李 玲，宋洪杰，丁德英，舒麗芯 （海軍軍醫(yī)大學(xué)：. 藥學(xué)院, . 長海醫(yī)院藥材科，上海 200433）

近年來，我國海軍大力加強(qiáng)實(shí)戰(zhàn)化軍事訓(xùn)練，不斷提高軍事應(yīng)對能力和應(yīng)急突擊能力，高新技術(shù)條件下的未來海上作戰(zhàn)對藥材保障的要求越來越高，藥材保障是影響救治的主要因素之一[1]。海上高溫、高濕、高鹽環(huán)境對藥品的運(yùn)輸、儲存和使用提出了新的考驗(yàn)。磺胺嘧啶銀乳膏為磺胺類抗菌藥，臨床常用于預(yù)防和治療輕度燒傷繼發(fā)創(chuàng)面感染等，是一種療效好、應(yīng)用廣泛的外用抗菌藥物。藥物制劑的含量符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)是保障藥物療效的重要指標(biāo)之一。目前，磺胺嘧啶銀乳膏含量測定的方法多種多樣，《中國藥典（二部）》2015 年版采用的是永停滴定法[2]，《中國醫(yī)院制劑規(guī)范》（第二版）則采用硫氰酸銨滴定法[3]，而《美國藥典》采用HPLC法測定磺胺嘧啶銀的含量[4]。用滴定法測定含量時(shí)容易受到基質(zhì)的干擾，影響終點(diǎn)的判斷，《美國藥典》方法的供試品前處理煩瑣。根據(jù)已報(bào)道的文獻(xiàn)資料[5-6]，本研究對磺胺嘧啶銀乳膏含量測定方法進(jìn)行優(yōu)化，建立了反相HPLC 測定磺胺嘧啶銀乳膏中該成分含量的方法，并首次采用復(fù)合式鹽霧試驗(yàn)箱模擬海洋高溫、高濕、高鹽環(huán)境，考察了磺胺嘧啶銀乳膏在極端環(huán)境下的穩(wěn)定性，為特殊環(huán)境下的藥品質(zhì)量研究提供方法借鑒，并為優(yōu)化遠(yuǎn)海作戰(zhàn)藥材保障提供數(shù)據(jù)支持。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20A 高效液相色譜儀，包括LC-20AT 紫外檢測器和Labsolution 工作站（日本島津公司）METTLER AE240 型電子天平（瑞士梅特勒公司），ZH-AYSH-90 復(fù)合式鹽霧試驗(yàn)箱 (香港正航儀器設(shè)備有限公司)。

1.2 試藥

對照品：磺胺嘧啶銀(USP，批號：RO3500，純度99.9%)，磺胺嘧啶銀乳膏(海軍軍醫(yī)大學(xué)附屬長海醫(yī)院，規(guī)格：1%，批號：20191207、20191208、20191209)，乙腈為色譜純，氨水為分析純，磷酸為優(yōu)級純(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，實(shí)驗(yàn)用水為娃哈哈純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸 (8∶92，V/V)，流速1.0 ml/min，進(jìn)樣量10 μl，柱溫30℃，檢測波長254 nm。

2.2 對照品溶液的制備

取磺胺嘧啶銀對照品10 mg，精密稱定，置50 ml 棕色量瓶中，加入10%氨水溶液溶解稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液(0.2 mg/ml)，精密量取對照品儲備液0.5 ml 置10 ml 量瓶中，加10%氨水溶液稀釋至刻度，搖勻，即得磺胺嘧啶銀對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

將磺胺嘧啶銀乳膏置于復(fù)合式鹽霧試驗(yàn)箱中，溫度50℃，濕度90%，鹽度5%氯化鈉[7-8]，分別放置0、2、4、6、8、10、12 周取樣測定。

精密稱定磺胺嘧啶銀乳膏1 g，置于50 ml 棕色量瓶中，加入10%氨水溶液適量，超聲20 min，使乳膏充分溶解并稀釋至刻度，過濾，取續(xù)濾液0.5 ml，置于10 ml 量瓶，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即為供試品溶液。

2.4 陰性樣品溶液的制備

根據(jù)磺胺嘧啶銀乳膏處方制備不含磺胺嘧啶銀的空白乳膏劑，按照“2.3”項(xiàng)下制備方法制成陰性樣品溶液。

2.5 專屬性試驗(yàn)

分別取陰性樣品溶液、對照品溶液及供試品溶液各10 μl，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果如圖1 所示，供試品溶液在與對照品溶液對應(yīng)位置出現(xiàn)相對應(yīng)的色譜峰，陰性樣品溶液無干擾，方法專屬性良好。

