鄒君彪，和玉丹，馬改彥，劉雅晶，姜平

(1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京 210095；2.江西興鼎科技有限公司，江西 南昌 330115； 3.江西生物科技職業(yè)學(xué)院，江西 南昌 330200)

抗生素作為動(dòng)物生產(chǎn)中的生長(zhǎng)促進(jìn)劑已在世界各地廣泛應(yīng)用，在促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)、提高飼料報(bào)酬、改善胴體品質(zhì)、降低發(fā)病率和死亡率等多方面發(fā)揮了重要作用[1]。阿維拉霉素作為寡糖類抗生素，具有安全性高、無(wú)殘留并且對(duì)環(huán)境無(wú)污染的優(yōu)點(diǎn)，分別于1987年(豬用)和1990年(雞用)被歐盟批準(zhǔn)列入通用使用標(biāo)準(zhǔn)。我國(guó)于2005年批準(zhǔn)可以在豬、雞飼料中使用阿維拉霉素預(yù)混劑。阿維拉霉素常作為肉雞的生長(zhǎng)促進(jìn)劑，在歐盟、東歐、南非等多個(gè)國(guó)家和地區(qū)廣泛銷售和使用[2]，可以提高肉雞的存活率和飼料效率[3]，降低對(duì)疾病的易感性。目前，阿維拉霉素主要由美國(guó)禮來(lái)公司生產(chǎn)，價(jià)格昂貴。我國(guó)阿維拉霉素生產(chǎn)存在菌種產(chǎn)量低和生產(chǎn)成本高等局限。本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)阿維拉霉素生產(chǎn)菌發(fā)酵工藝優(yōu)化，研制了實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品，大大提高了阿維拉霉素的發(fā)酵產(chǎn)量，降低了發(fā)酵生產(chǎn)成本，在最佳培養(yǎng)條件下，阿維拉霉素產(chǎn)量達(dá)5 000～6 000 μg/mL，遠(yuǎn)高于前人研究，更適合工業(yè)化生產(chǎn)。為了進(jìn)一步明確其功效，本試驗(yàn)采用1日齡羅斯(Ross)肉雞，通過(guò)在肉雞日糧中添加不同劑量的自制阿維拉霉素，觀察其對(duì)肉雞生長(zhǎng)發(fā)育和免疫功能的影響，為阿維拉霉素應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與材料

羅斯(Ross)308商品代肉雞購(gòu)自江蘇八達(dá)畜禽有限公司。阿維拉霉素預(yù)混劑(10%)，為江西興鼎科技有限公司實(shí)驗(yàn)室通過(guò)發(fā)酵工藝優(yōu)化的自制制品。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取1日齡羅斯肉雞480羽，平均體重約為46.2 g，隨機(jī)分為4組，每組12個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10羽。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)日糧中添加5 mg/kg(T1組)、10 mg/kg(T2組)和20 mg/kg(T3組)阿維拉霉素，試驗(yàn)期42 d，分為試驗(yàn)前期(1～21日齡)和試驗(yàn)后期(22～42日齡)?；A(chǔ)日糧的配制滿足NRC(1994)肉雞營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)雞采用分層籠養(yǎng)模式，自由采食和飲水。雞舍1～3 d溫度為35 ℃，隨后每天降低1 ℃，直至降至25 ℃。舍內(nèi)1～3 d給予24 h光照，4～42 d為23 h光照。試驗(yàn)雞按照肉雞常規(guī)免疫程序進(jìn)行，分別在1、7和21日齡接種新城疫和傳染性支氣管炎疫苗。濕度、通風(fēng)等其他飼養(yǎng)管理措施，按規(guī)?；_斯308肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

1.3 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.3.1 生長(zhǎng)性能

分別于1、21和42日齡，以重復(fù)為單位，稱量所有試驗(yàn)雞空腹重，記錄每天的采食量，計(jì)算試驗(yàn)前期(1～21日齡)、試驗(yàn)后期(22～42日齡)和試驗(yàn)全期(1～42日齡)不同處理組雞只的平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.3.2 免疫器官指數(shù)

于21和42日齡時(shí)，每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取1羽，共48羽，稱重后宰殺，解剖剝離雞只的脾臟、胸腺和法氏囊，剔除周圍結(jié)締組織和脂肪組織后，精確稱量各免疫器官重量，計(jì)算各免疫器官指數(shù)。

1.3.3 血清免疫球蛋白

于21和42日齡時(shí)，每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取1羽，共48羽，對(duì)雞進(jìn)行翅下靜脈采血，收集的全血37 ℃靜置30 min后，3 500 r/min離心15 min，收集血清。采用ELISA試劑盒測(cè)定血清中的IgG和IgM含量。試劑盒購(gòu)自上海藍(lán)基生物有限公司。

