劉震宇，姚淑芳

（河南省三門峽市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南 三門峽 472000）

癲癇常規(guī)治療方式包括藥物治療、手術(shù)治療等,成人癲癇一般通過(guò)藥物治療可以得到有效控制,但是，部分患者在治療后預(yù)后不佳，癲癇發(fā)作仍較為頻繁[1]。若能早期預(yù)測(cè)癲癇患者的預(yù)后情況，對(duì)調(diào)整治療方案，改善患者預(yù)后較為重要。癲癇的發(fā)生發(fā)展與機(jī)體的免疫功能有關(guān)，研究表明，炎癥反應(yīng)和免疫功能紊亂均會(huì)增加癲癇的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，加重癲癇病情,且多種免疫相關(guān)因子在癲癇患者中表達(dá)異常[2]。白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-10、B細(xì)胞活化因子(B-cell activating factor of TNF family,BAFF)是常見(jiàn)的炎癥因子，其異常表達(dá)與免疫功能紊亂有關(guān),研究證實(shí)，IL-10、BAFF與癲癇病情關(guān)系密切[3]。微小核糖核酸(microRNA,miRNA)可能是癲癇發(fā)病的關(guān)鍵因素之一，在癲癇、中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常病變等疾病的發(fā)生發(fā)展中具有促進(jìn)或抑制作用，且已有研究從miRNA靶基因和途徑出發(fā)探索癲癇治療方法[4]。miR-222可調(diào)節(jié)炎癥因子，刺激炎癥因子、黏附因子的分泌，加重免疫功能紊亂,增加疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),而且可能和炎癥因子相互作用促進(jìn)癲癇的發(fā)生[5]。由此推測(cè)，miR-222、BAFF可能與癲癇患者的預(yù)后有關(guān)?；诖?，本研究分析癲癇患者血清miR-222、BAFF水平表達(dá)的臨床意義及對(duì)預(yù)后的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 前瞻選擇2017年1月-2018年1月醫(yī)院113例癲癇患者作為研究對(duì)象。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò),患者與家屬均知情且自愿簽署同意書(shū)。其中，男68例，女45例；年齡32～73歲,中位年齡49.00（45.00,53.00）歲；體重指數(shù)18.23～25.97kg/m2,中位體重指數(shù)22.03（21.63,22.41）kg/m2；病程1～12年,中位病程3.00（2.00，3.00）年；治療前發(fā)作次數(shù)2～12次/月，治療前發(fā)作次數(shù)中位數(shù)6.00（5.00，6.00）次/月。⑴納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《臨床診療指南：癲癇病分冊(cè)》[6]癲癇診斷標(biāo)準(zhǔn)；②經(jīng)腦電圖檢查確診癲癇；③顱腦損傷引起的繼發(fā)性癲癇。⑵排除標(biāo)準(zhǔn)：①基因檢測(cè)驗(yàn)證為存在基因突變導(dǎo)致的癲癇發(fā)作；②肌陣痙攣性癲癇；③合并感染性疾??；④惡性腫瘤；⑤失訪。

1.2 方法

1.2.1 血清指標(biāo)檢測(cè)方法⑴miRNA：入院時(shí)，采集5ml空腹靜脈血，靜置30min（常溫下），離心機(jī)（鄭州中谷機(jī)械設(shè)備，TGL-16）離心，-80℃下保存待測(cè)。使用上海康朗生物提供的Trizol RNA試劑盒，加入Trizol RNA，提取RNA，使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA總純度是否達(dá)標(biāo)（純度良好區(qū)間范圍為1.8～2.0）,達(dá)標(biāo)后使用德國(guó)QIAGEN公司提供的PCR試劑盒,加入0.5μl逆轉(zhuǎn)錄酶，于37℃下水浴，將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,使用實(shí)時(shí)PCR系統(tǒng)（Applied Bioststems，7500）擴(kuò)增,采用2﹣△△Ct法計(jì)算血清miR-222、miR-21相對(duì)表達(dá)量。miR-222正向引物：5'-ACACTCCAGCTGGGAGCTACATCTGGCTACTG-3'；反向引物：5'-CTCAACTGGTCTCGTGCA-3'。miR-21正 向 引 物：5'-CTGCAGGGTCCGAGGT-3'；反 向 引 物：5'-GCCCCTAGCTTACACACTGATCT-3'。⑵炎癥因子：入院時(shí)，采集5ml空腹時(shí)靜脈血離心取上清,置于-20C冰箱保存待測(cè)，采用酶聯(lián)免疫試劑盒，以酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清IL-10、BAFF表達(dá)。

1.2.2 治療方法 ⑴詢問(wèn)病史、腦電圖檢查等明確患者8周內(nèi)癲癇發(fā)作的頻次、類型和抗癲癇藥物使用情況；⑵口服左乙拉西坦（UCB Pharma S.A.公司，生產(chǎn)批號(hào)：20160922、20170825，規(guī)格：0.25g），初始劑量為250mg/次,2次/d，在4周內(nèi)逐漸增加至500mg/次,2次/d，共維持治療12周，進(jìn)入開(kāi)放性治療期，繼續(xù)口服左乙拉西坦500mg/次,2次/d，繼續(xù)觀察12周。共治療24周。

