王 鋼， 周孟茹， 李平順， 馬鵬程

(1.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院風(fēng)濕骨病科，蘭州 730000；2.蘭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，蘭州 730000；3.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，蘭州 730000)

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種以進(jìn)行性軟骨破壞和骨侵蝕為特征的慢性疾病[1]。骨破壞或骨量丟失是RA的嚴(yán)重并發(fā)癥，主要在于成骨細(xì)胞(osteoblast，OB)與破骨細(xì)胞(osteoclast，OC)關(guān)系失衡、OC的數(shù)量及功能亢進(jìn)導(dǎo)致[2-3]。隨著分子生物學(xué)發(fā)展，Wnt/β-catenin信號(hào)通路在RA性骨病干預(yù)中的核心作用得到公認(rèn)，其對(duì)OB分化、生長(zhǎng)、凋亡及功能表達(dá)具有重要意義。目前體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均證明，中醫(yī)藥可通過上調(diào)Wnt蛋白、β-catenin等關(guān)鍵性因子激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，進(jìn)一步活化骨形成關(guān)鍵核因子Rnux2，促進(jìn)OB分化，達(dá)到干預(yù)骨病目的?，F(xiàn)將中醫(yī)藥通過Wnt/β-catenin信號(hào)通路干預(yù)RA性骨病的機(jī)制研究及其最新進(jìn)展作如下述評(píng)。

1 RA性骨病的實(shí)質(zhì)

《中西匯通醫(yī)經(jīng)精義》曰:“腎藏精，精生髓，髓養(yǎng)骨，故骨者，腎之合也。髓者，發(fā)精所生，精足則髓足，髓在骨中，髓足則骨強(qiáng)。[4]”腎之精氣盛衰，直接影響骨的功能與形態(tài)。痹證者臟腑功能失調(diào)、氣血陰陽失衡，直接或間接影響骨的生長(zhǎng)代謝而致骨病。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中RA疾病特征是關(guān)節(jié)滑膜炎和血管翳的形成，可因免疫紊亂或遺傳等因素使成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞(FLS)活化、增殖并產(chǎn)生細(xì)胞因子和炎癥趨化因子(如IL-1、IL-6、IL-17等)，導(dǎo)致OC異常激活和OB分化受抑，OC與OB關(guān)系失衡，骨侵蝕大于骨重塑，就會(huì)出現(xiàn)骨質(zhì)破壞、骨質(zhì)疏松等病理損傷[5]。因此，諸多學(xué)者通過RANKL-RANK-OPG信號(hào)通路、Wnt/β-catenin信號(hào)通路、Wnt/Ca+2信號(hào)通路、BMP信號(hào)通路等調(diào)控骨細(xì)胞分化進(jìn)程對(duì)RA性骨病針對(duì)性防治，并取得理想效果，其中研究較多的是Wnt/β-catenin信號(hào)通路[6]。

2 Wnt/β-catenin信號(hào)通路的調(diào)控機(jī)理

圖1示，Wnt信號(hào)通路于1982年由Nusse等首次報(bào)道，其包括依賴β-catenin的經(jīng)典通路與不依賴β-catenin的非經(jīng)典通路。Wnt/β-catenin信號(hào)通路又稱Wnt經(jīng)典信號(hào)通路，主要通過Wnt蛋白家族、β-catenin等[7]關(guān)鍵性因子激活Runx2等基因轉(zhuǎn)錄，參與胚胎發(fā)育期多種重要細(xì)胞生長(zhǎng)進(jìn)程的調(diào)控及器官的發(fā)育，尤其對(duì)OB的生長(zhǎng)、分化與凋亡和骨形成具有重要意義。因此，β-catenin的磷酸化/穩(wěn)定積累并精準(zhǔn)入核是Wnt/β-catenin信號(hào)通路持續(xù)活化的基礎(chǔ)[8]。

圖1 Wnt/β-catenin信號(hào)通路圖像[13]

