武越 銀河 陳琳 張威 周猷 魏戌 李晉玉 朱立國(guó)

摘要 目的：基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討中藥復(fù)方定眩湯治療頸性眩暈的分子機(jī)制。方法：通過(guò)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP）數(shù)據(jù)庫(kù)和BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫(kù)篩選藥物相關(guān)靶點(diǎn)，通過(guò)國(guó)際公認(rèn)疾病基因數(shù)據(jù)庫(kù)篩選疾病相關(guān)靶點(diǎn)，取交集后獲得直接靶點(diǎn)并在STRING數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行擴(kuò)充，后進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治霁@得定眩湯治療頸性眩暈的關(guān)鍵靶點(diǎn)，進(jìn)行基因本體（GO）富集分析和京都基因和基因組百科全書(shū)（KEGG）富集分析，以進(jìn)一步分析其治療頸性眩暈的分子機(jī)制。結(jié)果：在TSMSP數(shù)據(jù)庫(kù)與BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫(kù)中共提取出活性成分所對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)350個(gè)。在疾病基因數(shù)據(jù)庫(kù)中得到與頸性眩暈相關(guān)的已知靶點(diǎn)253個(gè)。2組靶點(diǎn)映射后得到定眩湯作用于頸性眩暈的直接靶點(diǎn)21個(gè)，經(jīng)STRING數(shù)據(jù)庫(kù)擴(kuò)充后得到199個(gè)直接和間接靶點(diǎn)。在Cytoscape中進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治龉埠Y選出99個(gè)關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，GO分析結(jié)果表明，關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)的生物過(guò)程主要包括細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡等;細(xì)胞成分主要包括核染色質(zhì)、細(xì)胞外空間等;分子功能主要包括酶結(jié)合、DNA結(jié)合等。涉及的信號(hào)通路有MAPK信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路、VEGF信號(hào)通路等。結(jié)論：定眩湯治療頸性眩暈具有多成分、多靶點(diǎn)的特點(diǎn);研究初步探討了定眩湯作用的關(guān)鍵靶點(diǎn)及涉及的生物學(xué)過(guò)程和信號(hào)通路，發(fā)現(xiàn)其主要作用可能是影響骨平衡、調(diào)節(jié)骨代謝、促進(jìn)血管的修復(fù)、調(diào)控相關(guān)炎癥反應(yīng)。

關(guān)鍵詞 定眩湯;頸性眩暈;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);分子機(jī)制;信號(hào)通路;生物學(xué)過(guò)程;骨代謝;血管修復(fù)

Abstract Objective：To explore the possible molecular mechanism of Dingxuan Decoction in the treatment of cervical vertigo based on network pharmacology.Methods：Drug-related targets through the TCMSP database and BATMAN-TCM database were screened，disease-related targets through the internationally recognized disease gene database were screened，direct targets were obtained after the intersection and expanded them in the STRING database，and then network topology analysis was performed to obtain the key target of Dingxuan Decoction for the treatment of cervical vertigo.GO and KEGG function enrichment analysis were carried out to further analyze the molecular mechanism of the treatment of cervical vertigo.Results：A total of 350 targets corresponding to the active ingredients were extracted from the TSMSP database and the BATMAN-TCM database.In the disease gene database，253 known targets related to cervical vertigo were obtained.After the 2 sets of targets were mapped，21 direct targets of Dingxuan Decoction for cervical vertigo were obtained.After the STRING database was expanded，199 direct and indirect targets were obtained.A total of 99 key nodes were screened out by network topology analysis in Cytoscape，and GO analysis was performed.The results showed that the biological processes of key nodes mainly include cell proliferation，apoptosis，etc.cell components mainly include nuclear chromatin，extracellular space，etc.The molecular functions mainly include enzyme binding，DNA binding and so on.The signal pathways involved were：MAPK signal pathway，PI3K-Akt signal pathway，VEGF signal pathway，etc.Conclusion：The treatment of cervical vertigo with Dingxuan Decoction has the characteristics of multiple components and multiple targets.The key targets，biological processes and signaling pathways involved in the action of Dingxuan decoction are preliminarily investigated，and it is found that its main functions might be to affect bone balance，regulate bone metabolism，promote vascular repair and regulate the process of related inflammation.

