蔣曉玲，李 飛，竇維佳，馬艷琳，姚 武＊

1.吉木乃海關(guān)，新疆阿勒泰 836500

2.阿勒泰海關(guān)，新疆阿勒泰 836500

戈寶麻，羅布麻夾竹桃科茶葉花屬作物，學(xué)名Apocynum Venetum L.，多年生野生草本韌皮纖維植物，在我國(guó)幾乎瀕臨滅絕，維吾爾語(yǔ)稱(chēng)其為“克孜其干”，新疆人稱(chēng)為“小花羅布麻”，在中國(guó)西北至東北十多個(gè)省均有零星分布，以新疆羅布泊西北方向興地峽谷和阿勒泰阿拉哈克鹽湖邊生長(zhǎng)的為上品，在新疆阿勒泰地區(qū)因其特殊的生態(tài)環(huán)境及品質(zhì)，由劉起堂更名為戈寶麻，其葉的總黃酮含量、氨基酸含量均很高，是《中國(guó)藥典》規(guī)定的最低標(biāo)準(zhǔn)的4～5倍。虞穎映等研究表明羅布麻茶在人體攝入量100倍范圍內(nèi)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的各項(xiàng)毒理學(xué)指標(biāo)未產(chǎn)生毒理作用，可作為安全的天然植物茶，它具有降血壓、治療氣管炎、感冒的作用，還有抗輻射、抗衰老等功能。此外還可以用于治療抑郁和焦慮等疾病，和市面上的抗抑郁類(lèi)藥物相比，有著治療效果好、毒副作用少、藥用成本低等優(yōu)點(diǎn)，受到了廣泛關(guān)注，這也就擴(kuò)大了戈寶麻的藥用范圍。總黃酮含量是評(píng)價(jià)羅布麻茶出口品質(zhì)的一項(xiàng)重要指標(biāo)，但是總黃酮含量測(cè)定在試劑過(guò)程中遇到了很多問(wèn)題且操作比較復(fù)雜,如吸附劑粒度大小的問(wèn)題、洗脫后溶液測(cè)定前放置時(shí)間的問(wèn)題、乙醇濃度等問(wèn)題。測(cè)定總黃酮含量有多種方法，包括液相色譜法、紫外區(qū)直接測(cè)定法、超聲提取法等。由新疆阿勒泰羅布麻有限公司生產(chǎn)的戈寶麻茶主要出口至日本和韓國(guó)等地區(qū)。我們對(duì)目前我國(guó)統(tǒng)一采用《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范實(shí)施手冊(cè)》（2003版）中的方法、前人所做方法及本實(shí)驗(yàn)室前期制定的方法進(jìn)行優(yōu)化整合，建立了快速高效的測(cè)定方法，為進(jìn)一步服務(wù)地方發(fā)展，保障出口戈寶麻茶的品質(zhì)，加快企業(yè)的通關(guān)速度具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 樣品、主要試劑及儀器

戈寶麻茶（由新疆阿勒泰羅布麻有限公司提供）；無(wú)水乙醇（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）；石油醚（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）；聚酰胺粉（浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠出品）；甲醇（西安化學(xué)試劑廠）；聚酰胺層析柱（安捷倫）；粉碎儀（Retsch）；旋蒸儀（上海東璽制冷儀器設(shè)備有限公司）；超聲波清洗器(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司)；均質(zhì)儀（德國(guó)Heidolph）；紫外分光光度計(jì)（ThermoFisherscientific）；水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

參照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范實(shí)施手冊(cè)》中總黃酮的測(cè)定配制標(biāo)準(zhǔn)液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

1.3 方法

1.3.1 操作步驟

圖1 操作工藝圖

采樣方法參照GB/T8302進(jìn)行，取樣用具和盛器應(yīng)符合食品衛(wèi)生有關(guān)規(guī)定，采取隨機(jī)取樣的方法采取相應(yīng)量的戈寶麻茶，將戈寶麻茶樣品混合均勻，取適量用粉碎儀粉碎，置于取樣袋，備用。

