韓斌，龐楠，余強(qiáng)

直腸癌是臨床常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤。手術(shù)目前仍是直腸癌的主要治療手段，可有效清除腫瘤組織，促進(jìn)患者病情轉(zhuǎn)歸，延長生存時間。但部分患者術(shù)后病情仍持續(xù)進(jìn)展，腫瘤細(xì)胞持續(xù)擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移，不僅影響治療效果，還將增加后續(xù)治療實施的難度，病死風(fēng)險提高[1]。故早期預(yù)測腫瘤細(xì)胞的各項生物學(xué)行為，有利于合理治療的展開。血清腫瘤標(biāo)志物是目前臨床常用的診斷惡性腫瘤的重要參考指標(biāo)，具有易于檢測、操作簡單等多個優(yōu)點，且在判斷療效、預(yù)測腫瘤進(jìn)展等方面也發(fā)揮關(guān)鍵性作用[2-3]。血清堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)是一種具有多種功能的細(xì)胞因子，對成纖維細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞等均有較強(qiáng)的促分裂及促增殖活性，與多種腫瘤均有密切聯(lián)系[4]。富含半胱氨酸蛋白61(Cry61)是CNN家族成員之一，在人體細(xì)胞內(nèi)廣泛存在，不僅能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)形成，還具有影響細(xì)胞增殖、凋亡等多種作用，參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[5]。結(jié)合bFGF和Cry61二者的特點，推測bFGF、Cry61可能與直腸癌的癌性生物學(xué)行為也有一定聯(lián)系。本資料主要觀察直腸癌患者血清bFGF、Cry61表達(dá)水平與患者癌性生物學(xué)行為的相關(guān)性，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年2月—2020年5月中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊第九九〇醫(yī)院信陽院區(qū)收治的80例直腸癌患者。其中男45例，女35例；年齡40～59(49.57±2.16)歲；腫瘤直徑1.3～3.7(2.27±0.28)cm。倫理委員會對本次研究設(shè)計內(nèi)容知情，并批準(zhǔn)同意實施，患者及家屬均知曉本次研究內(nèi)容，簽署知情同意書。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國結(jié)直腸癌診療規(guī)范(2015版)》中直腸癌相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，并均經(jīng)影像學(xué)、病理學(xué)檢查確診；②均接受手術(shù)治療；③預(yù)計生存時間>3個月。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他惡性腫瘤；②盆腹腔粘連的患者；③近1個月內(nèi)服用影響胃腸道動力及胃腸激素分泌藥物的患者；④有精神障礙或心理疾病無法很好的配合研究內(nèi)相關(guān)檢查的患者；⑤既往有腹部手術(shù)史的患者。

1.3 方法

1.3.1 癌性生物學(xué)行為判定方法 以手術(shù)病理結(jié)果結(jié)果為準(zhǔn)，主要的生物學(xué)行為包括腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散、分化程度和病理分期情況，其中病理分期依據(jù)惡性腫瘤國際臨床病期分期(TNM)[7]分期，分為Ⅰ～Ⅲ期；分化程度包括低分化、中分化和高分化。

1.3.2 實驗室指標(biāo)檢測方法 (1)血清bFGF檢測方法：采集全部患者入院時的空腹外周靜脈血4 mL，進(jìn)行離心處理，以3 000 r/min的離心速度共離心15 min，離心完畢后取上清液，放置于-20 ℃的冰箱內(nèi)待檢。使用美國R&D Systems公司的試劑盒，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗法測定血清bFGF表達(dá)情況。(2)血清Cry61檢測方法：采集全部患者入院時的空腹外周靜脈血4 mL，室溫靜置30 min后進(jìn)行離心處理，以3 000 r/min的離心速度共離心20 min，離心完畢后取上清液，放置于-70 ℃的冰箱內(nèi)待檢。使用美國R&D Systems公司的試劑盒，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法測定血清Cry61表達(dá)情況。

2 結(jié)果

2.1 癌性生物學(xué)行為分布 80例患者45例低分化、35例中高分化，31例轉(zhuǎn)移擴(kuò)散，39例為Ⅰ期、24例為Ⅱ期、17例為Ⅲ期。見表1。

表1 癌性生物學(xué)行為分布

2.2 不同癌性生物學(xué)行為血清bFGF和Cry61水平比較 腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散患者和Ⅲ期患者的血清bFGF、Cry61表達(dá)均高于腫瘤細(xì)胞未轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散患者和Ⅰ～Ⅱ期患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，但不同分化程度間和Ⅰ、Ⅱ期患者間的血清bFGF、Cry61表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同癌性生物學(xué)行為血清bFGF和Cry61水平比較

2.3 血清bFGF、Cry61表達(dá)對直腸癌不同癌性生物學(xué)行為的影響分析 將各血清指標(biāo)作為自變量，分別將腫瘤細(xì)胞有無轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散(1=有，0=無)、TNM分期情況(1=Ⅲ期，0=Ⅰ～Ⅱ期)作為因變量，經(jīng)二元Logistic回歸分析后，將全部資料納入建立多元回歸模型，結(jié)果顯示，血清bFGF、Cry61高表達(dá)是直腸癌患者腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散和TNM高分期的風(fēng)險因子(OR>1，P<0.05)。見表3。

