韋曉芳 沈水寶 吳克寧 李修宇 袁汝喜 雷麗莉 張淑芳 章岳軍

(廣西大學動物科學技術(shù)學院，南寧 530004)

在我國雞的飼養(yǎng)方式主要分為平養(yǎng)和籠養(yǎng)2種。平養(yǎng)雞舍的飼養(yǎng)密度小，建筑面積大，投資相對較高，目前在我國一般肉雞才使用這種飼養(yǎng)方式。平養(yǎng)又可分為厚墊料地面平養(yǎng)、網(wǎng)上平養(yǎng)和混合地面飼養(yǎng)。其中厚墊料地面平養(yǎng)為直接在土地面或水泥地面上鋪設(shè)厚墊料，雞只生活在墊料上面，對設(shè)備要求簡單、投資少；但是飼養(yǎng)密度小，雞只接觸糞便，不利于疾病防治?；\養(yǎng)就是將雞飼養(yǎng)在用金屬絲焊成的籠子中,根據(jù)雞種、性別和日齡設(shè)計不同型號的雞籠。籠養(yǎng)主要優(yōu)點：提高飼養(yǎng)密度、節(jié)省飼料、有利于雞群防疫。其缺點為：設(shè)備投資相對大、長期籠養(yǎng)可能會導致雞缺乏運動、受光照不均。已有相關(guān)報道表明，不同的養(yǎng)殖方式對雞的生產(chǎn)性能和胃腸道發(fā)育產(chǎn)生不同的影響[1-10]。丁酸梭菌為厭氧型革蘭氏陽性菌，在自然環(huán)境及動物體內(nèi)均有分布，可產(chǎn)生丁酸、乳酸和乙酸等。近年來，丁酸梭菌作為益生菌已經(jīng)廣泛應用于肉雞生產(chǎn)中，具有提高肉質(zhì)、日增重以及降低料重比等作用，除此之外還起到改善腸道形態(tài)、促進腸道有益菌的增殖、抑制病原菌的繁殖、提升腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力[11-17]。目前針對不同養(yǎng)殖階段于不同養(yǎng)殖方式下，在飼糧中添加丁酸梭菌對廣西黃雞腸道形態(tài)發(fā)育以及腸道菌群變化的影響鮮有研究。因此，本試驗針對在不同的養(yǎng)殖階段于不同養(yǎng)殖方式下，在飼糧中添加丁酸梭菌，觀察其對廣西黃雞在生長性能上造成的差異以及對腸道形態(tài)、盲腸微生物區(qū)系的影響，以期為今后飼糧中添加益生菌及選擇最佳養(yǎng)殖模式以實現(xiàn)生產(chǎn)效益最大化提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

丁酸梭菌來源于湖北某微生物技術(shù)有限公司，添加量均為廠家指導劑量，即500 g/t，并于飼糧制粒過程中加入，成品料的活菌測量由北京科為博生物科技有限公司檢測，丁酸梭菌活菌數(shù)≥1×109CFU/g，制粒后活菌數(shù)≥2.88×105CFU/g，以上數(shù)據(jù)為實測值。

1.2 基礎(chǔ)飼糧

基礎(chǔ)飼糧依據(jù)NRC(1994)的營養(yǎng)需要配制，其組成及營養(yǎng)水平根據(jù)廣西黃雞的品種特性、飼養(yǎng)管理和營養(yǎng)需求進行調(diào)整。飼糧生產(chǎn)在廣西玉林新天地飼料有限公司進行，每批次生產(chǎn)約夠10 d的飼喂量，每批次生產(chǎn)過程中前后各舍棄10包，以防加工過程中混合不均或帶有其他批次雜質(zhì)。每批次飼糧生產(chǎn)過程中隨機多次抽樣，檢測營養(yǎng)成分和飼糧活菌數(shù)。營養(yǎng)水平在廣西玉林新天地飼料有限公司化驗室檢測?；A(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎(chǔ))

1.3 試驗動物與試驗設(shè)計

試驗選取35日齡健康狀態(tài)良好的廣西黃雞3 300羽，隨機分為2組，每組5個重復，每個重復330羽。2個組分別為對照組(基礎(chǔ)飼糧)和試驗組(基礎(chǔ)飼糧+500 g/t丁酸梭菌)，分2個階段進行飼養(yǎng)試驗：第1階段35～49日齡，籠養(yǎng)方式；第2階段50～80日齡，轉(zhuǎn)換為地面散養(yǎng)方式。