Wnt/β-catenin信號(hào)通路由Wnt蛋白家族、膜受體、胞質(zhì)復(fù)合物、核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子、信號(hào)通路抑制劑、下游調(diào)控因子等大分子復(fù)合物組成，實(shí)現(xiàn)了由胞外到核內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)，啟動(dòng)骨細(xì)胞靶基因轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)成骨分化。當(dāng)胞外的Wnt蛋白與膜受體(由低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白(LRP)5，6和卷曲蛋白(Fz)家族組成)結(jié)合，活化散亂蛋白(Dvl)通過與Axin的直接作用，誘導(dǎo)胞質(zhì)復(fù)合物(APC、Axin、GSK-3β、β-catenin)降解，抑制GSK-3β活性，減少β-catenin的磷酸化并使其在胞內(nèi)穩(wěn)定積累且精準(zhǔn)入核，與轉(zhuǎn)錄因子(TCF/LEF)結(jié)合，調(diào)節(jié)靶基因(Runx2、Cbfa1等)的表達(dá)[9]。當(dāng)胞外缺乏Wnt蛋白，β-catenin與Axin、APC、GSK3等形成降解復(fù)合物，促進(jìn)β-catenin磷酸化，被E3泛素連接酶降解[10]。另外Wnt/β-catenin信號(hào)通路中還存在一些重要的負(fù)向調(diào)節(jié)因子，如抑制因子Dickkopf 1(DKK1)、硬化蛋白(sclerostin，SOST)和分泌型Fz相關(guān)蛋白(sFRP)等[11]。DKK1主要與LRP5結(jié)合進(jìn)而抑制和降解胞內(nèi)的四聚體；SOST可與Wnt蛋白競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合LRP5，從而抑制其通路激活；sFRP可與Wnt蛋白形成穩(wěn)定復(fù)合物，阻止其與膜受體結(jié)合[12]。

3 與RA性骨病干預(yù)相關(guān)的OB

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有多向分化的能力，在一定條件誘導(dǎo)下可分化為OB、軟骨細(xì)胞等。OB是骨重塑的主要功能細(xì)胞，負(fù)責(zé)骨基質(zhì)的合成、分泌和礦化；堿性磷酸酶(ALP)與礦化結(jié)節(jié)可作為OB分化成熟的特征指標(biāo)之一[14]。國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，Wnt/β-catenin信號(hào)通路在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化過程中扮演著重要角色，而Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制結(jié)果主要在OC與OB、FLS中表現(xiàn)明顯，導(dǎo)致OB分化受抑和凋亡程序啟動(dòng)，繼發(fā)OC異?；罨龠M(jìn)骨質(zhì)侵蝕和骨質(zhì)疏松的發(fā)生發(fā)展[15]。

淫羊藿、骨碎補(bǔ)是臨床治療RA性骨病最為常用的單味中藥。大量文獻(xiàn)報(bào)道，淫羊藿及其活性成分淫羊藿苷可從基因、細(xì)胞分子等多水平影響OB的增殖分化，提高ALP活性，抑制凋亡，增強(qiáng)生物學(xué)功能[16]。郭英等[17]發(fā)現(xiàn)，骨碎補(bǔ)總黃酮可通過調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路促進(jìn)大鼠BMSCs向OB分化。另有研究證明，中藥復(fù)方補(bǔ)腎活血顆粒含藥血清能顯著提高OB中ALP的活性，增加礦化結(jié)節(jié)數(shù)量[18]。壯骨止痛方(淫羊藿、補(bǔ)骨脂、狗脊、川牛膝等組成)[19]與清熱活血方[20]均可激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)OB分化與成熟，調(diào)節(jié)OB和OC平衡，發(fā)揮骨保護(hù)作用，以減輕CIA大鼠骨質(zhì)破壞。

