、76.64、82.71和80.55，5～8月為試驗場地全年溫度最高月份，林下平均環(huán)境溫度為31.79 ℃。

表1 監(jiān)測時間、環(huán)境溫濕指數(shù)與熱應激程度

2.2 海南黑山羊體溫及呼吸頻率

不同熱應激狀態(tài)下海南黑山羊體溫及呼吸頻率的監(jiān)測結果，見表2。無熱應激狀態(tài)下，海南黑山羊體溫（直腸溫度）平均值為39.14 ℃，呼吸頻率平均為每分鐘25.36次。輕微熱應激狀態(tài)下，海南黑山羊體溫平均值為39.16℃，與無熱應激狀態(tài)比較，體溫平均值升高0.02 ℃，差異不顯著（P＞0.05）；呼吸頻率平均為每分鐘28.17次，與無熱應激狀態(tài)比較，呼吸頻率每分鐘增加2.81次，差異不顯著（P＞0.05）。中度熱應激狀態(tài)下，海南黑山羊體溫平均值為39.17 ℃，與無熱應激狀態(tài)比較，體溫平均值升高0.03 ℃，差異不顯著（P＞0.05）；呼吸頻率平均為每分鐘108.24次，與無熱應激狀態(tài)比較，呼吸頻率每分鐘增加82.88次，差異顯著（P＜0.05）?？梢姡卸葻釕顟B(tài)下，海南黑山羊可通過增加呼吸頻率緩解環(huán)境熱應激。

表2 不同熱應激狀態(tài)下海南黑山羊體溫、呼吸頻率的監(jiān)測結果

2.3 海南黑山羊血常規(guī)參數(shù)

動物血常規(guī)參數(shù)是應激性生理反應的重要表征指標，不同熱應激狀態(tài)，海南黑山羊血常規(guī)參數(shù)變化規(guī)律見表3。無熱應激狀態(tài)下，各項血常規(guī)參數(shù)值均處于正常參考范圍內。輕微熱應激狀態(tài)下，血常規(guī)參數(shù)中白細胞、淋巴細胞、單核細胞和中性粒細胞數(shù)量下降，紅細胞數(shù)、血紅蛋白含量及紅細胞比容上升，但與無熱應激狀態(tài)比較，各項參數(shù)差異均不顯著（P＞0.05），且均在正常參考范圍內。中度熱應激狀態(tài)下，血常規(guī)參數(shù)中白細胞、淋巴細胞、單核細胞和中性粒細胞數(shù)顯著上升，與無熱應激狀態(tài)比較差異顯著（P＜0.05），紅細胞數(shù)、血紅蛋白含量及紅細胞比容上升，但與無熱應激狀態(tài)比較，差異均不顯著（P＞0.05）。

表3 不同熱應激狀態(tài)下海南黑山羊血常規(guī)檢測結果

3 討論

呼吸頻率、體溫和血常規(guī)參數(shù)是山羊適應性和耐熱性評價常見的生理指標。黑山羊可以在高達43 ℃環(huán)境中通過出汗、喘息等熱調節(jié)機制耐受幾個小時。當氣溫升高到某一限值時，開始呼吸急促，并張口伸舌，流涎，進行熱性喘息，呼吸頻率可達300～400次/min，而常溫靜息狀態(tài)時僅為10～30次/min，黑山羊的耐熱極限在35～40 ℃。本試驗林下環(huán)境測定溫濕指數(shù)未達到嚴重熱應激狀態(tài)，隨著試驗環(huán)境溫濕指數(shù)的升高，海南黑山羊體溫相對恒定，未見明顯異常變化，但呼吸頻率明顯增加。這表明，海南黑山羊在林下養(yǎng)殖環(huán)境中主要通過增加呼吸頻率緩解熱應激反應。動物對環(huán)境溫濕度變化非常敏感，長期熱應激會促進糖皮質激素分泌而損傷免疫器官，誘導釋放炎癥因子，引發(fā)炎癥反應[11]。熱應激狀態(tài)下，血液嗜中性粒細胞會加速凋亡，白細胞和淋巴細胞數(shù)量會降低，導致機體免疫力下降。本試驗，在中度熱應激狀態(tài)下，黑山羊白細胞、中性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞數(shù)量顯著增加，這說明黑山羊可能通過免疫調節(jié)提高抗感染能力，并維持正常的生理功能[12]。隨著環(huán)境溫度的升高，動物通過呼吸和出汗失去大量水分，使血漿容積降低，紅細胞比容增加，如果該過程持續(xù)時間過長，會引發(fā)動物機體脫水。在不同環(huán)境和管理條件下飼養(yǎng)的動物，其紅細胞成分和含量會存在差異，因此，在開展相同時間點不同動物之間或相同動物不同時間點之間的紅細胞成分差異性分析時，需要進行實時測定比較。

高溫、高濕、熱輻射和風速等復合生境因素異常易導致黑山羊不同程度的熱應激反應。熱應激不僅嚴重影響黑山羊生產(chǎn)性能和肉品質等級，而且易導致其免疫力下降，增加疫病傳播風險，嚴重的表現(xiàn)為中暑，甚至死亡。海南島屬于熱帶季風氣候，夏季時間從3月中旬至11月上旬，天氣炎熱、相對濕度大。7、8月為高溫月份（25～29 ℃），最熱的7月平均溫度在28～32 ℃。全年濕度大，年均水汽壓23～26 kPa。熱應激嚴重影響畜禽引種與生產(chǎn)經(jīng)濟效益。探究海南黑山羊熱應激反應表征參數(shù)，有利于及時評價其熱應激程度，并采取積極的應對措施緩解熱應激危害。林下養(yǎng)殖時，林蔭環(huán)境有助于減少太陽輻射，但環(huán)境溫度、相對濕度對黑山羊的影響起主導作用。通常情況下，海南黑山羊的平均體溫（環(huán)境溫度23 ℃）為37.6 ℃（ 37～39 ℃），直腸溫度在38.3～39.0 ℃。當溫濕指數(shù)升高時，黑山羊會通過機體體溫調節(jié)機制適應環(huán)境變化。然而，一旦調節(jié)機制失效，直腸溫度即隨之增加，導致體溫過高。中度熱應激條件下，海南黑山羊林下環(huán)境熱應激損傷不明顯。海南黑山羊是在特定生態(tài)條件下經(jīng)過長期培育的適于熱區(qū)養(yǎng)殖的優(yōu)良地方肉羊品種，這可能與長期適應形成的較好 的耐熱機能有關。

4 結論

林下養(yǎng)羊試驗監(jiān)測的生理指標參數(shù)，反映了海南黑山羊對林下自然生境和飼養(yǎng)管理條件具有良好的適應性。呼吸頻率及血常規(guī)參數(shù)中白細胞、淋巴細胞、單核細胞和中性粒細胞數(shù)與黑山羊熱應激程度相關，可作為海南黑山羊耐熱性的評價參考指標。