圖1 專屬性考察典型色譜圖

2.6 線性及范圍

精密量取對照品儲備液適量置于10 ml 棕色量瓶中，用10%氨水稀釋，依次配制成濃度分別為4.00、8.00、10.00、12.00、16.00、20.00 μg/ml 的對照品溶液，作為線性工作溶液。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣10 μl，以磺胺嘧啶銀的濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程：Y=22 808X?1 858，r=0.999 9，結(jié)果表明，磺胺嘧啶銀在4.00～20.00 μg/ml 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn)

取對照品溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件在1 d 內(nèi)進(jìn)樣6次，以及連續(xù)3d 分別進(jìn)樣，測定磺胺嘧啶銀峰面積，結(jié)果顯示，日內(nèi)精密度RSD 為0.33%，日間精密度RSD 為0.97%，表明儀器的精密度良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(20191208)樣品1 g，共6 份，精密稱定，按照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別測定，結(jié)果顯示，磺胺嘧啶銀平均含量為95.27%，RSD 為1.07% (n=6)，表明方法的重復(fù)性良好。

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，室溫下分別放置0、2、4、8、12、24 h 后分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，考察溶液的穩(wěn)定性，測定結(jié)果的RSD 為0.97%，表明供試品溶液至少在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.10 回收率試驗(yàn)

精密稱取磺胺嘧啶銀乳膏空白基質(zhì)6 份，各1 g，置于50 ml 量瓶中，分別加入磺胺嘧啶銀對照品10 mg，再加入10%氨水溶液適量，超聲后按“2.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行制備并測定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為101.47%，RSD 為2.33% (n=6)。

2.11 耐用性考察

考察包括色譜柱（Agilent ZORBAX SB-C18：4.6 mm×150 mm，5 μm，Agilent EXTEND-C18：4.6 mm×250 mm，5 μm），柱溫（28、30、32℃），流速（0.9、1.0、1.1ml／min）3 個(gè)因素對試驗(yàn)結(jié)果的影響，結(jié)果顯示，磺胺嘧啶銀峰面積的 RSD 均<10%，其中，微調(diào)流速對保留時(shí)間和峰面積的影響較大，但主成分與降解后出現(xiàn)的新雜質(zhì)分離度良好，不影響含量測定結(jié)果，如圖2 所示，表明該方法具有良好的耐用性。

圖2 耐用性考察流速對分離的影響

2.12 含量測定

分別取3 個(gè)批次的樣品，按照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，用“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，記錄峰面積，按外標(biāo)法分別計(jì)算磺胺嘧啶銀的含量，結(jié)果如表1 所示。

表1 不同存儲時(shí)間樣品中磺胺嘧啶銀的含量變化測定結(jié)果(按標(biāo)示量計(jì)算/%)

3 討論

磺胺嘧啶銀是難溶的兩性藥物，只能在硝酸、氨水等少數(shù)溶劑中溶解[9]。本研究采用10%氨水溶解磺胺嘧啶銀，并用50℃超聲處理，使基質(zhì)分散，冷卻至室溫后，定容，靜置20 min，過濾，再用流動(dòng)相稀釋，HPLC 測定磺胺嘧啶銀的含量，并進(jìn)行了完整的方法學(xué)考察，符合藥典規(guī)定的各項(xiàng)要求。與《美國藥典》的樣品前處理方法相比，該方法操作簡單、容易過濾、重復(fù)性良好。

乳膏劑常規(guī)應(yīng)保存在陰涼干燥處，然而，遠(yuǎn)海作戰(zhàn)環(huán)境特殊，高溫、高濕、高鹽是其主要特征，例如，擔(dān)負(fù)海上救護(hù)任務(wù)的醫(yī)院船，船艙多為密閉空間，艙內(nèi)溫度高，不利于藥品的長期保存[10]。在如此特殊的環(huán)境下，藥品是否能在其擬定的保質(zhì)期內(nèi)保持質(zhì)量的穩(wěn)定性，如何確定或延長藥品在極端環(huán)境下的保質(zhì)期是值得深入研究的課題。本研究首次采用復(fù)合式鹽霧試驗(yàn)箱模擬高溫、高濕、高鹽環(huán)境，考察磺胺嘧啶銀乳膏的穩(wěn)定性，結(jié)果顯示，在此極端環(huán)境下，磺胺嘧啶銀乳膏在1 個(gè)月內(nèi)，其性狀、pH 值、粒度和含量沒有發(fā)生顯著變化，2 個(gè)月以后，乳膏由白色轉(zhuǎn)為褐色，明顯呈水樣狀，有較大的塊狀凝結(jié)，含量下降超過30%，結(jié)果表明磺胺嘧啶銀乳膏在溫高、濕高、鹽環(huán)境下不穩(wěn)定，在其運(yùn)輸、儲存和使用過程中應(yīng)充分考慮環(huán)境的影響，對于長遠(yuǎn)航任務(wù)應(yīng)考慮對該制劑的外包裝加以防護(hù)措施，或更換同類型的其他品種。本研究可為極端環(huán)境下的藥品穩(wěn)定性研究方法的開發(fā)和運(yùn)用提供參考。