張愛(ài)玉 鄧旭山 陳濤 王際平

摘 要：為了檢測(cè)皮革中的富馬酸二甲酯，采用頂空固相微萃取（HS-SPME）氣相色譜質(zhì)譜法（GC-MS），考察了萃取纖維涂層、平衡溫度、平衡時(shí)間、萃取時(shí)間、解吸溫度和時(shí)間對(duì)萃取效率的影響，確定最優(yōu)的頂空條件，并評(píng)估該方法的性能。結(jié)果表明：最優(yōu)的頂空條件為100 μm PDMS萃取纖維涂層，平衡溫度80 ℃，平衡時(shí)間15 min，萃取時(shí)間4 min，解吸溫度260 ℃，解吸時(shí)間1 min。該方法在0.05～10 mg/kg范圍內(nèi)觀察到良好的線性，相關(guān)系數(shù)（R2）高于0.998，檢出限為0.023 mg/L，方法加標(biāo)回收率范圍為99.48%～102.67%。該方法可以滿足皮革及其制品中的富馬酸二甲酯日常檢測(cè)需要。

關(guān)鍵詞：頂空;固相微萃取;氣相色譜質(zhì)譜法;皮革;富馬酸二甲酯

中圖分類號(hào)：TS101.9;O657 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1009-265X（2021）04-0086-05

Abstract： In order to detect dimethyl fumarate in leathers， headspace solid-phase microextraction （HS-SPME）-gas chromatography-mass spectrometry （GC-MS） was utilized. The effects of extraction fiber coating， equilibrium temperature， equilibrium time， extraction time， desorption temperature and time on the extraction efficiency were studied， the optimal headspace conditions were determined， and the performance of the method was evaluated. The optimum conditions were obtained as below： the fiber coating extraction at 100 μm PDMS， equilibrium temperature 80 °C， equilibrium time 15 min， extraction time 4 min， desorption temperature 260 °C and desorption time 1 min. This method showed a good linearity in the range of 0.05-10 mg/kg with a correlation coefficient （R2） of above 0.998. The limit of detection was 0.023 mg/L. The recycling rate of this method was in the range of 99.48%—106.27%. It can meet the daily analysis of dimethyl fumarate in leathers and its products.

Key words： headspace; solid-phase microextraction; gas chromatography-mass spectrometry; leathers; dimethyl fumarate

富馬酸二甲酯（DMF）是一種白色晶體，已發(fā)現(xiàn)它可作為霉菌生長(zhǎng)抑制劑和強(qiáng)效殺菌劑[1]，主要用于防止皮革、紡織品、鞋類、家具、食品、水果和其他產(chǎn)品在溫暖潮濕的氣候下儲(chǔ)存或運(yùn)輸過(guò)程中因霉菌而變質(zhì)。皮革中的DMF主要添加在防霉劑和干燥劑中，用于皮革產(chǎn)品的防腐防霉，防霉劑和干燥劑中DMF以分子狀態(tài)進(jìn)入微生物的細(xì)胞膜，抑制微生物細(xì)胞分裂和呼吸，抑制微生物的生長(zhǎng)繁殖。當(dāng)少量DMF接觸到皮膚后，會(huì)造成皮膚發(fā)癢、發(fā)紅和濕疹等，大量接觸易引發(fā)急性呼吸困難，DMF進(jìn)入人體腸道和內(nèi)臟器官后，也會(huì)造成腐蝕性損害[2]。動(dòng)物試驗(yàn)及體外試驗(yàn)表明，DMF沒(méi)有致癌、生殖毒性和神經(jīng)毒性[3]。2009年歐盟成員國(guó)明確規(guī)定DMF的含量在消費(fèi)品及其部件中不得超過(guò)0.1 mg/kg，也規(guī)定了若產(chǎn)品已聲明含有DMF，將會(huì)禁止進(jìn)入歐洲市場(chǎng)流通和銷售[4]。

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，DMF的檢測(cè)主要采用氣相色譜（GC）、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）和高效液相色譜（HPLC）[5]等。到目前為止，已經(jīng)報(bào)道的皮革或其產(chǎn)品中DMF的測(cè)定，大多數(shù)是基于微波輔助萃取、超聲萃取和加速溶劑萃取，乙酸乙酯、乙腈、丙酮和甲醇是最常用于該方法的有機(jī)溶劑[6-10]。但實(shí)際生產(chǎn)中需要加入一些染料和助劑，增加了目標(biāo)物從樣品基質(zhì)中的凈化分離的難度，后續(xù)的萃取過(guò)程會(huì)消耗大量的有機(jī)溶劑，導(dǎo)致DMF的回收率下降，儀器的檢測(cè)靈敏度降低[11]。

