趙振慧 李妍 李迅

(新疆醫(yī)科大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院·附屬腫瘤醫(yī)院乳腺內(nèi)科，新疆 烏魯木齊 830011)

乳腺癌是全球威脅女性健康的一種常見(jiàn)惡性腫瘤，據(jù)統(tǒng)計(jì)每年死于乳腺癌的患者近49萬(wàn)，在我國(guó)乳腺癌發(fā)病率較高，且一直呈上升趨勢(shì)[1]。雖然隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，乳腺癌的診斷和治療水平已經(jīng)得到了顯著的提高，乳腺癌患者的生存率也相應(yīng)地提高，但乳腺癌仍然是全球范圍內(nèi)腫瘤患者死亡的主要原因[2-3]。乳腺癌的發(fā)病和轉(zhuǎn)移機(jī)制復(fù)雜，并且腫瘤轉(zhuǎn)移是造成乳腺癌患者死亡的主要原因，因此尋找新型有效的靶點(diǎn)依然是乳腺癌研究的重點(diǎn)。隨著基因測(cè)序和基因芯片等生物技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多的非編碼RNA被發(fā)現(xiàn)能夠參與多種疾病的發(fā)生發(fā)展[4]，其中長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA, LncRNA)是一類(lèi)長(zhǎng)度超過(guò)200個(gè)核苷酸的非編碼RNA。目前亦有多種LncRNA被報(bào)道在腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用[5-6]。LncRNA TTN-AS1已經(jīng)被研究在食管癌[7]等癌癥中調(diào)控腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，而其對(duì)乳腺癌中的作用尚未有明確報(bào)道。本研究探討了TTN-AS1對(duì)乳腺癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的作用，旨在為乳腺癌的研究提供幫助。

1 材料與方法

1.1 材料 乳腺上皮細(xì)胞MCF10A(中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究所)，乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、SKBR-3、 MDA-MB-231、MDA-MB-468、BT-20(中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究所)，Entranster-R4000試劑(北京英格恩生物科技有限公司)，RNA轉(zhuǎn)染試劑盒(QIAGEN公司)，PrimeScriptTM 試劑盒(Takara 公司)，PowerUpTM SYBRTM Green Master Mix 試劑盒(Invitrogen 公司)，EvaGreen miRNA qPCR MasterMix試劑盒(Abm公司)，細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(福麥斯生物技術(shù)有限公司)，Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase-3、Caspase-3、GAPDH一抗、山羊抗兔二抗(沈陽(yáng)萬(wàn)類(lèi)生物技術(shù)有限公司)。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng) MCF10A、MDA-MB-231、BT-20、SKBR-3、MCF-7、MDA-MB-468細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，在37 ℃、5% CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至細(xì)胞匯合率達(dá)70%～80%時(shí)使用胰蛋白酶溶液消化并傳代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)研究。

1.3 qRT-PCR 將細(xì)胞生長(zhǎng)匯合率達(dá)80%～90%的細(xì)胞培養(yǎng)板取出，每孔加入 1 mL Trizol 反復(fù)混勻吹打至細(xì)胞完全掉落，轉(zhuǎn)移至 RNase-free 的 1.5 mL EP 管內(nèi)，按照Trizol 試劑說(shuō)明書(shū)提取RNA，主要步驟為T(mén)rizol中加200 μL上述裂解液，靜置5 min，12000×g，4 ℃離心15 min，取上層溶液，加入500 μL異丙醇，12000×g，4 ℃離心10 min，棄上清，1 mL 75%乙醇清洗RNA沉淀后，20 μL RNA-free水重懸RNA沉淀，55 ℃水浴10 min，即為總RNA，使用核酸定量?jī)x檢測(cè)總RNA含量。逆轉(zhuǎn)錄合成參照 Takara 公司 PrimeScriptTM 試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，反應(yīng)全程冰浴操作，設(shè)置反應(yīng)條件為 37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s，4 ℃保存反應(yīng)產(chǎn)物用 于后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作。LncRNA的qRT-PCR 實(shí)驗(yàn)操作參照 Invitrogen 公司 PowerUpTM SYBRTM Green Master Mix 試劑盒說(shuō)明書(shū)，以GAPDH作為內(nèi)參。miRNA 的qRT-PCR 實(shí)驗(yàn)操作參照Abm公司的EvaGreen miRNA qPCR MasterMix試劑盒說(shuō)明書(shū)，以U6作為內(nèi)參。引物序列見(jiàn)表1。