1.3.4 血清溶菌酶活性的測(cè)定

采用溶菌酶檢測(cè)試劑盒(比濁法)測(cè)定肉雞血清中的溶菌酶活性。試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所試劑盒。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用SAS 9.3軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA)和線性分析，組間數(shù)值差異顯著時(shí)進(jìn)行Duncan多重比較，結(jié)果使用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。P<0.05表示差異顯著，P>0.05表示差異不顯著。

2 結(jié)果

2.1 阿維拉霉素對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

不同處理組肉雞在試驗(yàn)期生產(chǎn)性能測(cè)定結(jié)果見表1。

表1 阿維拉霉素對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能和成活率的影響

由表1可知，在試驗(yàn)前期(1～21日齡)，與對(duì)照組相比，飼糧中添加阿維拉霉素顯著降低了肉雞的料重比(P<0.05)，一定程度上提高了肉雞的成活率，但試驗(yàn)組肉雞的日增重和采食量較對(duì)照組均顯著下降(P<0.05)。與飼糧中添加5 mg/kg的試驗(yàn)組T1相比，添加了10 mg/kg的試驗(yàn)組顯著提高了肉雞平均日增重和日采食量(P<0.05)。試驗(yàn)全期(1～42日齡)，與對(duì)照組相比，飼糧中添加阿維拉霉素可以提高肉雞的成活率，但未達(dá)到顯著差異(P>0.05)。試驗(yàn)組T2與對(duì)照組在日增重和日采量上無(wú)顯著差異(P>0.05)，但T2組肉雞的飼料轉(zhuǎn)化率和成活率均高于對(duì)照組(P>0.05)。由此表明，飼糧中添加10 mg/kg的阿維拉霉素能夠在一定程度上提高肉雞的成活率和飼料轉(zhuǎn)化效率。

2.2 阿維拉霉素對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響

由表2可以看出，與對(duì)照組相比，飼糧中添加不同劑量的阿維拉霉素，可不同程度提高肉雞的胸腺、脾臟和法氏囊指數(shù)。與對(duì)照組相比，T2組肉雞在21日齡時(shí)顯著提高了胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)(P<0.05)，在42日齡時(shí)顯著提高了胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)(P<0.05)。42日齡時(shí)，T3組肉雞相比對(duì)照組顯著提高了胸腺指數(shù)(P<0.05)。結(jié)果表明，日糧中添加5 mg/kg、10 mg/kg和20 mg/kg阿維拉霉素，均能不同程度提高肉雞的免疫器官指數(shù)，其中，添加劑量為10 mg/kg的T2組影響程度最顯著。

表2 阿維拉霉素對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響

2.3 阿維拉霉素對(duì)肉雞血清IgG、IgM水平的影響

由表3可以看出，21日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，T2組顯著提高了血清IgG水平(P<0.05)。42日齡時(shí)，試驗(yàn)組T1、T2和T3的IgG水平較對(duì)照組分別顯著提高了22.48%、38.07%和23.39%(P<0.05)。與對(duì)照組相比，飼糧中添加阿維拉霉素提高了肉雞血清IgM水平，但未構(gòu)成顯著差異(P>0.05)。結(jié)果表明日糧中添加阿維拉霉素能提高肉雞血清IgG、IgM水平。

表3 阿維拉霉素對(duì)肉雞血抗體IgG、IgM水平的影響 mg/mL

2.4 阿維拉霉素對(duì)肉雞血清溶菌酶活性的影響

由表4 可知，21日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，添加阿維拉霉素的T2組和T3組肉雞血清溶菌酶活性分別顯著提高了35.20%和19.03%(P<0.05)。42日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，飼糧中添加阿維拉霉素顯著提高了肉雞血清溶菌酶活性(P<0.05)。結(jié)果表明，飼糧中添加10 mg/kg阿維拉霉素的肉雞血清溶菌酶活性最高。