4 與RA性骨病干預(yù)相關(guān)的OC

OB及骨髓基質(zhì)細(xì)胞表面可表達(dá)核因子κB受體活化因子配體(receptor activator of nuclear factor-κB ligand，RANKL)和骨保護(hù)素(osteoprotegerin，OPG)。RANKL首先激活OC前體細(xì)胞(OCPs)表面的核因子κB受體活化因子(receptor activator of nuclear factor-κB，RANK)受體并與之結(jié)合，從而將信號(hào)傳給胞內(nèi)，然后進(jìn)一步級(jí)聯(lián)激活下游各種由蛋白激酶介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑以誘導(dǎo)OC的形成、分化，增強(qiáng)骨吸收。OPG和RANK競(jìng)爭(zhēng)性地與RANKL結(jié)合，減少RANK與RANKL結(jié)合，抑制OC分化成熟，誘導(dǎo)OC凋亡[21]。

根據(jù)腎主骨生髓理論，在RA性骨病的臨床治療中應(yīng)用了大量補(bǔ)腎中藥，部分研究[22]證實(shí)這一理論的正確性。補(bǔ)腎中藥對(duì)骨細(xì)胞有正向調(diào)節(jié)作用，促進(jìn)OB分化，同時(shí)抑制OC活化、增殖并啟動(dòng)凋亡程序，既可修復(fù)骨質(zhì)又減輕骨質(zhì)破壞。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，槲皮苷[23]、雷公藤甲素[24]、(5R)-5-羥基雷公藤內(nèi)酯醇[25]均能抑制RANKL-RANK-OPG信號(hào)通路，降低RANKL/RANK/OPG比值，從而在RA治療中發(fā)揮抑制OC生成和骨破壞緩解關(guān)節(jié)炎癥作用。有研究表明，斷藤益母湯對(duì)RA的骨破壞具有抑制作用，其機(jī)制之一可能是通過影響Wnt信號(hào)通路相關(guān)蛋白及DDK1蛋白表達(dá)，激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，從而抑制OC的分化與增殖[26]。

5 與RA性骨病干預(yù)相關(guān)的Wnt蛋白家族

Wnt蛋白家族由19種分泌性糖蛋白組成，其結(jié)構(gòu)富含半胱氨酸，與棕櫚酸酯形成難溶于水的共價(jià)化合物游離于胞外，在骨細(xì)胞分化與骨重建過程中發(fā)揮生物學(xué)作用。研究表明，Wntl、Wnt7b、Wnt10b等可影響OPG表達(dá)或OPGmRNA轉(zhuǎn)錄以促進(jìn)成骨分化；而Wnt3a、Wnt4、Wnt5a和Wnt16等通過調(diào)控RANKL/OPG比率穩(wěn)定骨細(xì)胞平衡關(guān)系[27]。Wnt/β-catenin信號(hào)通路Wnt蛋白配體主要包括wntl、wnt3、wnt3a、wnt7b、wnt8等[28]。Wntl可促進(jìn)OB的分化和成熟并防止細(xì)胞的凋亡，主要機(jī)制是Wntl與膜受體結(jié)合，激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，增加β-catenin有效濃度，上調(diào)骨重塑相關(guān)基因Runx2及下游因子的表達(dá)水平，促進(jìn)OB的分化、成熟；Wntl可抑制OB與骨細(xì)胞程序性凋亡，增加OB的數(shù)量與活性[29]。Wnt3通過激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)OB的增殖、分化和成熟，同時(shí)也能活化非經(jīng)典Wnt/JNK信號(hào)通路，抑制OC的數(shù)量與功能[30]；Wnt3a刺激Wnt/β-catenin信號(hào)通路上調(diào)OB的OPG表達(dá)，競(jìng)爭(zhēng)性地抑制RANKL與RANK結(jié)合，抑制OCPs的分化[31]。