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗于2019年11月至2020年1月在廣西壯族自治區(qū)玉林市容縣黎村溫泉肉雞養(yǎng)殖基地進行。

籠養(yǎng)：籠底面積0.48 m2。飼養(yǎng)密度在試驗1～20 d為85只/m2，試驗21～35 d為51只/m2，試驗36～50 d為40只/m2，全自動水線，暖氣，24 h燈光(試驗1～20 d)，后期燈光時間逐漸減少。雞舍每棟左、右均為4層排列，每層12個雞籠。雞舍內(nèi)共有8個排氣扇，前后各4個。雞舍均安裝溫濕度報警器，可以24 h監(jiān)測環(huán)境。

散養(yǎng)：散養(yǎng)雞是跑山雞，無法計算散養(yǎng)密度。散養(yǎng)墊料為木屑，1個輪轉(zhuǎn)周期(30 d)更換1次(50 d后的雞是放在半山腰上活動，80 d后會輪轉(zhuǎn)至山頂區(qū)域直至出欄)，雞只養(yǎng)殖密度會隨著日齡增長而增長。雞棚全自動水線連接，1個雞棚有8個出口，每個出口活動區(qū)域內(nèi)有5個以上的飲水點，雞棚內(nèi)外均安裝投料設(shè)施。

試驗過程中全程人工喂料，并根據(jù)黃雞品種特性以及遵循養(yǎng)殖場的飼養(yǎng)管理。采取限量飼喂(通過限飼梯度飼養(yǎng)試驗得出最佳限飼量：35～49日齡平均日采食限飼量為52 g/d，50～80日齡平均日采食限飼量為62 g/d)，自動飲水但進行適量控制，防止欄舍濕度過高。第1階段單日投料量為1次，時間為08:00，舍內(nèi)溫度從28 ℃逐漸降到26 ℃，濕度控制在60%～65%；第2階段單日投料量為2次，時間為08:00與15:00，籠養(yǎng)欄溫度控制在20～25 ℃，相對濕度在60%～70%。

1.5 指標測定與方法

1.5.1 飼糧營養(yǎng)含量測定

參照GB/T 6432—1994方法測定飼糧中粗蛋白質(zhì)含量；參照GB/T 6434—1994方法測定飼糧中粗脂肪含量；參照GB/T 6434—2006方法測定飼糧中粗纖維含量；參照GB/T 6434—1992方法測定飼糧中粗灰分含量；參照GB/T 6434—1994方法測定飼糧中氨基酸含量；參照GB/T 6434—1992方法測定飼糧中水溶性氯化物含量；參照GB/T 6434—2002方法測定飼糧中鈣含量；參照GB/T 6434—2002方法測定飼糧中總磷含量。

1.5.2 生長性能測定

由于黃雞前期飼養(yǎng)采取限量飼喂，每次投喂2 h內(nèi)投料量均會被完全采食，因此本試驗采食量的計算以投料量計算。

平均日采食量(ADFI)=總投料量/試驗天數(shù)；
平均日增重(ADG)=(末體重-
初體重)/試驗天數(shù)；
料重比(F/G)=試驗期內(nèi)總采食量/
試驗期內(nèi)總增重。

1.5.3 腸道形態(tài)測定

本試驗有3個采樣時間點，分別為試驗開始前(35日齡)、轉(zhuǎn)散養(yǎng)欄時(49日齡)、試驗結(jié)束時(80日齡)。采樣前空腹12 h，每個重復選取1羽體況健康并接近均重的雞只頸部放血處死。在未經(jīng)擠壓的狀況下取每個腸段同一位置的十二指腸、空腸、回腸各1 cm左右，用生理鹽水輕輕沖洗后放入甲醛溶液中常溫保存，固定24 h以上后，取出固定瓶中腸道組織，常規(guī)石蠟切片制作，顯微鏡鏡檢，圖像在專業(yè)成像系統(tǒng)測量40倍視野下，測量隱窩深度、絨毛高度，計算絨毛高度/隱窩深度。

1.5.4 盲腸食糜16S rRNA測序

試驗結(jié)束前，禁食12 h，每個重復選取1羽，進行屠宰，收集盲腸食糜，放入無菌的2 mL離心管中，液氮速凍，送樣至生工生物工程(上海)股份有限公司委托測序，獲得有效數(shù)據(jù)，并對數(shù)據(jù)進行分析。