因此，本研究使用頂空固相微萃取氣相色譜質(zhì)譜法（HS-SPME-GC-MS）檢測(cè)皮革中DMF。該方法不需要消耗過(guò)多的有機(jī)溶劑，在HS-SPME模式下，進(jìn)樣、萃取、濃縮、解吸和分析在一個(gè)程序中完成，結(jié)果準(zhǔn)確，可以滿足皮革中DMF的檢測(cè)要求。從檢出限（LOD）、加標(biāo)回收率和精密度等方面也驗(yàn)證了該方法的可靠性。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

實(shí)驗(yàn)儀器：Agilent 7890-5977氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)安捷倫有限公司）：MPS全自動(dòng)樣品處理平臺(tái)、聚四氟乙烯墊和20 mL頂空進(jìn)樣瓶（德國(guó)Gerstel有限公司）：萃取纖維：65 μm PDMS/DVB、100 μm PDMS、85 μmCarboxen/PDMS、50/30 μm DVB/CAR/PDMS（美國(guó)Supelco公司）;ML104電子分析天平（稱量范圍120 g，精度0.1 mg，梅特勒托利多儀器上海有限公司）。

實(shí)驗(yàn)試劑：富馬酸二甲酯標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.0%，上海阿拉丁生化科技股份有限公司），乙酸乙酯（色譜級(jí)，純度99.7%，上海麥克林生化科技有限公司）。

1.2 氣相色譜質(zhì)譜條件

色譜柱：Agilent HP-5MS氣相毛細(xì)管柱（膜厚度0.50 μm，內(nèi)徑30 m×0.25 mm）;升溫程序：50 ℃初始溫度下保持1 min，以10 ℃/min的速率升溫至150 ℃（保持3 min），最后以20 ℃/min升溫至250 ℃;載氣：高純氦（純度≥99.999%），恒定流量為1.0 mL/min;進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣。

離子源溫度為230 ℃;四極桿溫度設(shè)定在150 ℃;色譜質(zhì)譜接口溫度為280 ℃;溶劑延遲4.0 min;電離方式：電子轟擊（EI）模式，電離電壓為70 eV;質(zhì)量掃描范圍50～300 amu;在SIM離子模式下定性、定量，定性離子（m/z）分別為59、85、113，定量離子（m/z）為113。

1.3 樣品前處理過(guò)程

選擇代表性的皮革樣品裁剪（0.5 cm×0.5 cm）并混合均勻，稱取0.3 g（精確至0.001 g）的皮革樣品轉(zhuǎn)移到20 mL頂空瓶中，用聚四氟乙烯墊密封，在MPS全自動(dòng)樣品處理平臺(tái)中50 ℃下平衡5 min，在振蕩條件下將所用的萃取纖維插入頂空瓶中進(jìn)行萃取1 min，再將萃取纖維移入GC進(jìn)樣口中解吸，在230 ℃下解吸0.5 min，萃取物經(jīng)色譜柱分離，進(jìn)行氣相色譜質(zhì)譜分析。所有萃取纖維均在第一次使用之前按照生產(chǎn)商的建議進(jìn)行了預(yù)處理。

2 結(jié)果與討論

2.1 HS-SPME萃取條件的選擇

2.1.1 萃取纖維

HS-SPME是目標(biāo)物在萃取纖維與待測(cè)樣品之間的動(dòng)態(tài)平衡過(guò)程，萃取纖維與目標(biāo)物的吸附量呈正相關(guān)，與平衡時(shí)間呈負(fù)相關(guān)。根據(jù)“相似相容”原理，選擇與目標(biāo)物極性相似的萃取纖維對(duì)提高方法精確度很重要[12]。樣品前處理過(guò)程參照1.3，實(shí)驗(yàn)選擇65 μm聚二甲基硅烷二乙烯苯（PDMS/DVB）、100 μm聚二甲基硅烷（PDMS）、85 μm的Carboxen聚二甲基硅烷（Carboxen/PDMS）和50/30 μm二乙烯苯Carboxen聚二甲基硅烷（DVB/CAR/PDMS）4種不同的萃取纖維，其他萃取條件參照1.3樣品前處理過(guò)程，通過(guò)峰面積比較纖維對(duì)皮革中DMF的萃取能力。由圖1可知，100 μm PDMS萃取纖維對(duì)萃取DMF具有更高的吸附性能，因此選擇100 μm PDMS作為萃取纖維進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.1.2 平衡溫度

