陳貴發(fā) 李立新 張翠宏 羅文東

廣東省惠州市第三人民醫(yī)院老年醫(yī)學科 516001

載脂蛋白E(ApoE)是一種多態(tài)性蛋白，主要是參與脂蛋白的轉(zhuǎn)化與代謝過程[1]。這種堿性蛋白有3個等位基因異構(gòu)體，即E2、E3和E4[2]，在對載脂蛋白E的多態(tài)性研究發(fā)現(xiàn)，其多態(tài)性是動脈粥樣硬化早期及發(fā)展過程中個體差異的主要原因，尤其是E4等位基因的一般作用是可以顯著地升高健康人的總膽固醇濃度，從而極易形成動脈粥樣硬化，誘發(fā)動脈粥樣硬化性腦梗死[3]。因此，本文分析ApoE基因多態(tài)性與老年(≥65周歲)大動脈粥樣硬化型腦梗死發(fā)病的嚴重程度及預后的相關(guān)性，旨在為腦梗死的治療提供有利參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2019年1月—2020年3月收治的60例老年大動脈粥樣硬化型腦梗死患者設(shè)為老年梗死組，另選60例性別年齡相匹配的正常體檢人員設(shè)為正常體檢組。老年梗死組：男40例，女20例；年齡65～86歲，平均年齡(64.2±5.4)歲；所有患者均經(jīng)CT、MRI檢查確診為動脈粥樣硬化型腦梗死，且均未患有糖尿病。正常體檢組：男35例，女25例；年齡66～88歲，平均年齡(68.8±6.6)歲。兩組在年齡及性別等一般資料上對比，無顯著差異(P>0.05)，有可比性。

1.2 方法 (1)基因抽查：首先所有的患者均于清晨空腹進行靜脈采血，采取3ml外周靜脈血后及時對其進行基因的抽取。(2)PCR擴增：依據(jù)相關(guān)的文獻設(shè)計引物序列，即上游引物：5’-TAA GCT TGG CAC GGC TGT CCA AGG A-3’，下游引物：5’-ACA GAA TTC GCC CCG GCC TGG TAC A-3’，隨后在反應總體積為50μl下進行擴增，在95℃預變性10min后在此溫度下變性1min，1min后轉(zhuǎn)為60℃退火1min，退火后再在75℃下延伸1min的循環(huán)條件下繼續(xù)擴增33個循環(huán)，循環(huán)結(jié)束后再在72℃下延伸10min[4-5]。隨后將擴增的產(chǎn)物通過2%瓊脂糖凝膠電泳，隨后使用GeL Doc1000紫外線檢測系統(tǒng)對其測試電泳結(jié)果。(3)基因的判定：PCR擴增的產(chǎn)物采取使用限制性內(nèi)切酶Hin6I進行酶切得到酶解產(chǎn)物，隨后采用10%的聚丙烯酰胺凝膠對酶解產(chǎn)物進行電泳[6]，分析其產(chǎn)物基因片段，即：E2中有36、16、91、18、83bp 5個片段，E3中有36、16、91、18、48、35bp 6個片段，E4中有36、16、19、72、18、48、35bp 7個片段。

1.3 觀察指標 采用RCR-RFLP方法對于兩組患者的ApoE基因型進行檢測，并對比兩組差異。隨后將老年梗死組進行NIHSSS評分，按照評分數(shù)值分為高危組與低危組，各30例，對比高危組和低危組患者的ApoE基因型情況。

1.4 統(tǒng)計學方法 使用SPSS20.0軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料采用率(%)表示，行χ2檢驗，以P<0.05作為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

在ApoE3/4基因型頻率與ε4等位基因頻率中，老年梗死組明顯高于正常體檢組，組間差異明顯(P<0.05)；而在高危組與低危組患者的對比中，兩組的基因型與等位基因頻率差別不大(P>0.05)。詳情見表1、表2。

表1 各組患者的ApoE基因型效比較[n(%)]

表2 各組患者的ApoE等位基因頻率比較[n(%)]

