萬(wàn)紅霞 周 宇

四川省成都市雙流區(qū)第一人民醫(yī)院/四川大學(xué)華西空港醫(yī)院(610200)

子癇前期(PE)是妊娠高血壓疾病中比較嚴(yán)重的一類(lèi)，除典型高血壓癥狀外還伴蛋白尿，若不積極干預(yù)隨妊娠孕周增加高血壓及腎臟損傷逐步加重，后續(xù)可影響其他臟器功能并直接威脅母兒生命安全[1-2]。目前對(duì)PE臨床高危因素的討論較多，認(rèn)為合并孕前高血壓、肥胖、PE家族史等孕婦發(fā)生PE的風(fēng)險(xiǎn)較高[3-4]，但在臨床研究中發(fā)現(xiàn)PE高危孕婦發(fā)病情況仍存在較大差異，推測(cè)除上述臨床因素外還存在某些重要影響因素。微小RNA(miRNAs)與PE的出現(xiàn)密切相關(guān)。不少研究[5]指出miRNAs可能成為PE的新型診斷及靶向干預(yù)分子。毛雪寶[6]研究指出敲低miR-101表達(dá)可促進(jìn)胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡，可能是控制PE發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵分子之一。目前關(guān)于miR-101在高危孕婦PE發(fā)病預(yù)測(cè)研究極少，本文以此為切入點(diǎn)展開(kāi)討論，旨在為PE的預(yù)測(cè)及早期干預(yù)尋找指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年1月-2020年1月本院產(chǎn)前檢查有PE危險(xiǎn)因素的孕婦198例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①初次產(chǎn)檢時(shí)孕周<24周；②單胎；③合并≥1項(xiàng)子癇前期高危因素，如既往PE病史，子癇前期家族史，孕前或首次產(chǎn)檢體質(zhì)指數(shù)(BMI)≥35kg/m2，首次產(chǎn)檢時(shí)舒張壓≥80mmHg，孕前慢性高血壓、糖尿病、腎臟疾病等病史，抗磷脂抗體陽(yáng)性，年齡>40歲，距前次妊娠間隔時(shí)間≥10年；④采集血液樣本為妊娠中期(孕14～19+6周)；⑤入組時(shí)尚未確診子癇前期；⑥在本院規(guī)律接受產(chǎn)前檢查，孕婦本人簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并妊娠期糖尿病、妊娠期心臟病等其他妊娠合并癥；②合并嚴(yán)重認(rèn)知異常、精神疾患等無(wú)法配合產(chǎn)檢；③多胎妊娠；④合并胎膜早破、前置胎盤(pán)等危險(xiǎn)妊娠情況。參照PE診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，根據(jù)入組孕婦是否發(fā)展為PE分為PE組和非PE組。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 外周血miR-101檢測(cè)

留取孕婦孕中期產(chǎn)前檢查時(shí)空腹外周靜脈血標(biāo)本提取總RNA，將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，反應(yīng)條件：37℃ 60min、95℃ 5min，cDNA溶液保存于-20℃。取10μl cDNA溶液加入100μl ddH2O。將U6作為miRNA定量?jī)?nèi)參。U6上游引物5’-GAATCGAACGCTGATGCCA-3’，下游引物5’-ATCGAGCCGTAGAGGCTA-3’；miR-101上游引物5’-CGATGAAGCTGAGCGTAGA-3’，下游引物5’-TGCGAAGCTGAAGCGTGAG-3’。熒光定量PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性1min→90℃變性5s→60℃復(fù)性30s→72℃延伸60s，共計(jì)40個(gè)循環(huán)。2﹣△△Ct法計(jì)算miR-101的相對(duì)表達(dá)倍數(shù)。

1.3 臨床資料收集

收集所有孕婦臨床資料，包括年齡、分娩情況、采血周數(shù)、首次產(chǎn)檢血壓(收縮壓、舒張壓)、首次產(chǎn)前檢查時(shí)BMI、孕前基礎(chǔ)疾病(慢性高血壓、2型糖尿病、腎臟病變)、子癇前期/子癇病史、自然流產(chǎn)史。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)計(jì)算使用軟件SPSS 18.0。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。miR-101對(duì)子癇前期發(fā)病的預(yù)測(cè)價(jià)值使用受試者工作特征(ROC)曲線(xiàn)，發(fā)病危險(xiǎn)因素分析采用logistics回歸模型。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1外周血miR-101表達(dá)