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析

生長性能、腸道形態(tài)數(shù)據(jù)收集后使用WPS軟件匯總，用SPSS 22.0軟件進行t檢驗分析，數(shù)據(jù)均以平均值±標準誤表示，以P<0.05作為差異顯著的判定標準。

2 結(jié) 果

2.1 不同養(yǎng)殖方式下飼糧中添加丁酸梭菌對廣西黃雞生長性能的影響

由表2、表3可知，35～49日齡廣西黃雞在籠養(yǎng)方式下，試驗組的初體重、末體重、平均日增重、料重比與對照組相比均無顯著差異(P>0.05)，但料重比有低于對照組、平均日增重有高于對照組的趨勢(P>0.05)；49日齡試驗組平均日增重比對照組高10.12%，料重比比對照組低9.40%。50～80日齡廣西黃雞在散養(yǎng)方式下，飼糧中添加丁酸梭菌對廣西黃雞生長性能造成的差異同樣不顯著(P>0.05)，但呈提高的趨勢；80日齡試驗組末體重比對照組高1.91%，平均日增重比對照組高5.04%，料重比比對照組低5.06%。

表2 籠養(yǎng)方式下飼糧中添加丁酸梭菌對35～49日齡廣西黃雞生長性能的影響

表3 散養(yǎng)模式下飼糧中添加丁酸梭菌對50～80日齡廣西黃雞生長性能的影響

2.2 不同養(yǎng)殖方式下飼糧添加丁酸梭菌對廣西黃雞腸道形態(tài)的影響

2.2.1 籠養(yǎng)方式下飼糧添加丁酸梭菌對廣西黃雞腸道形態(tài)的影響

由表4可知，49日齡時，與對照組相比，試驗組十二指腸、空腸、回腸的絨毛高度顯著提高(P<0.05)，分別提高24.21%、27.71%、28.54%；同時，試驗組空腸、回腸絨毛高度/隱窩深度分別比對照組提高22.76%、45.14%(P<0.05)，十二指腸的絨毛高度/隱窩深度有升高趨勢。

表4 籠養(yǎng)方式下飼糧添加丁酸梭菌對35～49日齡廣西黃雞腸道形態(tài)的影響

續(xù)表4項目 Items日齡 Days of age試驗組 Test group對照組 Control group空腸 356.04±0.096.04±0.09Jejunum496.31±0.55a5.14±0.18a回腸 355.08±0.115.08±0.11Ileum492.99±0.18a2.06±0.13b

2.2.2 散養(yǎng)方式下飼糧中添加丁酸梭菌對廣西黃雞腸道形態(tài)的影響

由表5可知，散養(yǎng)方式下，80日齡時試驗組十二指腸絨毛高度、絨毛高度/隱窩深度分別比對照組提高45.38%、37.40%(P<0.05)；空腸絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度分別比對照組提高22.49%、34.16%(P<0.05)；回腸絨毛高度/隱窩深度比對照組提高45.14%(P<0.05)。

表5 散養(yǎng)方式下飼糧中添加丁酸梭菌對50～80日齡廣西黃雞腸道形態(tài)的影響

2.3 不同養(yǎng)殖方式下飼糧中添加丁酸梭菌對廣西黃雞盲腸食糜中微生物區(qū)系的影響

對廣西黃雞盲腸微生物區(qū)系在門水平上的分布(圖1、圖2)進行分析發(fā)現(xiàn)，在門水平上的優(yōu)勢菌門為厚壁菌門(Firmicutes)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、變形菌門(Proteobacteria)。厚壁菌門在早期(35日齡)占據(jù)絕對的優(yōu)勢，比例在80%以上；49日齡籠養(yǎng)時試驗組的厚壁菌門相對豐度顯著高于對照組(P<0.05)；隨著厚壁菌門相對豐度的降低，擬桿菌門所占比例對應增高，49日齡時對照組的擬桿菌門相對豐度顯著高于試驗組(P<0.05)。對比49日齡籠養(yǎng)，80日齡散養(yǎng)時試驗組的厚壁菌門相對豐度下降，但還是高于對照組(P>0.05)；2組的變形菌門和放線菌門(Actinobacteria)相對豐度均為上升趨勢(P>0.05)。

