吳文欽，熊戌霞，蔡夢珊

（中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院檢驗科，廣東 廣州 510000）

地中海貧血（thalassemia）是常見的單基因遺傳性、一組常染色體不完全顯性遺傳性疾病[1]，是由珠蛋白基因缺失或突變引起的珠蛋白肽鏈合成失平衡，導(dǎo)致血紅蛋白中至少有一種珠蛋白合成缺乏或不足，引起貧血或溶血性疾病。依據(jù)珠蛋白鏈缺乏的種類進(jìn)行命名和分類，將其分為α、β、δ、γ、δβ、γδβ 等6 種類型，以α-地中海貧血和β-地中海貧血分布最廣同時也最為常見[2，3]。按珠蛋白鏈減少的程度分為完全無生成的α0、β0珠蛋白生成障礙性貧血，部分生成的α+、β+珠蛋白生成障礙性貧血。目前可通過加強孕前篩查和產(chǎn)前診斷等相關(guān)手段來防止重癥地中海貧血患兒的出生，但醫(yī)學(xué)上還沒有理想的治愈方法，所以加強地中海貧血相關(guān)知識的宣傳，加強育齡人群開展地中海貧血篩查和產(chǎn)前診斷尤為重要[4]。據(jù)報告[5]，地中海貧血在我國南方各省是高發(fā)地區(qū)，尤其是兩廣地區(qū)以及海南省發(fā)病率最高。深圳作為全國性經(jīng)濟中心和國際化城市，人口流動性大，外來人口占絕大多數(shù)，不同人群之間通婚導(dǎo)致該地區(qū)地中海貧血基因類型逐漸多元化。本研究通過對深圳市龍華區(qū)地區(qū)α 與β 地中海貧血基因突變類型基因分型情況的分析討論，從而為本地區(qū)地中海貧血宣傳、遺傳咨詢、孕前篩查以及產(chǎn)前診斷提供理論依據(jù)和相關(guān)指導(dǎo)，報道如下。

1 資料與辦法

1.1 一般資料 收集2017 年1 月～2019 年12 月到深圳市龍華區(qū)人民醫(yī)院進(jìn)行地中海貧血篩查人群共12,898 例，其中男性5982 例，女性6916 例，年齡19～40 歲，平均年齡（27.47±6.54）歲。

1.2 方法

1.2.1 血細(xì)胞分析 采用日本希森美康（SYSMEX）XS-1000i 血液分析儀檢測血常規(guī)參數(shù)，MCV＜80 fl和/或MCH＜27 pg，為地中海貧初篩陽性指標(biāo)。

1.2.2 血紅蛋白電泳分析 采用法國西比亞（SEBIA）高壓液相毛細(xì)血管電泳儀進(jìn)行血紅蛋白電泳分析，HbA2≤2.5%，懷疑為α-地中海貧血基因攜帶者，進(jìn)行α-地中海貧血基因診斷；HbA2≥3.5%，HbF 正?；蛘咴龈?，懷疑為β-地中海貧血基因攜帶者，進(jìn)行β-地中海貧血基因診斷。

1.2.3 初步篩查地中海貧血陽性判斷標(biāo)準(zhǔn) 對MCV＜80 fl 和/或MCH＜27 pg 的標(biāo)本進(jìn)行地中海貧血初篩，若HbA2 和HbF 結(jié)果中有一項或兩項異常者均判為地中海貧血初篩陽性。

1.2.4 地中海貧血基因診斷 分為檢測缺失型α-地中海貧血和突變β-地中海貧血基因型的方法。α-地中海貧血采用跨越斷裂點技術(shù)（Gap-PCR），檢測中國人群已知的三種α-地中海貧血常見缺失型突變：--SEA、-α4.2、-α3.7。采用PCR-膜反向點雜交技術(shù)（RDB-PCR）檢測β-地中海貧血常見17 種基因位點突變，即CD41-42、IVS-II-654、CD71-72、-28、CD17、βE、CD31、CD43、-32、-29、-30、CD27/28、IVS1-1、CD14-15、IVS1-5、CAP、lnt。所有表型陽性標(biāo)本均送至廣州金域檢驗醫(yī)學(xué)中心檢測完成，并對地中海貧血基因分型情況進(jìn)行回顧性分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血液篩查結(jié)果 12,898 例篩查對象經(jīng)血液學(xué)常規(guī)初篩疑似地中海貧血3126 例，初篩陽性率為24.23%（3126/12,898），經(jīng)地中海貧血基因確診905例，地中海貧血基因檢出率為7.02%（905/12,898），其中α-地中海貧血547 例，檢出率為4.24%（547/12,898），β-地中海貧血324 例，檢出率為2.51%（324/12,898），αβ 復(fù)合型地中海貧血34 例，檢出率為0.26%（34/12,898）。

2.2 地中海貧血基因診斷結(jié)果

2.2.1 α-地中海貧血基因突變類型分析 α-地中海貧血檢出7 種基因型，包括--SEA/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα、-α3.7/--SEA、-α4.2/--SEA、-α3.7/-α4.2和-α3.7/-α3.7，其中--SEA/αα 所占比例最高，其次為-α3.7/αα 和-α4.2/αα，且--SEA/αα 基因型陽性率高于其它基因突變型，不同基因缺失型構(gòu)成比間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 α-地中海貧血基因突變類型及其構(gòu)成比（n，%）