表3 血清bFGF和Cry61表達(dá)對直腸癌不同癌性生物學(xué)行為的影響分析

2.4 血清bFGF、Cry61表達(dá)預(yù)測直腸癌不同癌性生物學(xué)行為的效能分析 將直腸癌患者腫瘤細(xì)胞有無轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散(1=有，0=無)、TNM分期情況(1=Ⅲ期，0=Ⅰ～Ⅱ期)作為狀態(tài)變量，將直腸癌患者的血清bFGF、Cry61表達(dá)情況作為檢驗變量，繪制ROC曲線(見圖1～2)，結(jié)果顯示，血清bFGF、Cry61單獨和聯(lián)合預(yù)測直腸癌患者腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散、TNM高分期風(fēng)險的AUC均>0.80，有一定預(yù)測價值。各指標(biāo)及聯(lián)合預(yù)測對應(yīng)最佳閾值、特異度、靈敏度及約登指數(shù)見表4。

表4 血清bFGF、Cry61表達(dá)預(yù)測直腸癌不同癌性生物學(xué)行為的效能分析

圖1 血清bFGF、Cry61表達(dá)預(yù)測直腸癌腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散風(fēng)險的ROC曲線圖

圖2 血清bFGF、Cry61表達(dá)預(yù)測直腸癌高分期風(fēng)險的ROC曲線圖

3 討論

早期診斷和手術(shù)治療雖可延長直腸癌患者的生存時間，但部分患者術(shù)后仍有腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散的癌性生物學(xué)行為風(fēng)險，增加病死率[8]。文獻(xiàn)指出，惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與血管生成、細(xì)胞凋亡等過程密切相關(guān)，且多種蛋白質(zhì)物質(zhì)和細(xì)胞因子也參與了該過程[9]。故血清腫瘤標(biāo)志物的檢測對直腸癌的診斷、療效觀察及病情進(jìn)展預(yù)測均有重要意義。

血管新生刺激因子及血管新生抑制因子在正常情況下處于平衡狀態(tài)，但在腫瘤狀態(tài)下，腫瘤可介導(dǎo)大量的血管新生刺激因子合成分泌，加速內(nèi)皮細(xì)胞增殖，促進(jìn)新毛細(xì)血管生成，從而滿足不斷增加的腫瘤細(xì)胞對營養(yǎng)物質(zhì)及氧的需求[10]。并且，新生血管可為腫瘤細(xì)胞提供良好的代謝產(chǎn)物排泄途徑，促使腫瘤不斷增長[11]。血清bFGF是目前臨床所了解的作用較強(qiáng)和特異性較高的血管新生正調(diào)控因子，不僅可為神經(jīng)內(nèi)胚層和中胚層的有絲分裂活性提供良好條件，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖，還可增強(qiáng)血管通透性，從而促進(jìn)新生血管形成，在腫瘤發(fā)展、發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用[12-13]。血清Cry61是CNN家族中最先被發(fā)現(xiàn)的一個成員，其主要位于人染色體1p22.3區(qū)域，且結(jié)構(gòu)中存在大量的半胱氨酸[14]。血清Cry61可誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞的增殖，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)合成分泌，還可趨化有絲分裂，提高其活性，參與胚胎發(fā)育形成、血管生成等多個過程[15]。同時，血清Cry61還可調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和分化，從而參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展等過程[16]。本資料結(jié)果顯示，腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散患者、Ⅲ期患者的血清bFGF、Cry61表達(dá)均高于腫瘤細(xì)胞未轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散患者和Ⅰ～Ⅱ期患者，初步提示血清bFGF、Cry61表達(dá)在直腸癌患者不同的癌性生物學(xué)行為中存在差異，隨著血清bFGF、Cry61表達(dá)隨之升高，腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移擴(kuò)散發(fā)生風(fēng)險增加及病理分期升高。究其原因：血清bFGF可通過促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、增強(qiáng)血管通透性等過程為腫瘤生長提供足夠營養(yǎng)，從而使腫瘤細(xì)胞大量增殖、遷移，進(jìn)而促進(jìn)病情發(fā)展和轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散[17]。血清Cry61可與細(xì)胞膜上配體結(jié)合，增強(qiáng)整聯(lián)蛋白偶聯(lián)激酶活性，繼而激活信號通路，促進(jìn)腫瘤發(fā)生和發(fā)展。并且血清Cry61還可促進(jìn)血管內(nèi)皮生長因子和其受體表達(dá)，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，并激活下游靶基因，從而調(diào)節(jié)新生血管的形成[18]。故認(rèn)為血清Cry61水平失調(diào)可能作為啟動因子，引起下游細(xì)胞外基質(zhì)合成及分解失調(diào)等病理過程，從而促進(jìn)腫瘤進(jìn)展與轉(zhuǎn)移。為了進(jìn)一步明確血清bFGF、Cry61表達(dá)與直腸癌患者癌性生物學(xué)行為的關(guān)系，本資料行回歸分析結(jié)果顯示，血清bFGF、Cry61過表達(dá)均是直腸癌患者腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散和TNM高分期的風(fēng)險因子；最后繪制ROC曲線結(jié)果顯示，血清bFGF、Cry61單獨和聯(lián)合預(yù)測直腸癌患者腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散、TNM高分期風(fēng)險的AUC均>0.80，預(yù)測價值均較理想，上述結(jié)果均提示，血清bFGF、Cry61表達(dá)與直腸癌患者癌性生物學(xué)行為有關(guān)，并可作為直腸癌患者癌性生物學(xué)行為預(yù)測標(biāo)志物。

綜上所述，直腸癌患者癌性生物學(xué)行為可能與血清bFGF、Cry61過表達(dá)有關(guān)，臨床可考慮通過早期監(jiān)測直腸癌患者的血清bFGF、Cry61表達(dá)，來指導(dǎo)早期合理治療方案的擬定，積極控制血清各指標(biāo)水平表達(dá)，可能對控制疾病、促進(jìn)良性預(yù)后有積極意義。