平衡溫度是HS-SPME過(guò)程中的一個(gè)關(guān)鍵參數(shù)，溫度的升高可以加快目標(biāo)物在各相之間的擴(kuò)散速度。平衡溫度會(huì)影響Khs/os和Kf/hs的分配系數(shù)，一般情況下，會(huì)提高Khs/os、降低Kf/hs。

Khs/os=Chs/Cos（1）

Kf/hs=Cf/Chs（2）

式中：Khs/os和Kf/hs分別是原始樣品/頂空系統(tǒng)和頂空/纖維系統(tǒng)中分析物的分配系數(shù)，Chs、Cos和Cf分別是原始樣品、頂空和萃取纖維中目標(biāo)物的濃度[13-14]。

選擇100 μm PDMS作為萃取纖維，根據(jù)1.2的氣相色譜質(zhì)譜條件和1.3樣品前處理過(guò)程，圖2探究了平衡溫度（50～90 ℃）對(duì)萃取DMF的影響。由圖2可知，隨著平衡溫度從50 ℃增加到90 ℃，頂空瓶中DMF蒸氣壓增加，導(dǎo)致頂部空間中DMF的濃度增高，對(duì)DMF的萃取效率一直增加。但溫度高于90 ℃時(shí)，頂空瓶的瓶蓋容易破損，頂空瓶氣密性變差?？紤]到頂空瓶的安全問(wèn)題和后續(xù)頂空瓶的循環(huán)使用，因此選擇80 ℃作為后續(xù)試驗(yàn)的溫度。

2.1.3 平衡時(shí)間

目標(biāo)物從樣品中揮發(fā)到頂空空間中，需要相應(yīng)的時(shí)間才能達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡過(guò)程，平衡時(shí)間與目標(biāo)物的揮發(fā)特性有關(guān)，平衡時(shí)間越長(zhǎng)，萃取纖維涂層對(duì)目標(biāo)物的吸附量增多;但平衡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，目標(biāo)物可能會(huì)重新溶于待測(cè)樣品中，萃取纖維涂層中的目標(biāo)物可能會(huì)被基質(zhì)中其他分配系數(shù)大的物質(zhì)解吸下來(lái)[15]，反而會(huì)降低對(duì)目標(biāo)物萃取效率。選擇100 μm PDMS作為萃取纖維，平衡溫度為80 ℃，其他萃取條件參照1.3樣品前處理過(guò)程，對(duì)于實(shí)驗(yàn)測(cè)定皮革中的DMF，考察了平衡時(shí)間（5～45 min）對(duì)萃取效率的影響。圖3的結(jié)果表明，隨著平衡時(shí)間從5 min增加到15 min，DMF峰面積增加，直到達(dá)到平穩(wěn)狀態(tài)。當(dāng)平衡時(shí)間15 min時(shí)，DMF的萃取效果可以滿足實(shí)驗(yàn)需要。因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)中選擇15 min為平衡時(shí)間。

2.1.4 萃取時(shí)間

萃取時(shí)間是HS-SPME系統(tǒng)中的一個(gè)重要參數(shù)，萃取時(shí)間受樣品溫度、性質(zhì)、目標(biāo)物的分配系數(shù)和攪拌方式影響。HS-SPME系統(tǒng)是目標(biāo)物、樣品頂空體積和萃取纖維涂層之間的三相平衡，萃取纖維涂層對(duì)目標(biāo)物的傳質(zhì)是一個(gè)隨時(shí)間變化的平衡過(guò)程，在平衡條件下可以獲得最大的吸附量。但通常要花很長(zhǎng)時(shí)間才能達(dá)到平衡，且多是在非平衡條件下完成的。根據(jù)非平衡體系理論，在萃取時(shí)間相同情況下，萃取量與樣品中目標(biāo)物的濃度成正比;因此在實(shí)際測(cè)試中并不需要達(dá)到真正的熱力學(xué)平衡狀態(tài)，只要萃取時(shí)間內(nèi)目標(biāo)物的萃取效率能滿足靈敏度需求即可[16]。選擇100 μm PDMS作為萃取纖維，平衡溫度為80 ℃，平衡時(shí)間為15 min，其他萃取條件參照1.3樣品前處理過(guò)程，圖4考察了萃取時(shí)間（1～5 min）對(duì)DMF萃取效率的影響，為了節(jié)約時(shí)間又達(dá)到最大的萃取率，在下一步的實(shí)驗(yàn)中選擇了4 min。