Keywords Dingxuan Decoction; Cervical vertigo; Network pharmacology; Molecular mechanism; Signal pathway; Biological process; Bone metabolism; Vascular repair

中圖分類號(hào)：R289.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.10.001

頸性眩暈（Cervical Vertigo，CV）是指由于勞損、退變等諸多因素，機(jī)體出現(xiàn)頸椎椎體結(jié)構(gòu)異常、交感神經(jīng)興奮、椎動(dòng)脈病變等病理變化，從而在頸椎活動(dòng)過(guò)程中產(chǎn)生以眩暈為主的癥狀，大部分患者可伴有頭痛、惡心嘔吐，更有甚者出現(xiàn)短暫性發(fā)作性意識(shí)障礙或跌仆等癥狀的臨床綜合征[1-2]。據(jù)研究顯示，頸性眩暈在我國(guó)成人中發(fā)病率為17.3%[3]，隨著現(xiàn)代社會(huì)“低頭族”的增多，頸性眩暈的患者年齡逐漸年輕化。因其發(fā)病率較高，患者頭暈惡心明顯，影響生命質(zhì)量。

臨床上常以半夏白術(shù)天麻湯治療CV[4-6]，中藥復(fù)方定眩湯（川芎、黃芩、延胡索、葛根、石菖蒲、天麻、白術(shù)、半夏、鉤藤、白芷）是中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院首席研究員朱立國(guó)教授在半夏白術(shù)天麻湯基礎(chǔ)上根據(jù)經(jīng)驗(yàn)加減而成，此方治療頸性眩暈效果顯著，能有效改善患者眩暈癥狀，提高患者生命質(zhì)量。但定眩湯成分較多，同時(shí)中藥又具有多成分、多靶點(diǎn)和系統(tǒng)調(diào)節(jié)的特點(diǎn)，基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究很難展現(xiàn)中藥復(fù)方全面系統(tǒng)的作用。而網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)能夠運(yùn)用現(xiàn)代網(wǎng)絡(luò)技術(shù)，從多角度、多靶點(diǎn)的層面上分析中藥復(fù)方可能的作用機(jī)制[7]。因此借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的思路篩選定眩湯組成藥物的有效活性成分及靶點(diǎn)，分析其治療CV的關(guān)鍵靶點(diǎn)和信號(hào)通路具有重要意義，可為后續(xù)的進(jìn)一步研究指明方向。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)庫(kù)與軟件 在中藥成分檢索中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP）數(shù)據(jù)庫(kù)、BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫(kù)中查詢并篩選定眩湯的組成成分及相對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn);在疾病數(shù)據(jù)庫(kù)（DRUGBANK數(shù)據(jù)庫(kù)、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)、GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)）中查詢并篩選與頸性眩暈有關(guān)的基因;在Uniport數(shù)據(jù)庫(kù)中對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化;在STRING數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）分析;并運(yùn)用Cytoscape 3.5.1軟件、ClueGO插件進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建及數(shù)據(jù)分析[8]。以上數(shù)據(jù)庫(kù)的使用時(shí)間截至2019年12月，研究的思路流程見(jiàn)圖1。

1.2 定眩湯有效活性成分及靶點(diǎn)的查詢與篩選 將除天麻之外的9味中藥分別輸中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP），將口服生物利用度（Oral Bioavailability，OB）設(shè)置為≥30%，類藥性（Drug Like，DL）指數(shù)設(shè)置為≥0.18，在中藥分子機(jī)制的生物信息學(xué)分析工具（Bioinformatics Analysis Tool for Molecular MechANism of Traditional Chinese Medicine，BATMAN-TCM）中搜索天麻（Change Score cutoff to 20 and Adjusted P-value cutoff to 0.05），在Excel表格中記錄2個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)所得信息，并在Uniprot（http：//www.uniprot.org/）中的Uniprot KB數(shù)據(jù)庫(kù)以條件為Organism：Homo Sapiens（Human）檢索篩選所得靶點(diǎn)的對(duì)應(yīng)基因，并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道最終確定定眩湯的活性成分及靶點(diǎn)。

1.3 定眩湯“復(fù)方-藥物-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建 將獲得的與定眩湯有關(guān)的活性成分及靶點(diǎn)導(dǎo)入軟件Cytoscape 3.2.1中構(gòu)建“中藥-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，后運(yùn)用Cytoscape中的network analyzer功能對(duì)此網(wǎng)絡(luò)加以拓?fù)浞治?，以篩選出其中較為重要的靶點(diǎn)。