表4 阿維拉霉素對(duì)肉雞血清溶菌酶活性的影響 μg/mL

3 討論

飼糧中添加阿維拉霉素可抑制病原菌生長(zhǎng)，提高肉雞的生長(zhǎng)率和飼料轉(zhuǎn)化率[3-5]。阿維拉霉素提高肉雞生產(chǎn)性能的機(jī)制，主要通過(guò)減少體內(nèi)能量代謝物質(zhì)的消耗，降低腸道毒副代謝產(chǎn)物的生成，提高肉雞后腸揮發(fā)性脂肪酸的產(chǎn)生與吸收[6-7]。梁先明等[8]通過(guò)對(duì)愛拔益加(AA)肉雞接種產(chǎn)氣莢膜梭菌建立感染模型，發(fā)現(xiàn)在飼料中添加阿維拉霉素可降低肉雞的死亡率，而且還可以有效預(yù)防和控制產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的肉雞壞死性腸炎。Saleh等[9]研究表明，飼喂阿維拉霉素(100 g/t，Maxus G200)可提高肉雞對(duì)干物質(zhì)、粗蛋白和粗纖維的消化率，并顯著上調(diào)肉雞骨骼肌中生長(zhǎng)激素促分泌素受體(GHSR)、胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)和胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體(IGF1R)的基因表達(dá)。Chowdhury等[10]研究報(bào)道，10 mg/kg阿維拉霉素可顯著提高肉雞的增重和飼料轉(zhuǎn)化效率，但對(duì)采食量的影響差異不顯著。Wellenreiter等[6]研究表明，日糧中添加10 mg/kg阿維拉霉素可顯著提高45 d肉雞的平均末重，但對(duì)肉雞料重比的改善差異不顯著。與Wealleans等[11]研究一致，伍喜林[12]研究表明，日糧中添加阿維拉霉素對(duì)肉雞采食量無(wú)明顯影響，但能降低料重比，并在一定程度上提高雛雞成活率。本研究也取得類似結(jié)果，但添加阿維拉霉素組肉雞的日增重均顯著低于對(duì)照組，這可能與阿維拉霉素組肉雞采食較少有關(guān)。

機(jī)體免疫功能的強(qiáng)弱與免疫器官的大小、重量有著直接的關(guān)系，通常采用免疫器官指數(shù)來(lái)衡量肉雞機(jī)體免疫機(jī)能的強(qiáng)弱[13]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，日糧中添加阿維拉霉素對(duì)21和42日齡肉雞的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)均有不同程度提高，表明阿維拉霉素的添加可促進(jìn)肉雞免疫器官發(fā)育，提高肉雞機(jī)體的免疫力和抗病力。IgG、IgM是介導(dǎo)體液免疫的主要效應(yīng)分子，在血液中的水平高低是反應(yīng)機(jī)體免疫狀況的重要指標(biāo)，可用來(lái)評(píng)價(jià)畜禽抵御病原和微生物感染的能力[14]。Mountzouris等[15]在科寶肉雞上的研究表明，2.5 mg/kg阿維拉霉素的添加對(duì)肉雞血漿抗體(IgG、IgA、IgM以及總Ig水平)水平無(wú)顯著影響。劉明超等[16]報(bào)道，肉雞日糧中添加阿維拉霉素會(huì)提高肉雞血液IgG含量，但與對(duì)照組相比差異不顯著。本試驗(yàn)研究顯示，21日齡和42日齡阿維拉霉素添加組肉雞血清IgG和IgM水平均高于對(duì)照組，其中10 mg/kg阿維拉霉素組21日齡肉雞血清IgG含量較對(duì)照組提高達(dá)顯著水平。42日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，添加阿維拉霉素組肉雞顯著提高了血清IgM含量，這可能與添加的阿維拉霉素劑量和肉雞品種不同有關(guān)。

血清溶菌酶，又稱胞壁酶，是正常機(jī)體免疫防御機(jī)制的組成成分，血清溶菌酶含量高低可反映動(dòng)物機(jī)體對(duì)外源物(如寄生蟲、細(xì)菌和病毒)的抵抗能力[17]。溶菌酶通過(guò)水解細(xì)菌細(xì)胞壁，使細(xì)菌細(xì)胞壁破裂、內(nèi)容物流出而死亡，從而起到抗菌的作用[18]。此外，溶菌酶還能與帶負(fù)電荷的病毒蛋白質(zhì)結(jié)合，形成復(fù)鹽，從而導(dǎo)致病毒失活，起到抗病毒作用[19]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加5～20 mg/kg阿維拉霉素均能提高肉雞血清溶菌酶活性，在42日齡時(shí)，阿維拉霉素添加組與對(duì)照組相比顯著提高了肉雞血清溶菌酶活性，表明日糧中添加阿維拉霉素對(duì)肉雞血清溶菌酶活性有提高作用，其中以10 mg/kg劑量組效果最佳。

4 結(jié)論

試驗(yàn)研究結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)優(yōu)化發(fā)酵工藝研制的阿維拉霉素，能夠在一定程度上降低肉雞的死亡率和料重比，提高血清的免疫球蛋白G水平和溶菌酶活性，且以10 mg/kg添加劑量效果為佳，為經(jīng)優(yōu)化生產(chǎn)菌發(fā)酵工藝研制的阿維拉霉素奠定了良好的應(yīng)用基礎(chǔ)，但尚需與商品化的阿維拉霉素產(chǎn)品功效作進(jìn)一步比較研究。