王勇 張志勇 張炯怡 宋曉寧 張金娟

摘 ? 要：本研究通過檢測(cè)白及清肺養(yǎng)胃口服液的急性毒性，為進(jìn)一步研究及安全使用該產(chǎn)品提供了試驗(yàn)依據(jù)。采用一次性給予小鼠灌胃未稀釋的白及清肺養(yǎng)胃口服液浸膏樣品，記錄14天內(nèi)小鼠出現(xiàn)的死亡及反應(yīng)情況，根據(jù)結(jié)果測(cè)定白及清肺養(yǎng)胃口服液對(duì)小鼠經(jīng)口給藥的半數(shù)致死量（Median lethal dose，LD50）或最大耐受量（Maximal tolerance dose，MTD），亦或最大給藥量（Maximal feasible dose，MFD）。結(jié)果顯示，對(duì)小鼠以最大給藥容積與最大濃度一次性灌胃白及清肺養(yǎng)胃口服液后，14天內(nèi)受試小鼠均未出現(xiàn)死亡及其他異常，是以只能測(cè)定其最大給藥量為200g/kg。故得出結(jié)論，以最大劑量給小鼠灌胃白及清肺養(yǎng)胃口服液浸膏后，所有小鼠均未出現(xiàn)死亡及其他異常，提示該受試樣品無毒性，且白及清肺養(yǎng)胃口服液對(duì)小鼠經(jīng)口給藥的最大給藥量為200g/kg。

關(guān)鍵詞：白及清肺養(yǎng)胃口服液 ?急性毒性 ?小鼠 ?經(jīng)口給藥

隨著人口老齡化進(jìn)程的加快，我國(guó)已進(jìn)入慢性病的高負(fù)擔(dān)期。由于慢性病具有患病人數(shù)多、醫(yī)療成本高、患病時(shí)間長(zhǎng)、服務(wù)需求大等特點(diǎn)，故疾病負(fù)擔(dān)是群眾因病致貧、返貧的重要原因，若不及時(shí)控制將帶來嚴(yán)重的社會(huì)經(jīng)濟(jì)問題，如慢性阻塞性肺疾?。–OPD）、慢性胃炎等均屬于高發(fā)的慢性疾病。白及清肺養(yǎng)胃口服液是為改善肺部及胃腸道疾病而研發(fā)的一款純天然保健食品，本研究對(duì)該口服液的急性毒性進(jìn)行了研究，旨在為該產(chǎn)品的進(jìn)一步研究及臨床安全使用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 受試樣品

白及清肺養(yǎng)胃口服液未稀釋浸膏（淺棕色膏狀物），按生藥量計(jì)該浸膏的濃度為500g/L，由貴州醫(yī)科大學(xué)李永軍老師課題組提供，批號(hào)：20201019。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

昆明種（KM種）小鼠，清潔級(jí)，體重18～22g，雌雄數(shù)量各半，購(gòu)于長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（湘）2014-0011。小鼠分籠飼養(yǎng)，每籠5只，由專人管理。動(dòng)物室光照充足，通風(fēng)和空調(diào)設(shè)備良好，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫度為18～25℃，相對(duì)濕度為50%～70%，實(shí)驗(yàn)室按常規(guī)方式定期消毒。小鼠在該環(huán)境飼養(yǎng)3天后，用于實(shí)驗(yàn)。給藥前禁食（不禁水）12h，給藥后自由進(jìn)食、飲水。

1.3 儀器

精密電子稱，AB104-S型，METTLER TOLEDO公司。

2 方法

2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn)

正式試驗(yàn)前先進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)——將尚未稀釋的白及清肺養(yǎng)胃口服液浸膏抽入注射器后正好通過12號(hào)灌胃針頭，故此為浸膏的原濃度能夠?qū)崿F(xiàn)給藥的最大濃度。預(yù)實(shí)驗(yàn)采用這一未稀釋的白及清肺養(yǎng)胃口服液浸膏進(jìn)行給藥，該濃度按生藥量計(jì)為500g/L。