1.3.2 不同乙醇濃度提取總黃酮

分別稱(chēng)取0.5g粉碎后的戈寶麻茶于雞心瓶，第一組實(shí)驗(yàn)加入50mL50%乙醇，第二組實(shí)驗(yàn)加入50 mL 75%乙醇，第三組實(shí)驗(yàn)加入50 mL80%乙醇，第四組實(shí)驗(yàn)加入50mL90%乙醇搖勻，頻率53Khz60℃超聲波清洗器中超聲提取30min，過(guò)濾，取濾液0.5mL加入到含1g聚酰胺粉的蒸發(fā)皿中（濾液均勻分布），水浴83℃揮干乙醇，用漏斗轉(zhuǎn)移至聚酰胺層析柱中，25mL石油醚洗滌，吹干。用甲醇洗脫至聚酰胺粉為無(wú)色，收集洗脫液，旋蒸儀對(duì)洗脫液進(jìn)行濃縮，用比色管定容至10mL。甲醇調(diào)零，于360nm紫外分光光度計(jì)下測(cè)定吸光度值。每個(gè)樣品分別設(shè)3個(gè)重復(fù)。

1.3.3 乙醇不同加入方式提取總黃酮

分別稱(chēng)取0.5g粉碎后的戈寶麻于雞心瓶，第一組實(shí)驗(yàn)用1.3.2確定的乙醇濃度定容至 50 mL，第二組實(shí)驗(yàn)直接加入50mL相應(yīng)濃度乙醇，其余步驟同1.3.2。每個(gè)樣品分別設(shè)3個(gè)重復(fù)。

1.3.4 不同蒸餾時(shí)間提取總黃酮

分別稱(chēng)取0.5g粉碎后的戈寶麻于雞心瓶，用1.3.3確定的乙醇濃度及1.3.4確定的乙醇加入方式加入雞心瓶，搖勻，用83℃熱水回流1h、2h、3h、6h、8h。其余操作步驟同1.3.2。每個(gè)樣品分別設(shè)3個(gè)重復(fù)。

1.3.5 高溫振蕩提取總黃酮

分別稱(chēng)取0.5g粉碎后的戈寶麻置于燒杯中，第一組實(shí)驗(yàn)置于13000rpm/min均質(zhì)儀中1 min，第二組實(shí)驗(yàn)置于83℃水浴搖床振蕩30 min，第三組實(shí)驗(yàn)置于13000rpm/min均質(zhì)儀中1min后83℃水浴振蕩30min。其余操作步驟同1.3.2。每個(gè)樣品分別設(shè)3個(gè)重復(fù)。

1.3.6 回收率試驗(yàn)

將已知濃度蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液加入含1g聚酰胺粉的蒸發(fā)皿中（濾液均勻分布），水浴83℃揮干乙醇，用漏斗轉(zhuǎn)移至聚酰胺層析柱中，25mL石油醚洗滌，吹干。其余操作方法同1.3.2。

蘆丁回收率%=(實(shí)際測(cè)得蘆丁含量/理論上蘆丁含量)×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖

按照1.2中方法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)蘆丁溶液進(jìn)行吸光度測(cè)定，以濃度對(duì)吸光度值做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，如圖2所示。線(xiàn)性回歸方程為Y＝0.0272X-0.0033，總黃酮含量（以蘆丁計(jì)）在0～25ug/mL范圍內(nèi)，符合朗伯比爾定律，關(guān)系數(shù)0.2＜A＜0.8，線(xiàn)性關(guān)系良好。

圖2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖

2.2 乙醇濃度的確定

按照1.3.2測(cè)定不同乙醇濃度提取總黃酮所得量，于360nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，計(jì)算所得結(jié)果如表1所示。結(jié)果顯示，戈寶麻采用75%乙醇作為提取液時(shí)，提取效率較高，采用t檢驗(yàn)，P＜0.01，差異性極顯著。

表1 乙醇濃度試驗(yàn)

2.3 乙醇加入方式的確定

按照1.3.4測(cè)定不同加入方式加入2.2確定的75%乙醇，計(jì)算結(jié)果如表2所示，定容至50 mL的提取效率高于直接加入50mL乙醇的提取效率，采用t檢驗(yàn)，P＜0.01,差異性極顯著。

表2 乙醇加入方式試驗(yàn)

2.4 蒸餾時(shí)間（加熱回流時(shí)間）

按照1.3.4測(cè)定不同加熱回流時(shí)間的總黃酮提取率，計(jì)算結(jié)果如表3所示，結(jié)果顯示6h后提取的總黃酮含量均值達(dá)3.92g/100g，采用t檢驗(yàn)，分析加熱回流后的提取效果，P＜0.01，差異性極顯著。

表3 蒸餾時(shí)間試驗(yàn)