PE組37例，孕中期外周血miR-101(0.65±0.19)高于非PE孕婦孕中期外周血miR-101(0.56±0.13)(P<0.05)。

2.2 孕中期外周血miR-101預(yù)測(cè)高危孕婦PE發(fā)生價(jià)值

ROC曲線(xiàn)顯示，孕中期外周血miR-101表達(dá)水平預(yù)測(cè)高危孕婦發(fā)生PE的最佳截?cái)嘀禐?.605，AUC為0.841(95%CI 0.768～0.914)，靈敏度70.2%、特異度75.7%。

2.3 高危孕婦發(fā)生PE的單因素分析

PE組與非PE組孕婦的年齡、采血周數(shù)、孕期2型糖尿病及腎臟病變、子癇前期/子癇病史、自然流產(chǎn)史等無(wú)差異(P>0.05)；分娩史、首次產(chǎn)前檢查血壓及BMI、孕前慢性高血壓、孕中期miR-101水平等存在差異(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 高危孕婦發(fā)生PE單因素分析

2.4 高危孕婦發(fā)生子癇前期多因素分析

將高危孕婦發(fā)生PE情況作為因變量(0=非子癇前期，1=子癇前期)，將單因素分析中具有差異的指標(biāo)(分娩情況、首次產(chǎn)檢血壓、首次產(chǎn)檢BMI、孕前慢性高血壓、孕中期miR-101水平)納入logistics回歸模型。分析發(fā)現(xiàn)，初產(chǎn)婦、首次產(chǎn)檢收縮壓及舒張壓較高、首次產(chǎn)檢BMI較高，合并孕前慢性高血壓、孕中期外周血miR-101水平>0.605分別是高危孕婦發(fā)生PE的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 高危孕婦發(fā)生PE多因素分析

3 討論

miR-101已被發(fā)現(xiàn)在多種惡性腫瘤中呈異常表達(dá)，如在膀胱癌[8]、乳腺癌[9]中均發(fā)現(xiàn)其存在異常低表達(dá)，靶向上調(diào)其表達(dá)后可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖侵襲等。而miR-101在PE患者胎盤(pán)組織中存在高表達(dá)，鄒艷芬等[10]指出miR-101可能通過(guò)調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白44調(diào)節(jié)子癇前期內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡；毛雪寶等[6]認(rèn)為miR-101可能通過(guò)負(fù)性調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶-1參與子癇前期的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。鑒于miR-101異常表達(dá)對(duì)子癇前期發(fā)生發(fā)展的影響，推測(cè)其可能在子癇前期發(fā)病早期預(yù)測(cè)方面也存在一定價(jià)值，但相關(guān)研究目前開(kāi)展極少。

PE臨床高危因素對(duì)孕婦后續(xù)發(fā)病的預(yù)測(cè)價(jià)值仍存在較多爭(zhēng)議。本文PE孕婦孕中期外周血miR-101表達(dá)水平高于非PE孕婦，與既往基礎(chǔ)研究結(jié)論基本吻合，推測(cè)該時(shí)期外周血miR-101表達(dá)水平對(duì)PE的發(fā)生有預(yù)警價(jià)值。進(jìn)一步經(jīng)ROC曲線(xiàn)分析發(fā)現(xiàn)，孕中期外周血miR-101表達(dá)水平預(yù)測(cè)高危孕婦發(fā)生PE的靈敏度、特異度(70.2%、75.7%)較理想，提示血miR-101水平有一定預(yù)測(cè)價(jià)值，可能為臨床工作者疾病風(fēng)險(xiǎn)分層、治療方案制定等提供更多信息。

為進(jìn)一步明確孕中期外周血miR-101表達(dá)水平對(duì)PE發(fā)病的影響，將包括該指標(biāo)在內(nèi)的其他臨床資料納入logistics回歸模型。發(fā)現(xiàn)孕中期外周血miR-101水平>0.605、初產(chǎn)婦、首次產(chǎn)檢收縮壓及舒張壓較高、首次產(chǎn)檢BMI較高，合并孕前慢性高血壓分別是高危孕婦發(fā)生PE的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。該結(jié)論說(shuō)明孕中期外周血miR-101異常高表達(dá)可能促進(jìn)了高危孕婦PE發(fā)病。林靜等[11]研究指出高齡初產(chǎn)婦發(fā)生胎膜早破、子癇前期/子癇、妊娠期糖尿病等不良妊娠結(jié)局的風(fēng)險(xiǎn)高于高齡經(jīng)產(chǎn)婦。首次產(chǎn)前檢查血壓及BMI較高，合并孕前慢性高血壓已在既往較多研究中被認(rèn)為是子癇前期發(fā)生的高危因素[12-14]。

綜上所述，PE高危孕婦孕中期外周血miR-101表達(dá)水平異常增高是PE發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，有早期PE發(fā)病預(yù)警價(jià)值。提示對(duì)臨床PE發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、治療方案制定等有一定指導(dǎo)意義。