3 討論

動脈粥樣硬化性腦梗死也被稱為動脈硬化血栓形成性腦梗死，主要是由于腦部動脈粥樣硬化和血栓形成，使得腦血管管腔狹窄或閉塞，導致急性腦供血不足，從而引起的局部腦組織缺血性壞死[7]?；颊咴诓“l(fā)后容易出現(xiàn)癱瘓、失語等腦局灶性損害的癥狀，因此該疾病也被稱為是缺血性腦血管疾病，主要是在老年人群體中較為多發(fā)。臨床研究發(fā)現(xiàn)，形成動脈粥樣硬化性腦梗死的危險因素較多，本文針對ApoE基因多態(tài)性是否與其具有相關(guān)性進行了深入的研究，期望從中探尋這兩者之間的相關(guān)性，從而為對動脈粥樣硬化型腦梗死發(fā)病的原因及如何進行有效治療尋找突破口，從而更好地在疾病發(fā)生的早期進行預防。

ApoE基因是人體血液血漿中一種重要的組成成分，主要是由299個氨基酸殘基組成的一種富含精氨酸的堿性蛋白，在人體血漿中的極低、中、高密度脂蛋白和乳糜微粒中均含有該基因成分，而ApoE基因是LDL受體的配體，同時還是肝細胞CM殘粒受體的配體，從而其具有轉(zhuǎn)運膽固醇、調(diào)節(jié)脂類代謝的重要作用，因此其與血脂中的蛋白代謝具有十分重要的意義。有研究表明，動脈粥樣硬化與血脂代謝是否正常具有相關(guān)性，而ApoE基因多態(tài)性是決定個體血脂水平與動脈粥樣硬化之間存在密切相關(guān)性的原因，并且ApoE基因中的E4更加是造成動脈粥樣硬化型腦梗死的一大危險因素，主要是由于其能夠讓小腸吸收膽固醇，導致血漿中的膽固醇含量顯著增高，而人體內(nèi)的膽固醇無法有效的排出體外，從而造成人體內(nèi)膽固醇含量較高，患者的血脂代謝異常，導致大動脈粥樣硬化型腦梗死疾病的發(fā)作。并且還有研究報告顯示，ApoE基因的生理功能具有參與免疫調(diào)節(jié)劑神經(jīng)組織的再生作用，且在對其的研究中發(fā)現(xiàn)ApoE基因中的ε3和ε4對神經(jīng)元細胞具有一定的影響性，主要表現(xiàn)為ε3能夠?qū)ι窠?jīng)元細胞的生長產(chǎn)生促進作用，從而減少了神經(jīng)元細胞產(chǎn)生過多的分支，而ε4則具有相反的作用，會抑制神經(jīng)元細胞的生長。因此，ApoE基因在人體中的作用具有多樣性，不同的基因型和等位基因頻率會在人體中形成不同的生理性作用，這也表示針對動脈粥樣硬化型腦梗死而言，不同等位基因的人群在該疾病的患病率上具有差異性。由于ApoE基因多態(tài)性具有十分重要的臨床研究意義，因此在對其進行分析研究后將其結(jié)果運用在實際臨床中能夠?qū)εR床疾病的診斷及尋求新的治療方式具有一定的幫助性。

本文結(jié)果顯示，在ApoE3/4基因型頻率與ε4等位基因頻率中，老年梗死組明顯高于正常體檢組，組間差異明顯(P<0.05)；該結(jié)果同Jin等的實驗結(jié)果具有一致性[8]，表明ε4基因在老年大動脈粥樣硬化型腦梗死疾病中屬于遺傳易感因子。而在高危組與低危組患者的對比中，兩組的基因型與等位基因頻率差別不大(P>0.05)，表明ApoE基因型及基因多態(tài)性與老年大動脈粥樣硬化型腦梗死患者的NIHSS評分之間不具有相關(guān)性。

綜上所述，在老年大動脈粥樣硬化型腦梗死的發(fā)病中，ApoE基因多態(tài)性與其相關(guān)性較為明顯，但是與患者的預后關(guān)聯(lián)性不大。