1.2.3 預(yù)后評(píng)估方法 治療完成后1年,采用Engel分級(jí)[7]評(píng)估預(yù)后，Ⅰ級(jí)：僅有先兆發(fā)作或發(fā)作完全消失；Ⅱ級(jí)：發(fā)作次數(shù)≤3次/年；Ⅲ級(jí)：發(fā)作次數(shù)＞但較治療前減少≥75%；Ⅳ級(jí)：發(fā)作次數(shù)較治療前減少＜75%。Ⅰ級(jí)為預(yù)后良好，Ⅱ級(jí)-Ⅳ級(jí)為預(yù)后不良。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS 23.0軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以%和n表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；全部計(jì)量資料均經(jīng)Shapiro-Wilk正態(tài)性檢驗(yàn)，偏態(tài)分布計(jì)量資料用中位數(shù)（四分位數(shù)）[M（P25，P75）]表示，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)；血清指標(biāo)與癲癇患者預(yù)后不良的關(guān)系采用Logistic回歸分析檢驗(yàn)；繪制受試者工作曲線（ROC），并計(jì)算曲線下面積（AUC）值，檢驗(yàn)血清miR-222、BAFF水平預(yù)測(cè)癲癇患者預(yù)后不良的價(jià)值，AUC值＞0.9表示預(yù)測(cè)性能較高，0.71～0.90表示有一定預(yù)測(cè)性能，0.5～0.7表示預(yù)測(cè)性能較低，＜0.5表示無(wú)預(yù)測(cè)性能，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 預(yù)后結(jié)局 治療完成后經(jīng)1年隨訪統(tǒng)計(jì)顯示，研究?jī)?nèi)113例癲癇患者中預(yù)后不良的患者有31例，占比為27.43%（31/113），其中Ⅱ級(jí)18例，Ⅲ級(jí)11例，Ⅳ級(jí)2例；預(yù)后良好的（Ⅰ級(jí)）的患者有82例，占比為72.57%（82/113）。

2.2 兩組患者基線資料比較 預(yù)后不良組miR-222、miR-21、IL-10、BAFF水 平 均 高 于 預(yù) 后 良 好組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩組其他基線資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組患者基線資料比較

2.3 血清指標(biāo)與癲癇患者預(yù)后不良關(guān)系的Logistic回歸分析 將2.2中比較結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變量納入作為自變量（均為連續(xù)變量）,將癲癇患者預(yù)后情況作為因變量（1=預(yù)后不良，0=預(yù)后良好）,經(jīng)Logistic回歸分析檢驗(yàn)結(jié)果顯示,miR-222、BAFF與癲癇患者預(yù)后不良有關(guān)，二者過(guò)表達(dá)可能是癲癇患者預(yù)后不良的風(fēng)險(xiǎn)因子（OR＞1，P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 血清指標(biāo)與癲癇患者預(yù)后不良關(guān)系的Logistic回歸分析

2.4 血清miR-222、BAFF單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)癲癇患者預(yù)后不良的價(jià)值 將癲癇患者預(yù)后情況作為狀態(tài)變量（1=預(yù)后不良，0=預(yù)后良好），將入院時(shí)血清miR-222、BAFF水平作為檢驗(yàn)變量，繪制ROC曲線圖,見(jiàn)圖1,結(jié)果顯示,入院時(shí)血清miR-222、BAFF水平單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)癲癇患者預(yù)后不良的AUC分別為0.731、0.783、0.801,均有一定預(yù)測(cè)價(jià)值,且當(dāng)二者的cut-off值分別取1.208、7.837ng/ml時(shí)，可獲得最佳預(yù)測(cè)價(jià)值。見(jiàn)表3。

圖1 血清miR-222、BAFF單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)癲癇患者預(yù)后不良的ROC曲線圖

表3 血清miR-222、BAFF單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)癲癇患者預(yù)后不良的價(jià)值

3 討論

目前,普遍認(rèn)為癲癇的發(fā)病與中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染、腦部結(jié)構(gòu)病變等因素有關(guān)，但具體發(fā)病機(jī)制尚不清楚，而且，目前癲癇治療現(xiàn)狀不佳[8]。因此，尋找新的生物標(biāo)志物來(lái)預(yù)測(cè)癲癇患者的預(yù)后,對(duì)癲癇的治療和病情評(píng)估較為重要。