1.4 已知的CV相關(guān)疾病靶點(diǎn)檢索 采用“cervical vertigo”為關(guān)鍵詞，在國(guó)際公認(rèn)的疾病相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)中（其中包括DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)、OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)、GeneCards等）來(lái)對(duì)CV發(fā)病相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行查詢篩選。將查詢結(jié)果中重復(fù)靶點(diǎn)去除，得到與CV發(fā)病過(guò)程相關(guān)的已知靶點(diǎn)。

1.5 定眩湯作用于CV的關(guān)鍵靶點(diǎn)探索 將定眩湯中篩選出的靶點(diǎn)與CV的相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行映射，將得到的直接靶點(diǎn)在STRING數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行靶點(diǎn)的擴(kuò)充，并刪除重復(fù)項(xiàng)，篩選后得到定眩湯作用于CV的直接和間接靶點(diǎn)。并將篩選后的靶點(diǎn)進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治觯悦鞔_與CV相關(guān)的靶點(diǎn)中較為關(guān)鍵的靶點(diǎn)，并繪制蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)圖。

1.6 基因本體（GO）富集分析和京都基因和基因組百科全書(shū)（KEGG）信號(hào)通路富集分析 通過(guò)STRING數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)關(guān)鍵靶點(diǎn)的生物過(guò)程（Biological Process，BP）、細(xì)胞成分（Cellular Component，CC）、分子功能（Molecular Function，MF）進(jìn)行分析，篩選出P<0.05的富集結(jié)果;同時(shí)運(yùn)用Cytoscape 3.5.1軟件中的“ClueGO”功能對(duì)核心靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG富集分析，得到顯著富集的信號(hào)通路（P<0.01），并按通路的重要性來(lái)繪制餅狀圖;在分析得出的結(jié)果圖中，不同的節(jié)點(diǎn)表示不同的KEGG通路，相同類型的通路用用一種顏色表示，節(jié)點(diǎn)的大小則表示該信號(hào)通路的重要性的大小。

2 結(jié)果

2.1 定眩湯有效活性成分及靶點(diǎn)的查詢與篩選 在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中，按照OB≥30%，DL≥0.18的篩選條件，經(jīng)過(guò)查找篩選后，在該數(shù)據(jù)庫(kù)中找到上述9味中藥的有效活性成分共177個(gè)。其中半夏13個(gè)，白術(shù)7個(gè)，石菖蒲5個(gè)，川芎7個(gè)，黃芩36個(gè)，延胡索49個(gè)，白芷23個(gè)，葛根4個(gè)，鉤藤33個(gè)，在BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索天麻（條件為Change Score cutoff to 20 and Adjusted P-value cutoff to 0.05），共得到23個(gè)活性成分，將活性成分所對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)提取，根據(jù)Uniprot ID刪除重復(fù)項(xiàng)，最終共得到定眩湯組成中藥的活性成分所對(duì)應(yīng)的350個(gè)靶點(diǎn)。

2.2 定眩湯“復(fù)方-藥物-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建 將與組成中藥有關(guān)的活性成分及對(duì)應(yīng)的靶基因?qū)隒ytoscape中，制作活性成分和作用靶基因的關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖，按DC值的不同對(duì)該網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)進(jìn)行分類，篩選出定眩湯中的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)。如圖2所示，在此Cytoscape網(wǎng)絡(luò)圖中，共342個(gè)節(jié)點(diǎn)和3 828個(gè)聯(lián)系。

2.3 已知的CV相關(guān)疾病靶點(diǎn)檢索 選取國(guó)際公認(rèn)的與疾病基因相關(guān)的數(shù)據(jù)庫(kù)，查找與CV關(guān)系密切的已知基因，通過(guò)疾病基因相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)共搜索到263個(gè)疾病相關(guān)靶點(diǎn)（其中GeneCards 19個(gè)，OMIM 240個(gè)，DRUGBANK 4個(gè)），去重后得到個(gè)253個(gè)相關(guān)靶點(diǎn)。見(jiàn)圖3。

2.4 定眩湯作用于CV的關(guān)鍵靶點(diǎn)探索

2.4.1 定眩湯治療CV直接和間接靶點(diǎn)的探索 將定眩湯的350個(gè)靶點(diǎn)和CV的253個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行映射，共得到21個(gè)直接靶點(diǎn)，將21個(gè)直接靶點(diǎn)在STRING數(shù)據(jù)庫(kù)中的Protein by Name欄目中輸入，對(duì)每個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)充，探究與其相關(guān)的靶點(diǎn)，最終篩選高置信度（置信度>0.7）的PPI關(guān)系1 598個(gè)，去重之后獲得199個(gè)直接和間接靶點(diǎn)。見(jiàn)圖4。