M35為35日齡籠養(yǎng)試驗組，M49LA為49日齡籠養(yǎng)試驗組，M80SA為80日齡散養(yǎng)試驗組。圖3同。The M35 was the 35-day-old caged-raising test group, the M49LA was the 49-day-old caged-raising test group, and the M80SA was the 80-day-old free-raising test group. The same as Fig.3。

M35為35日齡籠養(yǎng)對照組，M49LC為49日齡籠養(yǎng)對照組，M80SC為80日齡散養(yǎng)對照組。圖4同。

對35～80日齡廣西黃雞盲腸微生物區(qū)系在屬水平上的分布(圖3、圖4)進行分析發(fā)現(xiàn)，在屬水平上的優(yōu)勢菌屬主要以擬桿菌屬(Bacteroides)、乳酸桿菌屬(Lactobacillus)、另枝菌屬(Alistipes)、梭菌屬(Clostridium)和瘤胃球菌屬(Ruminococcus)為主。除未分類(Unclassified)外，試驗組的擬桿菌屬相對豐度隨日齡增長而提高，逐漸變成第1優(yōu)勢菌屬；試驗組另枝菌屬相對豐度在49日齡時顯著低于對照組(P<0.05)，而后呈現(xiàn)為下降趨勢；對照組則整體表現(xiàn)為先上升后下降趨勢。49日齡時試驗組梭菌屬相對豐度顯著高于對照組(P<0.05)，散養(yǎng)至80日齡時發(fā)現(xiàn)擬桿菌屬依舊是第1優(yōu)勢菌屬。綜上所述，與對照組相比，35～49日齡籠養(yǎng)方式下飼糧中添加丁酸梭菌顯著降低了腸道內(nèi)擬桿菌屬和另枝菌屬相對豐度(P<0.05)，顯著提高梭菌屬相對豐度(P<0.05)；與籠養(yǎng)方式對比，散養(yǎng)至80日齡瘤胃球菌屬相對豐度呈升高趨勢，試驗組顯著高于對照組(P<0.05)。

Unclassified：未分類；Bacteroides：擬桿菌屬；Lactobacillus：乳酸桿菌屬；Alistipes：另枝菌屬；Clostridium Ⅳ：梭菌屬Ⅳ；Ruminococcus 2：瘤胃球菌屬2；Faecalibacterium：糞桿菌屬；Subdoligranulum：罕見小球菌屬；Pseudoflavonifractor：假黃桿菌屬；Butyricicoccus：丁酸球菌屬；Sporobacter：孢桿菌屬；Clostridium ⅩⅣa：梭菌屬ⅩⅣa；Flavonifractor：黃桿菌屬；Acetanaerobacterium：厭氧醋菌屬；Intestinimonas：腸菌素屬；Clostridium ⅩⅧ：梭菌屬ⅩⅧ；Blautia：布勞特氏菌屬；Clostridium ⅩⅣb：梭菌屬ⅩⅣb；Oscillibacter：顫桿菌屬；Lachnospiracea_incertae_sedis：毛螺菌；Barnesiella：巴恩斯氏菌；Ruminococcus：瘤胃球菌屬；Prevotella：普氏菌屬；Coprococcus：糞球菌屬；Coprobacter：糞球菌屬。圖4同。The same as Fig.4.

圖4 對照組35～80日齡廣西黃雞盲腸微生物區(qū)系在屬水平上的分布

3 討 論

3.1 不同養(yǎng)殖方式飼糧中添加丁酸梭菌對廣西黃雞生長性能的影響

有關(guān)使用丁酸梭菌提高廣西黃雞生長性能的報道較多。在肉雞養(yǎng)殖中，部分試驗表明丁酸梭菌可以提高雞的生長性能[14]，杜云平等[12]分別在肉雞和種雞的飲水中添加1.5×109CFU/mL的丁酸梭菌，發(fā)現(xiàn)肉雞平均日增重提高4.62%，料重比下降了9.26%，并且可以很好地預防仔雞腸炎。在麻羽肉雞中添加0.2%丁酸梭菌,平均日增重提高8.34%，料重比降低6.49%[11]。但是也有研究發(fā)現(xiàn)，添加丁酸梭菌后對肉雞的平均日增重、料重比無顯著影響[15]，這與本研究結(jié)果相似，即在不同養(yǎng)殖方式下飼糧中添加丁酸梭菌對不同日齡廣西黃雞的生長性能未產(chǎn)生顯著變化。這可能是與本試驗全程限飼有關(guān)，黃雞采食量不足，導致生長性能差異不顯著，但均有提高平均日增重以及降低料重比的趨勢。