取KM種小鼠4只，雌雄各半，體重20～22g，禁食（不禁水）12h。給小鼠灌胃濃度為500g/L（按生藥量計(jì)）的白及清肺養(yǎng)胃口服液原浸膏0.8mL/只，以摸索白及清肺養(yǎng)胃口服液浸膏的致死劑量。結(jié)果顯示，4只小鼠均未出現(xiàn)死亡。另取KM種小鼠6只，雌雄各半，體重18～20g，禁食（不禁水）12h后，嚴(yán)格按40mL/kg體重給小鼠灌胃濃度為500g/L的白及清肺養(yǎng)胃口服液浸膏。結(jié)果顯示，所有小鼠給藥后均未出現(xiàn)死亡及其它異常反應(yīng)情況，是以無法測(cè)定白及清肺養(yǎng)胃口服液對(duì)小鼠經(jīng)口給藥的半數(shù)致死量（LD50）及最大耐受量。因此，正式試驗(yàn)直接測(cè)定白及清肺養(yǎng)胃口服液對(duì)小鼠經(jīng)口給藥的最大給藥量。

2.2 正式試驗(yàn)

正式試驗(yàn)前，取KM種小鼠，雌雄各半，適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后進(jìn)行正式試驗(yàn)。分組給藥前，將小鼠禁食（不禁水）12h，篩選出體重為18～20g的小鼠40只，隨機(jī)分成兩組——對(duì)照組和白及清肺養(yǎng)胃口服液組，每組20只。對(duì)照組小鼠灌胃蒸餾水，白及清肺養(yǎng)胃口服液組小鼠灌胃濃度為500g/L的白及清肺養(yǎng)胃口服液原浸膏，所有小鼠均按40mL/kg體重的給藥體積一次性灌胃給藥，給藥后觀察兩組小鼠14天內(nèi)出現(xiàn)的死亡及反應(yīng)情況。若有小鼠死亡，立即對(duì)其進(jìn)行解剖，并對(duì)心、肝、脾、肺、腎、腦、胸腺、腎上腺及胃腸道進(jìn)行肉眼病理觀察。14天后，腹腔注射戊巴比妥鈉溶液40mg/kg麻醉小鼠，脫頸椎處死。對(duì)各組小鼠進(jìn)行大體解剖，取其腦、垂體、肺、氣管、支氣管、胸腺、心、主動(dòng)脈、肝、脾、腎、腎上腺、輸尿管、膀胱、胃腸道、子宮等各器官進(jìn)行肉眼觀察，并對(duì)重要器官（心、肝、脾、肺、腎、及腦）進(jìn)行稱重，根據(jù)各器官重量按下列公式計(jì)算各器官指數(shù)。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料以（ ? ? ? ）表示，檢測(cè)方差齊時(shí)，組間比較采用t檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

對(duì)照組小鼠與白及清肺養(yǎng)胃口服液組小鼠給藥后14天內(nèi)均未出現(xiàn)死亡及其他明顯異?！憩F(xiàn)為呼吸平穩(wěn)，活動(dòng)自如，皮膚紅潤(rùn)、無潰爛，被毛有光澤，無蓬松、豎毛現(xiàn)象，眼耳口鼻無異常分泌物，無突眼、瞳孔擴(kuò)大或縮小，耳廓無充血或蒼白等。同時(shí)，進(jìn)食、飲水、大小便均未見異常。與對(duì)照組相比，白及清肺養(yǎng)胃口服液組小鼠的體重增長(zhǎng)均無明顯差異（P>0.05），見表1。14天后，處死給藥組及對(duì)照組小鼠，肉眼觀察所有小鼠的腦、垂體、肺、氣管、支氣管、胸腺、心、主動(dòng)脈、肝、脾、腎、腎上腺、輸尿管、膀胱、胃腸道、子宮等器官組織時(shí)，均未見兩組小鼠各組織器官在體積、顏色及質(zhì)地等各方面存在異常。與對(duì)照組比較，白及清肺養(yǎng)胃口服液組小鼠的心、肝、脾、肺、腦及雙腎重量及器官指數(shù)均無明顯差異（P>0.05），見表2。

