任金萍

(平?jīng)鍪修r(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全與檢驗(yàn)檢測中心，甘肅 平?jīng)?744000)

隨著生活水平的日益提高，人們對農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全越來越重視，為確保吃得安全、吃得放心，國家采取了一系列措施，建立了嚴(yán)格的監(jiān)管體系和追溯體系，在全國試行食用農(nóng)產(chǎn)品合格證制度、成立執(zhí)法部門，同時(shí)也頒布了相關(guān)法律法規(guī)及標(biāo)準(zhǔn)[1]，而檢驗(yàn)檢測是發(fā)現(xiàn)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全問題和隱患的重要手段，因此加強(qiáng)對初級農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留的檢測尤為重要。為不斷提高檢測的準(zhǔn)確性，各種前處理技術(shù)不斷更新與改進(jìn)，常用的農(nóng)藥殘留分析前處理技術(shù)主要有固相萃取(SPE)、固相微萃取(SPME)、凝膠滲透色譜(GPC)、微波輔助萃取(MAE)、超臨界流體萃取(SFE)等[2-5]，這些方法中有機(jī)溶劑使用量大、操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)、不環(huán)保，隨著抽檢數(shù)量和抽檢頻次的增加，已經(jīng)不適合大批量樣品的快速定量檢測。

近年來，QuEChERS前處理技術(shù)因其快速、簡單、高效、安全等優(yōu)勢，被檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)廣泛推廣應(yīng)用，常用的農(nóng)業(yè)部NY/T 761-2008方法[6]逐漸被取代，2018年國家發(fā)布了關(guān)于QuEChERS法前處理測定植物源性食品中208種農(nóng)藥及其代謝物的國家標(biāo)準(zhǔn)[7]，可見QuEChERS法越來越被重視。目前，檢測機(jī)構(gòu)及科研院校對QuEChERS法檢測蔬菜中農(nóng)藥殘留的研究很多[8-11]，主要針對前處理過程中所加的鹽、緩沖鹽、凈化成分及其比例的研究較多，但隨著技術(shù)的成熟，提取鹽包、凈化包已經(jīng)商品化，對日常例行檢測中QuEChERS法測定蔬菜中農(nóng)藥殘留的關(guān)鍵步驟報(bào)道較少。因此，本文就QuEChERS法的關(guān)鍵步驟進(jìn)行了大量試驗(yàn)研究分析，結(jié)合氣相色譜三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)，摸索出了獲得最佳回收率的農(nóng)殘前處理方法，以期為檢測工作者提供參考，獲得更有效的檢測技術(shù)與準(zhǔn)確度。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

選用番茄作為供試蔬菜，為例行檢測中未檢出樣品。

試劑耗材：提取鹽包(內(nèi)含4g硫酸鎂加1g氯化鈉加1g檸檬酸鈉加0.5g檸檬酸氫二鈉)、淺色凈化管(內(nèi)含900mg硫酸鎂加150mg PSA)、深色凈化管(內(nèi)含885mg硫酸鎂加150mg PSA加15mg GCB)、陶瓷均質(zhì)子，均購于深圳逗點(diǎn)生物公司，乙腈、乙酸乙酯均為色譜級試劑，0.2μm有機(jī)相微孔濾膜(美國安捷倫)。

儀器設(shè)備：氣相色譜三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)7890B-G7000C、水浴氮吹儀N-EVAP7M112、天平PL602E。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：殺螟硫磷、二嗪磷、甲基對硫磷、馬拉硫磷、倍硫磷、對硫磷、甲基異柳磷、丙溴磷、三唑磷、乙酰甲胺磷等10種有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品均購于農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所(天津)，濃度均為100μg·mL-1。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 儀器條件

色譜柱：HP-5MS毛細(xì)管柱(30m×0.25mm×0.25μm)；色譜柱溫度：40℃保持1min，以40℃·min-1程序升溫至120℃，以5℃·min-1升溫至240℃，以12℃·min-1升溫至300℃，保持6min；載氣：氦氣，純度≥99.999%，流速1.0mL·min-1；進(jìn)樣口溫度：280℃；進(jìn)樣量：1μL；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；電子轟擊源：70eV；離子源溫度：280℃；傳輸線溫度：280℃；溶劑延遲：3min；采用多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式。10種農(nóng)藥的保留時(shí)間、定性離子對、定量離子對見表1。

表1 10種農(nóng)藥的保留時(shí)間和質(zhì)譜條件

1.2.2 前處理方法

稱取10g供試樣品于50mL塑料離心管中，加入10mL乙腈、提取包、1粒陶瓷均質(zhì)子，蓋上離心管蓋，劇烈振蕩1min后，4200r·min-1離心5min。吸取6mL上清液加到凈化管中，渦旋混勻1min，4200r·min-1離心5min，準(zhǔn)確吸取1mL上清液于10mL具塞試管中，40℃水浴中氮?dú)獯抵羶舾?，加?mL乙酸乙酯復(fù)溶，過微孔濾膜，用于測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同添加順序下回收率比較

采用先加乙腈和先加萃取鹽包2種添加順序，分別進(jìn)行加標(biāo)(加標(biāo)量為0.1mg·kg-1，n=5)回收試驗(yàn)，見圖1。結(jié)果表明，10種有機(jī)磷農(nóng)藥在先加乙腈的順序下平均回收率為85%～101%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.7%～9.7%；在先加萃取鹽包的順序下平均回收率為66%～90%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.7%～10.6%。整體上看，10種有機(jī)磷農(nóng)藥在先加乙腈的順序下的回收率均高于先加萃取鹽包順序下的回收率，其中，殺螟硫磷、馬拉硫磷、倍硫磷、丙溴磷、乙酰甲胺磷在先加鹽包的順序下回收率較低，回收率為63%～79%。