2.1.5 解吸條件

解吸溫度和時(shí)間是影響HS-SPME的另一個(gè)重要因素。萃取纖維涂層上的目標(biāo)物未充分解吸，會(huì)影響下次實(shí)驗(yàn)結(jié)果。氣相色譜進(jìn)樣口的解吸溫度必須足夠高，才能充分解吸所有的目標(biāo)物，但解吸溫度過(guò)高，會(huì)損壞萃取纖維的壽命，造成目標(biāo)物之間的交叉污染。選擇100 μm PDMS作為萃取纖維，平衡溫度為80 ℃，平衡時(shí)間為15 min，萃取時(shí)間為4 min，其他萃取條件參照1.3樣品前處理過(guò)程，圖5為解吸時(shí)間在0.5 min到2 min對(duì)萃取DMF的影響，DMF的峰面積隨時(shí)間的增加解吸量略有增加，1 min對(duì)DMF的解吸是足夠的。圖6為解吸溫度在230 ℃到270 ℃對(duì)萃取DMF的影響，DMF的峰面積隨著解吸溫度從230 ℃到260 ℃升高而增加，但隨解吸溫度的進(jìn)一步升高增加緩慢?？芍?60 ℃足以完全解吸DMF，色譜圖沒(méi)有產(chǎn)生來(lái)自萃取纖維涂層的干擾峰，萃取溫度低于生產(chǎn)商推薦的使用最高溫度。而且，后續(xù)可以使用相同的萃取纖維進(jìn)行DMF分析也不會(huì)影響萃取效率。在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中，將解吸時(shí)間定為1 min，解吸溫度為260 ℃。

2.2 DMF的氣相色譜質(zhì)譜確證

驗(yàn)證DMF標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的氣相色譜質(zhì)譜條件，采用HP5MS色譜柱，DMF的總離子流圖如圖7所示，DMF的保留時(shí)間為7.606 min。對(duì)DMF的色譜峰分析，圖8為DMF的質(zhì)譜圖，特征離子m/z=59，85，113。

2.3 線性范圍和檢出限

用乙酸乙酯將DMF標(biāo)準(zhǔn)品溶于棕色容量瓶中，逐級(jí)稀釋配置成0.05、0.1、0.5、1、10 mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。選取上述頂空條件進(jìn)行測(cè)試，橫坐標(biāo)為DMF的質(zhì)量濃度，以峰面積為縱坐標(biāo)，建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=13 134.794x-15 443.878，相關(guān)系數(shù)為0.998。結(jié)果表明，DMF在0.05～10 mg/kg的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性良好，儀器檢出限為0.023 mg/L。

2.4 方法的回收率和精密度

按上述頂空條件，在陰性皮革樣品中添加3種不同質(zhì)量濃度（0.5、5、50 mg/L）的DMF標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別在3種質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液下各進(jìn)行6次測(cè)定，計(jì)算出對(duì)應(yīng)的加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果見(jiàn)表1。通過(guò)測(cè)試結(jié)果可知，陰性皮革樣品中DMF的平均加標(biāo)回收率為99.48%～102.67%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.54%～5.03%。

2.5 實(shí)際樣品分析

為了測(cè)試已建立的HS-SPME氣相色譜質(zhì)譜法對(duì)實(shí)際樣品中DMF的檢測(cè)，根據(jù)1.2氣相色譜質(zhì)譜條件和2.1選擇的HS-SPME萃取條件，實(shí)驗(yàn)選擇了市場(chǎng)購(gòu)買的服裝革、箱用革、家具革、鞋底革四類皮革。一共8個(gè)樣品，有兩類皮革樣品測(cè)試為陽(yáng)性，分別為家具革和箱用革，樣品中DMF的含量分別為0.31 mg/kg和0.12 mg/kg，均高于歐盟指令的檢測(cè)最低限0.1 mg/kg。