目前對(duì)于中醫(yī)藥直接調(diào)節(jié)Wnt1、wnt8蛋白干預(yù)RA性骨病的研究較少，主要是集中于其下游因子β-catenin蛋白，而通過調(diào)節(jié)Wnt3、wnt3a、wnt7b 蛋白干預(yù)骨病的研究比較熱門。研究報(bào)道，維藥買朱尼[32]可減少炎性細(xì)胞趨化因子，抑制炎性細(xì)胞聚集與活化，同時(shí)上調(diào)Wnt3a、β-catenin的表達(dá)，抑制OC功能。鞠大宏等[33]認(rèn)為，激素性O(shè)P主要因OB中Wnt3a等蛋白和其mRNA的表達(dá)下調(diào)導(dǎo)致，左歸丸能通過上調(diào)Wnt3a及其mRNA的表達(dá)防治骨病。秦夢(mèng)等[34]研究發(fā)現(xiàn)，右歸丸也可上調(diào)Wnt3a、wnt7b 蛋白表達(dá)水平，促進(jìn)OB的增殖、礦化及抑制OC活性，起到干預(yù)骨病作用。

6 與RA性骨病干預(yù)相關(guān)的膜受體

膜受體由低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5/6(LRP5/6)和卷曲蛋白(Fz)組成。LRP5/6屬于LRP家族成員，為單次跨膜蛋白，其中LRP5為輔助受體[35]。通過與Wnt-Fz復(fù)合物的脂質(zhì)成分結(jié)合，啟動(dòng)Wnt/β-catenin信號(hào)通路；Fz是細(xì)胞表面特異性跨膜蛋白，N端富含半胱氨酸能與Wnt蛋白特異性結(jié)合[36]，胞內(nèi)與蓬亂蛋白作用，穩(wěn)定胞質(zhì)復(fù)合物，抑制β-catenin降解，與LRP5/6共同作用完成信號(hào)傳導(dǎo)。

劉梅潔[37]等在骨質(zhì)疏松機(jī)制研究中表明，激素可降低OB中Wnt3a、LRP-6、β-atenin和其mRNA的表達(dá)，而滋補(bǔ)腎陰法的代表方左歸丸，可上調(diào)LRP-6等信號(hào)通路活化關(guān)鍵因子的表達(dá)以防治OP。許應(yīng)星等[18]研究表明，補(bǔ)腎活血顆粒含藥血清能顯著增加OB中ALP、LRP5的表達(dá)，并促進(jìn)礦化結(jié)節(jié)的形成。另外研究顯示，牛膝多肽[38]、補(bǔ)骨脂素[39]、龍須藤多肽[40]能上調(diào)Fz，從而激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路。

7 與RA性骨病干預(yù)相關(guān)的胞質(zhì)復(fù)合物

胞質(zhì)復(fù)合物是由Axin、APC、GSK-3β、β-catenin組成的四聚體。Axin是中心分子，N端RSG區(qū)域、C端DIX區(qū)域分別與APC、散亂蛋白特異性結(jié)合，中間包裹β-catenin形成胞質(zhì)復(fù)合物。當(dāng)Wnt蛋白與膜受體結(jié)合后，通過與散亂蛋白作用，Axin被征募到細(xì)胞膜，與LRP5輔助受體結(jié)合抑制GSK-3β活性，β-catenin釋放入核完成信號(hào)傳導(dǎo)[41]。糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β，GSK-3β)是一種絲氨酸(S)/蘇氨酸(T)激酶，通過磷酸化β-catenin末端的3個(gè)絲氨酸/蘇氨酸(S33、S37、T41)，促進(jìn)β-catenin被特定的泛素酶系統(tǒng)識(shí)別而被降解[42]。β-catenin是一類在Wnt/β-catenin信號(hào)通路中發(fā)揮樞紐作用的多功能蛋白，大量實(shí)驗(yàn)證明，β-catenin是影響Runx2基因轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵因素，低濃度β-catenin可抑制間質(zhì)細(xì)胞Runx2基因的表達(dá)，從而抑制間質(zhì)細(xì)胞的成骨分化；若β-catenin基因缺失，導(dǎo)致RANKL/RANK/OPG失衡及相關(guān)受體功能改變，會(huì)影響OC的生成[43]。