表1 TTN-AS1、GAPDH、miR-134-5p、U6引物序列

1.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 使用Entranster-R4000試劑轉(zhuǎn)染shRNA，主要步驟：將細(xì)胞接種于24孔板中，培養(yǎng)至細(xì)胞匯合度達(dá)50%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染，取1 μg的shRNA稀釋后終體積為25 μL，取1.5 μL的Entranster-R4000稀釋至25 μL，室溫靜置5 min，EntransterTM-R4000稀釋液和RNA稀釋液充分混合，室溫靜置15 min，制備轉(zhuǎn)染復(fù)合物，將50 μL轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加到有0.45 mL全培養(yǎng)基的細(xì)胞上，前后移動(dòng)培養(yǎng)皿，混合均勻，培養(yǎng)24 h后即轉(zhuǎn)染成功，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。根據(jù)RNA轉(zhuǎn)染試劑盒說(shuō)明書(shū)轉(zhuǎn)染miRNA，具體步驟：將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞接種于6孔板中，培養(yǎng)至細(xì)胞匯合度達(dá)60%時(shí)進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，取3 μg的RNA用不含血清及雙抗的DMEM稀釋至100 μL，然后加入5 μL的RNA轉(zhuǎn)染試劑，靜置20 min后，稀釋至1 mL，并用上述混合液培養(yǎng)乳腺癌細(xì)胞8 h，然后更換為含有10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h。

1.5 CCK8檢測(cè)各組的增殖能力 將細(xì)胞接種至96孔板中，每孔5×103個(gè)細(xì)胞，每組5個(gè)復(fù)孔，并設(shè)置24、48、72 h 3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的時(shí)間梯度，各時(shí)間點(diǎn)時(shí)取出培養(yǎng)板，然后每孔加入10 μL的CCK-8溶液，繼續(xù)37 ℃培養(yǎng)4 h，然后用酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔450 nm處的吸光度，OD值越大，細(xì)胞增殖能力越強(qiáng)。

1.6 細(xì)胞凋亡 根據(jù)細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)，取轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞，每孔5×103個(gè)細(xì)胞于離心管中，用500 μL的Binding Buffer重懸細(xì)胞成單細(xì)胞懸液，而后添加5 μL的Annexin V-FITC和5 μL的PI染料，混勻后室溫避光孵育15 min，并設(shè)置Annexin V-FITC和PI單陽(yáng)性管用于調(diào)熒光補(bǔ)償，空白管用于調(diào)電壓。使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)上述各樣品的熒光值，使用FlowJo v5.573軟件分析細(xì)胞凋亡數(shù)。

1.7 細(xì)胞遷移 取轉(zhuǎn)染后的各組用DMEM空培稀釋的200 μL細(xì)胞接種于Transwell小室中，每孔5×103個(gè)細(xì)胞，每組3個(gè)復(fù)孔，小室放置于24孔板中，24孔板每孔加入600 μL含10%胎牛血清的完全培養(yǎng)基，并將上述24孔板轉(zhuǎn)移至細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，小室底部用PBS溶液清洗后用無(wú)水乙醇固定30 min，然后小室倒扣，底部滴加結(jié)晶紫染色10 min，清洗后晾干，于顯微鏡下觀察拍照并計(jì)數(shù)，比較各組細(xì)胞遷移數(shù)。

1.8 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn) 使用miRcode數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)LncRNA TTN-AS1與miR-134-5p的結(jié)合位點(diǎn)，設(shè)計(jì)野生型和突變型的TTN-AS1 的 3′UTR-熒光素酶基因表達(dá)質(zhì)粒，即WT-TTN-AS1 和 MUT-TTN-AS1，將上述質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，然后分別將miR-134-5p mimic和miR-134-5p mimic negative control (miR-NC)分別轉(zhuǎn)染至上述細(xì)胞，根據(jù)雙熒光素酶基因報(bào)告試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)各組細(xì)胞熒光強(qiáng)度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以熒光素酶活性和 Renilla 活性的比值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.9 Western blot檢測(cè)各組蛋白的表達(dá)水平 取各組細(xì)胞1×106個(gè)細(xì)胞，加入200 μL RIPA蛋白裂解液和2 μL PMSF蛋白酶抑制劑，冰上裂解30 min后，12000×r，4 ℃離心10 min，取上清，即為細(xì)胞總蛋白。根據(jù)BCA蛋白定量試劑盒定量，定量后各組蛋白加入上樣緩沖液煮沸30 min，使蛋白樣品充分變性，然后進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜，用5%的脫脂牛奶對(duì)PVDF膜封閉2 h，然后以1∶1000比例稀釋后的一抗4 ℃孵育過(guò)夜，TBST洗膜后二抗室溫孵育1.5 h，再用TBST洗膜后按照ECL試劑盒說(shuō)明書(shū)配置發(fā)光液，并將PVDF膜浸入發(fā)光液中反應(yīng)30 s，曝光并拍照，用Image J軟件對(duì)曝光結(jié)果進(jìn)行定量分析。