2.4.2 定眩湯治療CV的PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 機(jī)體疾病的發(fā)生往往受到多通路的網(wǎng)絡(luò)相互影響，中藥的治療作用不僅僅是對(duì)靶點(diǎn)直接進(jìn)行調(diào)控，還存在著間接調(diào)控的方式。因此我們可根據(jù)PPI關(guān)系數(shù)據(jù)對(duì)靶點(diǎn)間的直接和間接聯(lián)系進(jìn)行研究。在STRING數(shù)據(jù)庫(kù)中以置信度>0.4為條件進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建，本研究發(fā)現(xiàn)定眩湯治療CV的直接與間接靶點(diǎn)之間的相互聯(lián)系有3 181種。見(jiàn)圖5。

2.4.3 定眩湯治療CV的關(guān)鍵靶點(diǎn) 本研究對(duì)定眩湯治療CV的PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治觯瑥亩鴮ふ页鼍W(wǎng)絡(luò)中關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，并探究關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中重要的作用。通過(guò)網(wǎng)絡(luò)圖形化工具Cytoscape對(duì)上述網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治?，篩選出其中DC值大于31的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)共98個(gè)，并在STRING數(shù)據(jù)庫(kù)中以置信度>0.4為條件完成相關(guān)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建。見(jiàn)圖6。其中節(jié)點(diǎn)間聯(lián)系共1 878條。

2.5 定眩湯治療CV基因GO富集分析 在GO富集分析中，生物過(guò)程（BP）共1 805個(gè)GO條目，排名靠前的主要包括細(xì)胞對(duì)化學(xué)刺激的反應(yīng)、對(duì)脂質(zhì)反應(yīng)、細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)、凋亡過(guò)程的調(diào)控、蛋白質(zhì)代謝過(guò)程的正向調(diào)節(jié)等;細(xì)胞成分（CC）共個(gè)84個(gè)GO條目，排名靠前的主要包括核染色質(zhì)、細(xì)胞外空間、細(xì)胞外區(qū)域、胞質(zhì)部分、質(zhì)膜部分;分子功能（MF）共168個(gè)GO條目，排名靠前的主要包括蛋白結(jié)合、RNA聚合酶Ⅱ特異的DNA結(jié)合、腺苷酸環(huán)化酶活性、鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶活性、生長(zhǎng)因子受體結(jié)合、細(xì)胞因子活性等。

2.6 定眩湯治療CV基因KEGG富集分析 運(yùn)用Cytoscape 3.5.1軟件中的“ClueGO”功能進(jìn)行信號(hào)通路分析，在P小于0.01的條件下，確定了127條相關(guān)信號(hào)通路，通路之間的關(guān)系達(dá)到1 459種。其中信號(hào)通路主要涉及炎癥反應(yīng)、成骨和破骨細(xì)胞分化、血管內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù)、激素代謝、脂肪細(xì)胞的調(diào)節(jié)、衰老等方面，富集明顯的通路主要是癌癥相關(guān)的通路、MAPK信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路、松弛素信號(hào)通路、趨化因子信號(hào)通路、FoxO信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號(hào)通路、VEGF信號(hào)通路等。見(jiàn)圖7。