GSK-3β、β-catenin蛋白活性與濃度是Wnt/β-catenin信號(hào)通路激活的關(guān)鍵因素。有研究報(bào)道，黃連小檗堿[44]對(duì)GSK-3β水平有明顯的調(diào)節(jié)作用；黃芩苷[45]、牛膝多肽[38]、補(bǔ)骨脂素[39]、龍須藤多肽[40]可上調(diào)β-catenin，促進(jìn)GSK-3β磷酸化，保證β-catenin入核傳遞信號(hào)，激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，從而促進(jìn)骨質(zhì)修復(fù)。另外在中藥復(fù)方對(duì)OB增殖活性研究中發(fā)現(xiàn)，右歸丸[46]、壯骨止痛方[19]、斷藤益母湯[26]均可使β-catenin蛋白表達(dá)明顯增多，GSK-3β蛋白表達(dá)減少，說明以上方劑改善骨骼質(zhì)量的作用機(jī)制可能是通過激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)OB分化與成熟從而防治骨病。

8 與RA性骨病干預(yù)相關(guān)的核內(nèi)因子-Runx2/Cbfa1

Runx2是Runt結(jié)構(gòu)域基因家族成員之一，是成骨分化特異性轉(zhuǎn)錄因子，通過調(diào)控成骨標(biāo)志基因的轉(zhuǎn)錄，從而促進(jìn)OB分化。目前發(fā)現(xiàn)，Runx2能調(diào)控成骨標(biāo)志基因包括骨鈣素、I型膠原、骨涎蛋白和骨橋蛋白等；除此之外，Runx2能夠影響ALP的活性和OB的礦化等[47]。Runx2與Cbfa1分布在OB中，主要通過早期誘導(dǎo)OB的分化和后期抑制OB凋亡等機(jī)制，促進(jìn)多功能間質(zhì)干細(xì)胞向OB分化[48]。

中藥淫羊藿是一種骨破壞修復(fù)的常用藥，研究顯示[49]淫羊藿能夠上調(diào)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞Cbfa1的表達(dá)，促進(jìn)OB分化增殖，為中藥干預(yù)骨病提供了組織細(xì)胞和分子生物學(xué)基礎(chǔ)證據(jù)。高璐等[50]研究發(fā)現(xiàn)，補(bǔ)腎中藥淫羊藿、補(bǔ)骨脂、女貞子、何首烏有效成分配伍能提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖率，促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為OB，其機(jī)制與上調(diào)Runx2、OSX的基因表達(dá)相關(guān)。胡流超等[51]通過慢病毒載體介導(dǎo)Runx2基因沉默，使大鼠骨質(zhì)疏松骨折愈合延緩，補(bǔ)腎活血湯能上調(diào)Runx2/Osterix表達(dá)，逆轉(zhuǎn)Runx2基因沉默的效應(yīng)，具有明顯促進(jìn)骨折愈合的作用，對(duì)骨質(zhì)疏松性骨折具有良好的治療效果。

9 與RA性骨病干預(yù)相關(guān)信號(hào)通路抑制劑-DKK1

DKK1是Wnt/β-catenin信號(hào)通路的一個(gè)負(fù)調(diào)控蛋白，通過鈍化LRP5/6，阻止Wnt3a-Frz-LRP復(fù)合物的形成，封閉Wnt/β-catenin信號(hào)通路[52]，阻斷早期OB形成并誘導(dǎo)未成熟的OB凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，在RA患者被侵蝕的關(guān)節(jié)中，DKK1過度表達(dá)且促炎因子TNF-α明顯增多(TNF-α可進(jìn)一步誘導(dǎo)DKK1活化)，通過抑制OB數(shù)量與功能阻止骨重建[53]。

研究報(bào)道，活血化瘀中藥可以通過下調(diào)DKK1及其骨重建基因，激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，從而影響OB的分化，促進(jìn)骨折愈合[22]。吳海華[54]等在OA大鼠模型中發(fā)現(xiàn)，DKK1在OA組的表達(dá)顯著高于正常組，且DKK1含量與病程呈正比關(guān)系，消骨痛湯通過抑制DKK1的表達(dá)，緩解病情進(jìn)展。