2.5 高溫振蕩提取總黃酮

按照1.3.5中用13000rpm/min的均質(zhì)儀及83℃搖床中總黃酮含量的測(cè)定，計(jì)算結(jié)果如表4所示。結(jié)果表明，1min均質(zhì)儀后，于83℃水浴搖床中30 min總黃酮提取量均值為3.62 g/100g，采用t檢驗(yàn)，兩兩分析結(jié)果表明，P＜0.01，差異性極顯著。

表4 高溫振蕩提取總黃酮

2.6 回收率

按1.3.6測(cè)得蘆丁平均回收率為102.03%。

3 討論

在我國(guó)中草藥植物發(fā)展的歷史長(zhǎng)河中，羅布麻有著舉足輕重的地位，尤其在新疆，已在人們的日常生活中發(fā)揮著極為特殊的健康作用。與普通羅布麻相比，新變種阿勒泰戈寶麻無(wú)論在有效成份含量亦或是珍稀程度上，均堪稱(chēng)上品。大量研究表明，羅布麻含有多種化學(xué)成分，包括黃酮類(lèi)，糖苷類(lèi)，甾醇類(lèi)，酸類(lèi)，氨基酸類(lèi)，微量元素類(lèi)（鈉、鈣、鎂、鐵、鉀、錳）等物質(zhì)，其中黃酮類(lèi)是其主要成分，含量在0.2%～2.5%。它可以降血壓、降血脂、抗抑郁、抗氧化等作用。目前我國(guó)規(guī)定的保健食品中總黃酮的測(cè)定主要采用紫外分光光度法和硝酸鋁顯色法2種方法，不同的測(cè)定方法對(duì)羅布麻同一材料的測(cè)定結(jié)果不完全相同，有時(shí)甚至可能會(huì)有較大差異。為了提高總黃酮提取量，有效評(píng)價(jià)出口戈寶麻茶的功效，我們采取了多種方法進(jìn)行優(yōu)化。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單快速，回收率為102.03%，利用本法提取得到的黃酮類(lèi)物質(zhì)純度較高。本實(shí)驗(yàn)首先通過(guò)乙醇加入方式進(jìn)行了比較，提取結(jié)果顯示定容加入乙醇的方式效果優(yōu)于直接加入乙醇的方式，差異性極顯著，可能是由于直接加入乙醇的量大于定容乙醇的量，稀釋了戈寶麻茶中總黃酮的量。

通過(guò)比較本實(shí)驗(yàn)室采用的75%乙醇提取總黃酮含量與前人使用的80%乙醇相比較，差異性顯著，75%乙醇提取效果優(yōu)于80%，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，黃酮物質(zhì)高效液相色譜分析結(jié)果說(shuō)明，水提取物中主要是蘆丁和綠原酸，50%醇提取物中主要是蘆丁和原兒茶酸，95%醇提取物種主要是蘆丁，從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明戈寶麻茶中總黃酮成分大多是脂溶性成分。

通過(guò)比較不同乙醇濃度及不同乙醇加入方式超聲波提取30min、加熱回流時(shí)間梯度及均質(zhì)1min置于83℃搖床30min中比較總黃酮提取量，發(fā)現(xiàn)加熱回流時(shí)間6h和均質(zhì)1min置于83℃搖床30min中效果較好，均值分別為3.92g/100g和3.62g/100g。出于用簡(jiǎn)單、快速、高效的方法提取戈寶麻中總黃酮含量，加快企業(yè)通關(guān)速度，我們選擇后者作為黃酮測(cè)定的方法。對(duì)于隨著蒸餾時(shí)間的加長(zhǎng)能否繼續(xù)提升黃酮提取含量，有待我們進(jìn)一步研究。

采用75%乙醇作為提取液定容至50mL，均質(zhì)1min置于83℃搖床30min中的方法與保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范實(shí)施手冊(cè)的區(qū)別見(jiàn)表5。

表5 與保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范實(shí)施手冊(cè)區(qū)別

4 結(jié)論

定容加入乙醇的方式總黃酮含量效果優(yōu)于直接加入乙醇的方式。75%乙醇提取總黃酮含量的效果較好。本方法建議戈寶麻茶中總黃酮提取方法具有較好效果的處理?xiàng)l件為：一是采用75%乙醇作為提取液，定容至50mL，加熱回流時(shí)間6h；二是采用75%乙醇作為提取液定容至50mL，均質(zhì)1min置于83℃搖床30min中效果較好。