3 討論

頸性眩暈又被稱為椎動(dòng)脈型頸椎病眩暈，臨床上表現(xiàn)為眩暈、惡心等癥狀，老年患者居多，椎動(dòng)脈缺血、血管管腔狹窄、動(dòng)脈粥樣硬化等均可導(dǎo)致眩暈的發(fā)生[9]。隨著現(xiàn)代社會(huì)節(jié)奏的加快、社會(huì)壓力的增大、人口老齡化程度的增加，CV發(fā)病率逐年遞增，且年輕化趨勢(shì)明顯。該病發(fā)病機(jī)制尚不明確，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，CV主要是因?yàn)轭i椎間盤(pán)突出、骨質(zhì)增生等壓迫椎動(dòng)脈、局部炎癥介質(zhì)的刺激頸交感神經(jīng)，進(jìn)而誘發(fā)椎動(dòng)脈痙攣，導(dǎo)致后循環(huán)供血不足，出現(xiàn)眩暈、頭痛、惡心等癥狀[10]。在治療上除運(yùn)用手術(shù)外，可采用針灸、推拿等理療手段配合服用血管擴(kuò)張劑、非甾體抗炎藥、中藥等藥物治療，也取得了良好的臨床效果[11]。頸性眩暈在中醫(yī)學(xué)中屬于“眩暈”病癥。《丹溪心法》中有“無(wú)痰則不作?！钡拿枋?《丹溪心法·頭?！分刑岬健邦^眩，痰挾氣虛并火”。可得出痰火相結(jié)也會(huì)導(dǎo)致眩暈的發(fā)生。本病在早期及發(fā)作期時(shí)，癥狀多表現(xiàn)為實(shí)癥，病因病機(jī)以風(fēng)、火、痰、瘀為主;臨床分型有風(fēng)陽(yáng)上擾型、痰濁內(nèi)阻型、瘀血內(nèi)停型等。本研究所用的定眩湯以君藥天麻定弦熄風(fēng)，石菖蒲化痰開(kāi)竅，以臣藥半夏燥濕化痰止嘔，白術(shù)健脾補(bǔ)氣，兩藥相輔，增強(qiáng)化痰之功;佐延胡索、川芎活血止痛，葛根解肌通陽(yáng)，黃芩清熱燥濕，鉤藤清熱熄風(fēng)。諸藥合用，使?jié)癯祷瑲庑醒?，受蒙之清竅得以升通，眩暈得安。且課題組前期通過(guò)小樣本隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)證實(shí)，中藥口服治療頸性眩暈較對(duì)照組甲磺酸倍他司汀片療效顯著，能夠明顯改良患者眩暈癥狀，提高患者生命質(zhì)量。

本研究通過(guò)對(duì)PPI分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AKT1、TNF、TP53、CXCL8、VEGFA等是中藥治療的核心靶點(diǎn)，AKT1是AKT家族的一員，可調(diào)控細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)，與細(xì)胞凋亡和能量代謝等細(xì)胞過(guò)程相關(guān)。TP53基因編碼的P53蛋白的重要作用是調(diào)控細(xì)胞分裂和增殖，AKT1與TP53在CV發(fā)生發(fā)展過(guò)程中影響成骨與破骨細(xì)胞的增殖與抑制，調(diào)控骨質(zhì)的生長(zhǎng)。CXCL8是一個(gè)多種細(xì)胞來(lái)源的趨化因子，可趨化中性粒細(xì)胞，對(duì)炎癥反應(yīng)進(jìn)行調(diào)節(jié)，影響骨與關(guān)節(jié)退行性疾病的發(fā)生發(fā)展，同時(shí)又參與調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化等。TNF為腫瘤壞死因子，分為T(mén)NF-α，TNF-β 2種，TNF-α是一種由激活的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的能抑制成骨細(xì)胞和刺激破骨細(xì)胞的細(xì)胞因子，研究表明，目前大量TNF-α阻斷劑具有減輕炎癥反應(yīng)并改善手術(shù)預(yù)后的作用，能夠使椎間盤(pán)退變的進(jìn)程減慢[12]。因此，在炎癥反應(yīng)中，TNF和CXCL8可能與頸椎間盤(pán)退行性病變的發(fā)生發(fā)展緊密相關(guān)，可以減緩由于椎間盤(pán)的突出導(dǎo)致的局部炎癥反應(yīng)進(jìn)程。VEGFA為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A，是VEGF家族的一員[13]，VEGFA和VEGFB主要促進(jìn)新血管的形成，在血管生成、腫瘤生長(zhǎng)以及缺血性疾病中起著重要作用[14]，可修復(fù)已損傷的椎動(dòng)脈，恢復(fù)腦供血，減輕CV的臨床表現(xiàn)。