圖1 不同加入順序下10種有機(jī)磷類農(nóng)藥加標(biāo)(0.1mg·kg-1)回收率(n=5)

2.2 加入萃取鹽包后放置時(shí)間長短的回收率比較

在先加入乙腈再加入萃取鹽包的條件下，分別測定樣品在加入鹽包后迅速震搖、加入鹽包后放置30min、加入鹽包后放置60min試驗(yàn)條件下的回收率(加標(biāo)量為0.1mg·kg-1，n=5)，結(jié)果見圖2。10種有機(jī)磷類農(nóng)藥的添加回收率在加入鹽包后迅速震搖的條件下均高于放置一段時(shí)間的回收率，隨著放置時(shí)間的延長，回收率也相應(yīng)的降低。10種有機(jī)磷類農(nóng)藥在加入鹽包后迅速震搖條件下的平均回收率為87%～99%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.0%～10.4%；在加入鹽包后放置30min條件下的平均回收率為70%～92%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.8%～16.5%；在加入鹽包后放置60min條件下的平均回收率為68%～89%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.0%～10.5%。

圖2 加入鹽包放置不同時(shí)間下10種有機(jī)磷類農(nóng)藥加標(biāo)(0.1mg·kg-1)回收率(n=5)

2.3 深淺凈化管的選擇及基質(zhì)效應(yīng)

選用不同的凈化管，10種有機(jī)磷類農(nóng)藥添加回收率結(jié)果如表2所示。2種凈化方式下10種有機(jī)磷類農(nóng)藥回收率相差不大，均在70%～120%范圍內(nèi)，深色凈化管下的精密度相對較好一些。本試驗(yàn)中回收率均用番茄基質(zhì)標(biāo)計(jì)算而得，溶劑標(biāo)計(jì)算的回收率在118%～256%，10種有機(jī)磷農(nóng)藥均表現(xiàn)為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。

表2 不同凈化管下10種有機(jī)磷類農(nóng)藥加標(biāo)(0.1mg·kg-1)回收率(n=5)

2.4 QuEChERS前處理與經(jīng)典方法NT/T 761-2008前處理方法比較

QuEChERS前處理方法與經(jīng)典方法NT/T 761-2008前處理方法比較結(jié)果見表3。QuEChERS前處理方法與NT/T 761-2008前處理相比的優(yōu)點(diǎn)是操作簡單、處理過程快、使用溶劑量少，檢測人員接觸有機(jī)試劑的時(shí)間短，安全性較高。2種前處理方法下10種有機(jī)磷農(nóng)藥回收率均在范圍內(nèi)，QuEChERS前處理方法下的精密度較經(jīng)典方法稍微差一些，但完全可以滿足例行定量檢測要求。

表3 QuEChERS前處理方法與經(jīng)典方法NT/T 761-2008前處理方法實(shí)驗(yàn)學(xué)比較

3 討論與結(jié)論

提取鹽包的加入順序，直接影響到熱不穩(wěn)定農(nóng)藥倍硫磷、殺螟硫磷、乙酰甲胺磷等的回收率，鹽包先加入與樣品直接接觸，在劇烈震蕩的過程中劇烈放熱，使得熱不穩(wěn)定類農(nóng)藥分解，回收率降低；也可能是先加鹽包，阻礙了目標(biāo)物與乙腈的充分接觸而使回收率降低[12]。通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用QuEChERS前處理方法時(shí)必須先加入乙腈，可以輔助超聲提取，再加入萃取鹽包進(jìn)行震搖提取。

加入萃取鹽包后，應(yīng)該盡快震蕩搖動(dòng)，因萃取鹽包中含有無水硫酸鎂，用于除去樣品基質(zhì)中的水分，放置時(shí)間越久，可能導(dǎo)致水相和有機(jī)相過早分離，或者未充分振搖，使乙腈和水分離不完全，造成部分溶于水的極性農(nóng)藥回收率降低。因此，在檢測過程中建議邊加樣品邊震蕩，不能將樣品統(tǒng)一加完后再震蕩，以確保定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。

樣品凈化也是影響結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵因素，針對不同的樣品和測定項(xiàng)目，需要選擇不同的凈化包，深色凈化管中多出15mg石墨化碳黑(GCB)，用于除去樣品中的色素，但同時(shí)也吸附平面結(jié)構(gòu)農(nóng)藥，導(dǎo)致回收率不高[13]。本試驗(yàn)中測定項(xiàng)目均為有機(jī)磷類農(nóng)藥，不含芳香環(huán)平面結(jié)構(gòu)，在深淺凈化管下的回收率均在范圍內(nèi)，若檢測深色樣品，且基質(zhì)較復(fù)雜的樣品，結(jié)合檢測項(xiàng)目，建議選擇深色凈化管。

QuEChERS前處理方法與經(jīng)典方法NT/T 761-2008前處理方法相比，均有基質(zhì)效應(yīng)，因此在定量時(shí)一定要配制相對應(yīng)蔬菜或者同一類蔬菜的基質(zhì)標(biāo)，確保定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。QuEChERS前處理方法對樣品的均勻細(xì)致程度要求高一些，在樣品制備時(shí)要盡可能細(xì)致、勻稱。本試驗(yàn)探討了QuEChERS法測定蔬菜中農(nóng)藥殘留的關(guān)鍵步驟，參照本方法，把握住影響回收率的關(guān)鍵步驟，即可滿足日常例行定量檢測，隨著千人批次抽檢量的增加，相比傳統(tǒng)檢測方法，QuEChERS法操作簡單、易掌握、安全、效率高，在基層質(zhì)檢機(jī)構(gòu)可以廣泛推廣使用。