3 結(jié) 論

以100 μm PDMS為萃取纖維采用頂空固相微萃?。℉S-SPME）氣相色譜質(zhì)譜法測(cè)定皮革中的DMF，優(yōu)化了樣品的萃取條件，并對(duì)該方法的精確性進(jìn)行了研究。試驗(yàn)表明：皮革樣品中DMF的平均加標(biāo)回收率為99.48%～102.67%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.54%～5.03%。本方法集進(jìn)樣、萃取、濃縮、分析于一體，從皮革樣品中分析DMF操作簡(jiǎn)單，不需要任何有毒有機(jī)溶劑，縮短了樣品的制樣時(shí)間，易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。

參考文獻(xiàn)：

[1] TSUYOSHI K， KAZUO I， ATSUKO MATSUOKA， et al. Determination of dimethyl fumarate and other fumaricand maleic acid diesters in desiccants and consumerproducts in Japan[J].Journal of Health Science，2011，57（3）：236-244.

[2] 蔣小良，黃鈞，陳凱.紡織品中富馬酸二甲酯檢測(cè)分析方法的研究進(jìn)展[J].日用化學(xué)品科學(xué)，2013，36（7）：27-30.

[3] TREUMER F， ZHU K， GLASER R. Dimethylfumarate is a potent inducer of apoptosis in human T cells[J].Journal of Investigative Dermatology，2003，121（6）：1383-1388.

[4] 章獻(xiàn)忠.解讀歐盟指令：禁止含富馬酸二甲酯的產(chǎn)品投放市場(chǎng)[J].西部皮革，2009，31（12）：5-7.

[5] 周佳，丁友超，曹錫忠.高效液相色譜法測(cè)定紡織品中的富馬酸二甲酯[J].色譜，2012，29（6）：50-52.

[6] LU Y， ZHU Y. Combination of accelerated solvent extraction and vortex-assisted liquid-liquid microextraction for the determination of dimethyl fumarate in textiles and leathers by gas chromatography-mass spectrometry[J].Talanta，2014，119：430-434.

[7] 葉銀鵬，葉偉平，林佳.皮革及合成革制品有毒有害物質(zhì)檢測(cè)[J].西部皮革，2015，37（22）：30-33.

[8] 孫朝旭.氣相色譜質(zhì)譜法測(cè)定皮革產(chǎn)品中的富馬酸二甲酯[J].山東化工，2014，43（12）：77-78.

[9] 郎秀婷.快速測(cè)定皮革制品染色涂層中的富馬酸二甲酯[J].印染，2018，44（15）：47-49.

[10] 唐玉紅，孫辰逸.鞋類產(chǎn)品中富馬酸二甲酯檢測(cè)研究現(xiàn)狀[J].西部皮革，2019，41（5）：57-59.

[11] 趙洋，王元鳳，戚曉霞.氣相色譜質(zhì)譜法選擇離子存儲(chǔ)檢測(cè)模式測(cè)定皮革和紡織品中富馬酸二甲酯[J].理化檢驗(yàn)（化學(xué)分冊(cè)），2010，46（10）：1170-1175.

[12] 孫婷婷.頂空固相微萃取氣相色譜法測(cè)定尿中甲基異丁基酮的方法研究[D].武漢：武漢科技大學(xué)，2019：40-47.

[13] ESKANDARPOUR N， SERESHTI H， NAJARZADEKAN H， et al. Polyurethane/polystyrene-silica electrospunnan of ibrous composite for the headspace solid-phase microextraction of chlorophenols coupled with gas chromatography[J].Journal of Separation Science，2016，39（23）：4637-4644.

[14] LIU M， LIU J， GUO C， et al. A solid phase microextraction Arrow with zirconium metal-organic framework/molybdenum disulfide coating coupled with gas chromatography-mass spectrometer for the determination of polycyclic aromatic hydrocarbons in fish samples[J].Journal of Chromatography A，2019，1592：9-18.

[15] MOKBEL H， DINE EJA， ELMOLL A， et al. Simultaneous analysis of organochlorine pesticides and polychlorinated biphenyls in air samples by using accelerated solvent extraction（ASE） and solid-phase micro-extraction（SPME） coupled to gas chromatography dual electron capture detection[J].Environ SciPollut Res Int，2016，23（8）：8053-8063.

[16] ZAHRA R， FATEMEH K， NADEREH R， et al. Dispersive solid phase extraction headspace sampling in gas chromatography mass spectrometric analysis of volatiles： application to separation of polycyclic aromatic hydrocarbons[J].Journal of The Brazilian Chemical Society，2019，30（4）：764-771.