從GO功能富集分析和KEGG通路富集分析結(jié)果來(lái)看，定眩湯的作用主要是影響骨平衡、調(diào)節(jié)骨代謝、促進(jìn)血管的修復(fù)、調(diào)控炎癥的進(jìn)程。KEGG富集結(jié)果顯著的通路是MAPK信號(hào)通路、PI3K-Akt信號(hào)通路、松弛素信號(hào)通路、趨化因子信號(hào)通路、FoxO信號(hào)通路、VEGFA信號(hào)通路等，MAPK信號(hào)通路調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化，對(duì)機(jī)體的骨代謝平衡的維持起著重要作用[15]。PI3K能夠激活A(yù)kt，增加Ras同源基因家族中A的表達(dá)量，起到改變細(xì)胞骨架的作用[16]。松弛素有保護(hù)心血管的作用，可以降低外周循環(huán)的血管壓力，有研究表明動(dòng)脈的機(jī)械特性和心輸出量可通過(guò)長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)用松弛素進(jìn)行改善[17]。有研究表明FOXOs可提高細(xì)胞的抗氧化能力，減緩與年齡密切相關(guān)疾病的發(fā)展，如癌癥、心血管疾病、骨質(zhì)疏松等[18-20]。在炎癥反應(yīng)組織可找到廣泛的趨化因子，趨化因子可以驅(qū)使炎癥細(xì)胞向炎癥組織靠近，并參與免疫應(yīng)答，有研究表明，在骨性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中趨化因子起了重要作用[21-23]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）被認(rèn)為是血管生成的中樞調(diào)節(jié)劑[24]，其本質(zhì)是肝素結(jié)合性雙價(jià)蛋白，是一種與血管生長(zhǎng)相關(guān)的特異性生長(zhǎng)因子，正常生理?xiàng)l件下由中性粒細(xì)胞及血小板分泌，在缺氧的環(huán)境中則由角質(zhì)形成細(xì)胞和上皮細(xì)胞產(chǎn)生[25]，VEGF在維持和恢復(fù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的完整性中發(fā)揮重要作用，同時(shí)也可增加側(cè)支循環(huán)的血量，起到保護(hù)腦供血作用。

綜上所述，中藥復(fù)方定眩湯治療CV的可能機(jī)制有：1）調(diào)控頸椎的骨代謝，恢復(fù)成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞的平衡，減輕頸椎骨質(zhì)的退變;2）在頸椎間盤(pán)退變的過(guò)程中，常伴有炎癥反應(yīng)，定眩湯能夠控制炎癥的發(fā)展，減輕局部炎癥介質(zhì)的不良刺激，從而減輕椎動(dòng)脈的痙攣和交感神經(jīng)的興奮，改善眩暈的癥狀;3）同時(shí)定眩湯能夠增加心輸出量，減小周圍血管的阻力，增加側(cè)支循環(huán)的血量，使椎基底動(dòng)脈的供血量增大，眩暈的程度減輕;4）定眩湯能夠促進(jìn)血管新生，使由于受到頸椎異常結(jié)構(gòu)的不良影響而受損椎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞得到修復(fù)，恢復(fù)局部的正常供血，增加大腦后循環(huán)的血量。通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)中所涉及的現(xiàn)代網(wǎng)絡(luò)技術(shù)手段可以分析藥物與疾病靶點(diǎn)的相互網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，從而可以推測(cè)定眩湯治療CV的作用機(jī)制，為后續(xù)的進(jìn)一步的研究指明了方向，使實(shí)驗(yàn)研究更加明確、更加具有目的性，同時(shí)篩選出了關(guān)鍵的作用靶點(diǎn)及信號(hào)通路，為今后進(jìn)一步從分子生物學(xué)角度進(jìn)行驗(yàn)證奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1]王蔚琳.頸性眩暈的中西醫(yī)病因分析及治療現(xiàn)狀研究[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2018，13（35）：189-191.

[2]劉文英，于廣瑩，金鴻賓.頸性眩暈的診治國(guó)內(nèi)進(jìn)展[J].中國(guó)矯形外科雜志，2014，22（1）：55-58.

[3]王曉東，朱立國(guó)，于杰.椎動(dòng)脈型頸椎病眩暈癥狀的臨床研究概述[J].中國(guó)中醫(yī)骨傷科雜志，2016，24（3）：80-82.

[4]潘明柱，張潔瑛，榮兵，等.半夏白術(shù)天麻湯加減結(jié)合穴位手法推拿治療頸性眩暈的臨床研究[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2019，25（9）：1285-1288.

[5]雷鳴，王美元.半夏白術(shù)天麻湯加減內(nèi)服配合中藥熏蒸治療頸性眩暈56例[J].實(shí)用中醫(yī)藥雜志，2017，33（12）：1375-1377.

[6]覃智斌，梁冬波，王繼，等.推拿配合半夏白術(shù)天麻湯治療頸性眩暈的臨床體會(huì)[J].中國(guó)中醫(yī)骨傷科雜志，2015，23（11）：45-47.