3.2 不同養(yǎng)殖方式飼糧中添加丁酸梭菌對廣西黃雞腸道形態(tài)的影響

腸道是動物消化和吸收營養(yǎng)物質(zhì)的重要場所，飼糧停留在腸道的時間和腸道的營養(yǎng)吸收對于飼糧消化率尤為重要。常用絨毛高度、隱窩深度、絨毛高度/隱窩深度評估腸道對營養(yǎng)的吸收能力。飼糧中添加丁酸梭菌會影響黃雞對飼糧中養(yǎng)分的利用率，農(nóng)斯偉等[18]發(fā)現(xiàn)飼糧中添加丁酸梭菌能顯著提高雞各腸段的絨毛高度和絨毛高度/隱窩深度；徐晨希等[19]研究發(fā)現(xiàn)，丁酸梭菌顯著降低了肉雞十二指腸的隱窩深度，提高了絨毛高度/隱窩深度及絨毛高度；丁酸梭菌可以通過分泌代謝產(chǎn)物來增強腸道抗氧化酶活性，降低腸道上皮細胞可能引起的腸道損傷；同時能夠明顯修復因抗生素引起的腸道黏膜完整性損壞、絨毛破壞、上皮細胞腫脹脫落等癥狀[20-21]；本研究中，籠養(yǎng)方式下飼糧中添加丁酸梭菌可以提高35～49日齡廣西黃雞十二指腸、空腸、回腸的絨毛高度，降低隱窩深度，提高絨毛高度/隱窩深度。49日齡籠養(yǎng)時對比，80日齡散養(yǎng)時廣西黃雞的十二指腸、空腸、回腸腸絨毛高度均呈提高趨勢。從不同時期不同養(yǎng)殖模式來對比，籠養(yǎng)加散養(yǎng)的養(yǎng)殖式下，飼糧中添加丁酸梭菌可以促進黃雞腸道形態(tài)更好的發(fā)育。

3.3 不同養(yǎng)殖方式下飼糧中添加丁酸梭菌對廣西黃雞盲腸微生物區(qū)系的影響

本研究發(fā)現(xiàn)，不同養(yǎng)殖方式下飼糧中添加丁酸梭菌可以提高腸道內(nèi)梭菌屬、瘤胃球菌屬的相對豐度，籠養(yǎng)轉(zhuǎn)散養(yǎng)后會促進瘤胃球菌屬相對豐度的提升。這可能是因為籠養(yǎng)初期飼喂丁酸梭菌飼糧，有部分丁酸梭菌定植在腸道內(nèi)，促進了同類菌群的繁殖，而散養(yǎng)后雞會因采食某些粗纖維含量高的食物(可能是墊料或者是山上植物等)，導致腸道降解粗纖維的瘤胃球菌屬菌群提高[22]。籠養(yǎng)轉(zhuǎn)散養(yǎng)至80日齡，各組變形菌門和放線菌門相對豐度均為上升趨勢。這說明散養(yǎng)的環(huán)境可能更適合有益菌的繁殖。這與鄭青[23]研究結(jié)果相似，可能是散養(yǎng)后復雜的飼養(yǎng)環(huán)境影響腸道菌群的適應性，提高腸道菌群的相對豐度。因此，不同養(yǎng)殖方式下飼糧中添加丁酸梭菌均可提高盲腸菌群的相對豐度，且籠養(yǎng)轉(zhuǎn)散養(yǎng)后，菌群的相對豐度可以得到進一步的提升。

4 結(jié) 論

① 籠養(yǎng)加散養(yǎng)的養(yǎng)殖方式下，飼糧中添加丁酸梭菌對不同日齡廣西黃雞的生長性能未產(chǎn)生顯著變化，但有提高平均日增重以及降低料重比的趨勢。

② 不同日齡按照籠養(yǎng)加散養(yǎng)的養(yǎng)殖方式，飼糧中添加丁酸梭菌可以促進黃雞腸道形態(tài)更好的發(fā)育。

③ 籠養(yǎng)加散養(yǎng)的養(yǎng)殖方式下，飼糧中添加丁酸梭菌均可提高盲腸主要菌群的相對豐度，且籠養(yǎng)轉(zhuǎn)散養(yǎng)后，盲腸菌群的相對豐度可以得到進一步的提高。