研究表明，癲癇患者治療現(xiàn)狀不甚理想[9]。本研究結(jié)果顯示，治療完成后經(jīng)1年隨訪統(tǒng)計(jì)顯示，研究?jī)?nèi)113例癲癇患者中預(yù)后不良的患者有31例，占比為27.43%，其中Ⅱ級(jí)18例，Ⅲ級(jí)11例，Ⅳ級(jí)2例。說(shuō)明，仍有較多癲癇患者在藥物治療后無(wú)法得到有效控制，預(yù)后情況不佳。研究表明，癲癇患者IL-10水平異常升高，IL-10水平升高與癲癇的發(fā)生有關(guān)[10]。miR-21被發(fā)現(xiàn)與自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制相關(guān),在調(diào)節(jié)自身免疫反應(yīng)中起重要作用[11]。本次研究結(jié)果顯示，預(yù)后不良組miR-21、IL-10水平均高于預(yù)后良好組，說(shuō)明miR-21、IL-10可能與癲癇患者預(yù)后不良有關(guān)。但后經(jīng)Logistic回歸分析檢驗(yàn)，miR-21、IL-10與癲癇患者預(yù)后不良無(wú)關(guān),這可能是由于其他因素產(chǎn)生的影響造成，因此，無(wú)法將其作為癲癇患者預(yù)后不良的預(yù)測(cè)指標(biāo)。

癲癇的發(fā)作與加重均與機(jī)體異常表達(dá)的凋亡分子和過(guò)度釋放的炎癥因子聯(lián)系緊密[12]。BAFF屬于腫瘤壞死因子超家族，分泌于單核細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等，與免疫系統(tǒng)功能有關(guān)，在自身免疫的發(fā)展中起著關(guān)鍵作用[13]。研究表明，BAFF可參與免疫調(diào)節(jié),而癲癇的發(fā)生發(fā)展與免疫功能障礙有關(guān)[14]。miRNA參與了癲癇的發(fā)生發(fā)展，miRNA能調(diào)控下游基因的翻譯和轉(zhuǎn)錄，改變相關(guān)蛋白含量，激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)，從而導(dǎo)致疾病的發(fā)生[15]。miR-222能節(jié)炎性因子，促進(jìn)凋亡分子活化，增加炎癥因子水平[16]。本研究通過(guò)對(duì)比不同預(yù)后情況患者入院時(shí)血清BAFF、miR-222水平后經(jīng)Logistic回歸分析檢驗(yàn)結(jié)果顯示，miR-222、BAFF與癲癇患者預(yù)后不良有關(guān),各指標(biāo)過(guò)表達(dá)可能是癲癇患者預(yù)后不良的風(fēng)險(xiǎn)因子。分析原因可能為：BAFF水平升高增加癲癇患者預(yù)后不良的風(fēng)險(xiǎn)可能是由于BAFF對(duì)人體免疫的作用，BAFF可調(diào)節(jié)T細(xì)胞主導(dǎo)的免疫反應(yīng)，刺激B細(xì)胞中重組蛋白的生成,從而調(diào)控T細(xì)胞存活，造成免疫功能紊亂，從而引起或加重神經(jīng)系統(tǒng)紊亂，從而影響癲癇患者預(yù)后結(jié)局[17,18]。研究表明，BAFF對(duì)人體的免疫調(diào)節(jié)作用可以促進(jìn)抑制性細(xì)胞因子分泌，如IL-35，起到一定的負(fù)向免疫調(diào)節(jié)作用,減輕機(jī)體炎癥反應(yīng)程度，改善癲癇患者病情，提高預(yù)后[19]。此外，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，BAFF參與癲癇的發(fā)生發(fā)展[20]。作為調(diào)節(jié)因子，miR-222可受促炎因子的誘導(dǎo)而增加分泌，并刺激炎癥因子、黏附因子表達(dá)，加重炎癥反應(yīng)[21]。miR-222對(duì)機(jī)體神經(jīng)元細(xì)胞具有傷害性，會(huì)破壞神經(jīng)元鞘膜，誘發(fā)或增加異常放電，從而影響癲癇的治療，對(duì)癲癇患者的預(yù)后產(chǎn)生負(fù)面影響[22]。

最后，本研究繪制ROC曲線圖，結(jié)果顯示，入院時(shí)血清miR-222、BAFF水平單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)癲癇患者預(yù)后不良的AUC分別為0.731、0.783、0.801，均有一定評(píng)估價(jià)值。未來(lái)臨床若監(jiān)測(cè)到上述指標(biāo)異常，應(yīng)調(diào)整癲癇治療方案，增加營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)類藥物、免疫調(diào)節(jié)類藥物治療等，以改善預(yù)后結(jié)局。但值得注意的是，miR-222、BAFF可能相互影響，共同促進(jìn)癲癇病情進(jìn)展，影響癲癇的治療和預(yù)后，但本文未分析兩者間的聯(lián)系，后續(xù)應(yīng)增加研究繼續(xù)探索。

綜上所述，癲癇患者血清miR-222、BAFF水平表達(dá)與預(yù)后不良有關(guān)，可用于癲癇患者預(yù)后結(jié)局的預(yù)測(cè)。