[7]李泮霖，蘇薇薇.網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)在中藥研究中的最新應(yīng)用進(jìn)展[J].中草藥，2016，47（16）：2938-2942.

[8]孫凱，朱立國(guó)，魏戌，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的“淫羊藿-白芍”配伍治療腰椎間盤(pán)突出癥作用機(jī)制研究[J].中國(guó)中藥雜志，2020，45（3）：609-616.

[9]李龍，張學(xué)，陽(yáng)晨.彩色多普勒超聲對(duì)椎動(dòng)脈型頸椎病眩暈的診斷價(jià)值[J].中華全科醫(yī)學(xué)，2013，11（12）：1959-1960.

[10]朱云峰.半夏白術(shù)天麻湯聯(lián)合頸椎推拿治療痰濁中阻型頸性眩暈[J].中醫(yī)藥臨床雜志，2019，31（10）：1917-1919.

[11]宋潔，曹銳，王列，等.針刺艾灸推拿治療頸性眩暈研究進(jìn)展[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2021，42（2）：93-96.

[12]Johnson ZI，Schoepflin ZR，Choi H，et al.Disc in flames：Roles of TNF-α and IL-1β in intervertebral disc degeneration[J].Eur Cell Mater，2015，30：104-16;discussion 116-117.

[13]Holmes DI，Zachary I.The vascular endothelial growth factor（VEGF）family：angiogenic factors in health and disease[J].Genome Biol，2005，6（2）：209.

[14]Shibuya M.Vascular Endothelial Growth Factor（VEGF）and Its Receptor（VEGFR）Signaling in Angiogenesis：A Crucial Target for Anti-and Pro-Angiogenic Therapies[J].Genes Cancer，2011，2（12）：1097-1105.

[15]Knowles HJ，Cleton-Jansen AM，Korsching E，et al.Hypoxia-inducible factor regulates osteoclast-mediated bone resorption：role of angiopoietin-like 4[J].FASEB J，2010，24（12）：4648-59.

[16]McCubrey JA，Steelman LS，Chappell WH，et al.Ras/Raf/MEK/ERK and PI3K/PTEN/Akt/mTOR cascade inhibitors：how mutations can result in therapy resistance and how to overcome resistance[J].Oncotarget，2012，3（10）：1068-111.

[17]Conrad KP，Debrah DO，Novak J，et al.Relaxin modifies systemic arterial resistance and compliance in conscious，nonpregnant rats[J].Endocrinology，2004，145（7）：3289-3296.

[18]Hou L，Chen J，Zheng Y，et al.Critical role of miR-155/FoxO1/ROS axis in the regulation of non-small cell lung carcinomas[J].Tumour Biol，2016，37（4）：5185-5192.

[19]吳志方，羅輝，羅毅文.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移的信號(hào)通路的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2016，22（22）：4377-4380.

[20]Hou YQ，Yao Y，Bao YL，et al.Juglanthraquinone C Induces Intracellular ROS Increase and Apoptosis by Activating the Akt/Foxo Signal Pathway in HCC Cells[J].Oxid Med Cell Longev，2016，2016：4941623.

[21]Lisignoli G，Toneguzzi S，Pozzi C，et al.Chemokine expression by subchondral bone marrow stromal cells isolated from osteoarthritis（OA）and rheumatoid arthritis（RA）patients[J].Clin Exp Immunol，1999，116（2）：371-378.

[22]Endres M，Andreas K，Kalwitz G，et al.Chemokine profile of synovial fluid from normal，osteoarthritis and rheumatoid arthritis patients：CCL25，CXCL10 and XCL1 recruit human subchondral mesenchymal progenitor cells[J].Osteoarthritis Cartilage，2010，18（11）：1458-1666.

[23]Borzì RM，Mazzetti I，Cattini L，et al.Human chondrocytes express functional chemokine receptors and release matrix-degrading enzymes in response to C-X-C and C-C chemokines[J].Arthritis Rheum，2000，43（8）：1734-1741.

[24]劉瑞玉，巫遠(yuǎn)忠，范火亮，等.再生障礙性貧血患者血清sVCAM-1、IL-18和VEGF水平及其臨床意義[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2009，17（1）：117-120.

[25]王艷.糖尿病足慢性潰瘍研究新進(jìn)展[J].中國(guó)農(nóng)村衛(wèi)生，2020，12（14）：16.

（2020-05-18收稿 責(zé)任編輯：楊覺(jué)雄）