2.2.2 β-地中海貧血基因突變類型分析 β-地中海貧血共檢出12 種突變，13 種基因型，均為雜合子，突變類型主要以CD41-42 單突變雜合子為主，其次為IVS-II-654 雜合子，CD41-42 基因突變檢出率高于其它基因突變型，不同基因突變類型檢出率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 β-地中海貧血基因突變類型及其構(gòu)成比（n，%）

2.2.3 αβ 復(fù)合型地中海貧血基因突變類型分析 αβ復(fù)合型地中海貧血共檢出17 種基因型，以--SEA/αα/CD41-42、--SEA/αα/IVS-II-654 聯(lián)合突變?yōu)橹鳎硗膺€檢出兩種罕見型--SEA/αα/βE、--SEA/αα/βE，CD41-42，αβ 復(fù)合型地中海貧血基因突變類型及其構(gòu)成比見表3。

表3 αβ 復(fù)合型地中海貧血基因突變類型及其構(gòu)成比（n，%）

3 討論

根據(jù)α 珠蛋白的異常情況，臨床上可分為四種類型：1 個α 基因異常，稱為α-地中海貧血靜止型，基因型為αα/α-，患者平時無癥狀，無異常血象的改變；2 個α 基因異常，稱為α-地中海貧血標(biāo)準(zhǔn)型，基因型為α-/α-，患者平常無明顯癥狀或輕度貧血，血象為紅細(xì)胞呈低色素小細(xì)胞；3 個α 基因異常，基因型為α-/--，稱為HbH 病，患者表現(xiàn)有代償性溶血性貧血癥狀，血象呈現(xiàn)小細(xì)胞低色素改變，血紅蛋白電泳出現(xiàn)HbH 和Barts 帶，大部分細(xì)胞中出現(xiàn)HbH包涵體；4 個α 基因異常，基因型為--/--，稱為胎兒水腫綜合征（hydrops fetalis syndrome），亦稱Hb Barts 病，此類胎兒多死于宮內(nèi)，或出生后數(shù)小時內(nèi)死亡。α-地中海貧血缺失型是我國主要類型，東南亞缺失型（--SEA）、左側(cè)缺失（-α4.2）和右側(cè)缺失（-α3.7）是我國最常見的α-地中海貧血缺失類型[6]。本研究共檢出疑是地中海貧血3126 例，地中海貧血基因確診905 例，地中海貧血篩查陽性率為24.23%，基因診斷地中海貧血攜帶率為7.02%。在905 例地中海貧血患者中，α-地中海貧血547 例，α-地中海貧血攜帶率為4.24%，其中東南亞缺失型（--SEA）353 例，右側(cè)缺失（-α3.7）112 例，左側(cè)缺失（-α4.2）45 例，缺失型HbH ?。?-SEA/α3.7）18 例，缺失型HbH ?。?-SEA/α4.2）9 例，右、左側(cè)缺失α 雙雜合子（-α3.7/-α4.2）6 例，右側(cè)缺失α 純合子4 例。表明該地區(qū)α-地中海貧血人群中以東南亞缺失型為主，占α-地中海貧血的64.53%，因而該地區(qū)育齡人群在進(jìn)行相關(guān)婚前檢查、孕前篩查以及產(chǎn)前診斷時，可將α-地中海貧血的東南亞缺失型（--SEA/αα）作為孕檢、產(chǎn)檢等優(yōu)生優(yōu)育措施的重點監(jiān)控對象。

β-地中海貧血患兒出生時一般無明顯癥狀，多在嬰兒時期發(fā)病，依據(jù)珠蛋白鏈合成受抑制情況，臨床上可分四型：重型、中間型、輕型和遺傳性胎兒Hb持續(xù)增多癥。重型患者往往是β 地中海貧血基因純合子或雙重雜合子，即兩個β 基因都發(fā)生突變。本研究共檢出β-地中海貧血324 例，β 地中海貧血攜帶率為2.51%，共檢出12 種突變，13 種基因型，CD41-42 雜合子115 例、IVS-II-654 雜合子80 例、-28 雜合子49 例、CD17 雜合子25 例，共占β-地中海貧血的83.02%。因而可將CD41-42 突變、IVS-II-654 突變、CD17 突變、-28 突變這4 種突變類型作為該地區(qū)育齡人群β-地中海貧血孕前篩查和產(chǎn)前診斷的重點監(jiān)控對象。目前在醫(yī)學(xué)上，地中海貧血尚無理想的治愈性手段，提倡育齡夫婦把地中海貧血作為孕前常規(guī)檢測以主動發(fā)現(xiàn)陽性病例，防止純合子患兒出生。另外，本研究還發(fā)現(xiàn)少數(shù)αβ 復(fù)合型地中海貧血34 例，檢出率為0.26%，占地中海貧血的3.76%，共檢出17 種基因型，以--SEA/αα/CD41-42、--SEA/αα/IVS-Ⅱ-654 聯(lián)合突變?yōu)橹?。這表明在深圳市龍華區(qū)地中海貧血有一定的發(fā)病率，地中海貧血基因突變類型多樣且復(fù)雜，應(yīng)加強孕前檢查以及產(chǎn)前診斷，做到優(yōu)生優(yōu)育。

綜上所述，深圳市龍華區(qū)α、β 地中海貧血基因構(gòu)成基本符合廣東省地中海貧血基因分布特點，應(yīng)對該地區(qū)育齡人群開展地中海貧血相關(guān)知識宣傳、加強孕前篩查以及產(chǎn)前診斷，促進(jìn)優(yōu)生優(yōu)育。