10 與RA性骨病干預(yù)相關(guān)的下游調(diào)控因子-BMP2

BMP2屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β超家族，對(duì)OB增殖分化與骨質(zhì)修復(fù)過程有重要意義，可通過提高LRP5的表達(dá)促使與Wnt蛋白結(jié)合；或通過促進(jìn)β-catenin基因表達(dá)和蛋白合成，抑制β-catenin磷酸化，激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，促使BMSC成骨分化[14]。

在骨碎補(bǔ)總黃酮對(duì)骨質(zhì)疏松療效研究中發(fā)現(xiàn)，骨碎補(bǔ)總黃酮組大鼠股骨組織的骨小梁數(shù)量、密度、布局及完整性均優(yōu)于其余各組，其機(jī)制可能是通過上調(diào)股骨組織中BMP-2蛋白和血清中的骨鈣素水平，促進(jìn)大鼠BMSC向OB分化，進(jìn)而促進(jìn)骨的形成[55]。研究發(fā)現(xiàn)，淫羊藿素(ICT)有類雌激素(ER)活性作用，可促進(jìn)OB株增殖、分化，主要因?yàn)镮CT劑量依賴性地提高BMP-2的表達(dá)；而阻斷ER受體信號(hào)后，ICT促OB分化作用明顯下降[56]。另有報(bào)道，活血化瘀利水消腫方能提高骨組織中BMP-2的含量，促進(jìn)OB的生成，增強(qiáng)骨組織強(qiáng)度、韌性[57]。

11 展望

“腎-髓-骨”一體論是RA性骨病的理論基礎(chǔ)，其變?cè)诠牵浔驹谀I，肝腎虧虛、氣血不足、骨骼失養(yǎng)終為骨病。從查閱整理文獻(xiàn)過程中就得出，無論是單味藥或者中藥復(fù)方，其性味、歸經(jīng)都集中于肝腎，并與氣血陰陽有關(guān)，最終作用于骨。大量文獻(xiàn)表明，中醫(yī)藥通過激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路干預(yù)RA性骨病的發(fā)生發(fā)展，具體機(jī)制是通過上調(diào)或者下調(diào)其過程中的蛋白、因子的轉(zhuǎn)錄，從而影響OB、OC的發(fā)育分化，促進(jìn)骨基質(zhì)的形成和礦化，抑制骨量丟失。隨著分子生物學(xué)發(fā)展，中醫(yī)藥通過調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路干預(yù)RA性骨病機(jī)制方面有了一定發(fā)展，為中醫(yī)藥干預(yù)RA性骨病提供了大量潛在的作用靶點(diǎn)，同時(shí)也為各調(diào)控因子的單克隆抗體研發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

盡管此類研究越來越多，但仍存在一些問題：(1)在藥理、藥效學(xué)方面的研究多局限于單味中藥，但中藥單味藥和復(fù)方藥作用條件與成分復(fù)雜，有效成分難以分離提取，當(dāng)前的研究?jī)H僅是部分機(jī)制，缺乏其代謝產(chǎn)物具體的作用靶點(diǎn)及作用機(jī)制，對(duì)準(zhǔn)確作用劑量的量效把控研究不足，這也可能是以后的發(fā)展方向；(2)對(duì)于不同疾病，相同中醫(yī)藥可激活亦可抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路，如補(bǔ)腎活血中藥干預(yù)RA性骨病通過激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)OB成骨作用；干預(yù)骨性關(guān)節(jié)炎通過抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路發(fā)揮保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨，緩解疼痛的效果；這有可能說明中醫(yī)藥對(duì)該通路可能有雙向調(diào)節(jié)作用，但其理論還有待進(jìn)一步的研究；(3)文獻(xiàn)評(píng)價(jià)Wnt/β-catenin信號(hào)通路中核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子較少，中醫(yī)藥可直接促進(jìn)間質(zhì)干細(xì)胞成骨分化，是否也通過調(diào)控Runx2表達(dá)，間接促進(jìn)間質(zhì)干細(xì)胞成骨分化；或者中醫(yī)藥可上調(diào)β-catenin蛋白，但不能充分證明β-catenin是否入核以激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，此類問題有待于進(jìn)一步研究。