白及清肺養(yǎng)胃口服液組小鼠按實(shí)驗(yàn)中能實(shí)現(xiàn)的最大劑量給小鼠灌胃白及清肺養(yǎng)胃口服液浸膏，給藥后小鼠未出現(xiàn)死亡，也未出現(xiàn)其他異常。實(shí)驗(yàn)中能實(shí)現(xiàn)的最高給藥濃度為500g/L，最大給藥體積為40mL/kg，故可折算出本次實(shí)驗(yàn)所測(cè)定的白及清肺養(yǎng)胃口服液對(duì)小鼠經(jīng)口給藥的最大給藥量為200g/kg。

4 討論

急性毒性（Acute toxicity）是指藥物在單次或24小時(shí)內(nèi)多次給予后一定時(shí)間內(nèi)所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)[1，2]。進(jìn)行藥物急性毒性試驗(yàn)，對(duì)初步闡明藥物的毒性作用與了解其毒性靶器官具有重要意義。急性毒性試驗(yàn)中，通?？筛鶕?jù)藥物特點(diǎn)測(cè)定藥物的半數(shù)致死量、最大耐受量或最大給藥量。其中，半數(shù)致死量是指預(yù)期引起50%動(dòng)物死亡的劑量;最大耐受量是指動(dòng)物能夠耐受而不引起動(dòng)物死亡的最高劑量;最大給藥量指動(dòng)物單次或24小時(shí)內(nèi)多次（2～3次）給藥所采用的最大給藥量[3]。半數(shù)致死量的觀察指標(biāo)是動(dòng)物死亡率，測(cè)定最大耐受量時(shí)需要觀察動(dòng)物出現(xiàn)的異常表現(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)中，小鼠能夠接受的最大給藥體積為40mL/kg;未稀釋的白及清肺養(yǎng)胃口服液浸膏的濃度為500g/L時(shí)，正好能夠通過12號(hào)灌胃針頭，若高于該濃度，藥物便會(huì)堵塞灌胃針頭而無法實(shí)現(xiàn)給藥，故該濃度為能實(shí)現(xiàn)給藥的最高濃度。本研究的預(yù)實(shí)驗(yàn)中，將最大濃度（500g/L）的白及清肺養(yǎng)胃口服液浸膏按最大給藥容積（40mL/kg）給小鼠灌胃，所有小鼠均未出現(xiàn)死亡及其他異常反應(yīng)，從而無法測(cè)定其半數(shù)致死量和最大耐受量，所以正式實(shí)驗(yàn)時(shí)只能測(cè)定白及清肺養(yǎng)胃口服液的最大給藥量。在進(jìn)行最大給藥量測(cè)定時(shí)，一次性給予小鼠灌胃最大濃度和最大體積的白及清肺養(yǎng)胃口服液浸膏，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，給藥后14天內(nèi)未發(fā)現(xiàn)小鼠死亡或其他異常表現(xiàn)。因此，測(cè)定到白及清肺養(yǎng)胃口服液?jiǎn)未谓?jīng)口給藥的小鼠最大劑量為200g/kg。

5 小結(jié)

綜上所述，白及清肺養(yǎng)胃口服液對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃給藥后，即使按照能夠?qū)崿F(xiàn)的最大給藥劑量給藥，小鼠仍然沒有出現(xiàn)死亡及其他異常反應(yīng)，表示該受試樣品無明顯毒性，測(cè)定的白及清肺養(yǎng)胃口服液?jiǎn)未谓?jīng)口給藥的小鼠最大給藥量為200g/kg。

參考文獻(xiàn)：

[1] CDER， FDA. Guidance for industry： single dose acute toxicity testing for pharmaceuticals （Final）.1996.

[2] CHMP，EMA.Questions and answers on the withdrawal of the “Note for guidance on single dose toxicity”.2010.

[3] 《藥物單次給藥毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》課題研究組.藥物單次給藥毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒布，2014：5-7.

基金項(xiàng)目：貴州省科技廳科技支撐項(xiàng)目（黔科合[2016]支撐2856）。

作者簡(jiǎn)介：王勇（1985-），男，博士，副高，主要從事植物化學(xué)和藥物分析研究。