2 結(jié)果

2.1 TTN-AS1高表達(dá)于乳腺癌細(xì)胞 qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、BT-20、SKBR-3、MCF-7、MDA-MB-468中TTN-AS1表達(dá)水平顯著高于在乳腺上皮細(xì)胞MCF10A中的表達(dá)水平，且MDA-MB-231中表達(dá)水平最高，見(jiàn)圖1。提示乳腺癌細(xì)胞可能通過(guò)高表達(dá)TTN-AS1而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

圖1 TTN-AS1在乳腺癌細(xì)胞及乳腺上皮細(xì)胞中表達(dá)比較

2.2 TTN-AS1促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖能力 CCK8檢測(cè)結(jié)果顯示，在轉(zhuǎn)染shRNA 24、48、72 h后，相比于sh-NC組，轉(zhuǎn)染shRNA抑制TTN-AS1表達(dá)后，乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231增殖能力顯著下降(P<0.001)，說(shuō)明TTN-AS1能夠調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的增殖，見(jiàn)圖2。

圖2 CCK8檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞增殖能力

2.3 TTN-AS1抑制乳腺癌細(xì)胞凋亡 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示，sh-TTN-AS1組細(xì)胞凋亡率顯著高于sh-NC組細(xì)胞凋亡率(P<0.001)，見(jiàn)圖3。說(shuō)明抑制TTN-AS1表達(dá)后MDA-MB-231凋亡顯著增加，提示TTN-AS1可調(diào)控乳腺癌細(xì)胞凋亡。Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)結(jié)果顯示，相比于sh-NC組，sh-TTN-AS1組細(xì)胞抑凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)水平顯著下降(P<0.001)，促凋亡蛋白Bax、Cleaved-Caspase-3表達(dá)顯著增加(P<0.01)，見(jiàn)圖4。說(shuō)明TTN-AS1可調(diào)控凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)而調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的凋亡水平。

圖3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的凋亡水平

圖4 Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平

2.4 TTN-AS1促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞遷移能力 Transwell小室法檢測(cè)細(xì)胞遷移能力結(jié)果顯示，與sh-NC組比較，sh-TTN-AS1組細(xì)胞遷移數(shù)顯著降低(P<0.001)，見(jiàn)圖5。說(shuō)明抑制TTN-AS1表達(dá)可抑制MDA-MB-231細(xì)胞遷移能力。

圖5 Transwell小室法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞遷移能力

2.5 TTN-AS1靶向調(diào)控miR-134-5p表達(dá) 根據(jù)miRcode數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)TTN-AS1的靶基因，結(jié)果顯示miR-134-5p為T(mén)TN-AS1的靶基因，其結(jié)合位點(diǎn)見(jiàn)圖6。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)結(jié)果顯示，WT-TTNAS1組細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-134-5p mimic后其相對(duì)熒光強(qiáng)度顯著低于轉(zhuǎn)染miR-NC組細(xì)胞(P<0.001)，而MUT-TTNAS1組細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染miR-134-5p mimic和miR-NC后，熒光強(qiáng)度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)圖7。證明了miR-134-5p為T(mén)TN-AS1的靶基因。MDA-MB-231細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染sh-NC和sh-TTN-AS1后，sh-TTN-AS1組細(xì)胞miR-134-5p表達(dá)水平顯著高于sh-NC組，見(jiàn)圖8。說(shuō)明抑制TTA-AS1的表達(dá)可上調(diào)miR-134-5p的表達(dá)。

圖6 數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)TTN-AS1和miR-134-5p靶向結(jié)合位點(diǎn)結(jié)果

圖7 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)TTN-AS1與miR-134-5p靶向結(jié)合位點(diǎn)

圖8 qRT-PCR檢測(cè)miR-134-5p表達(dá)水平

2.6 TTN-AS1靶向miR-134-5p而調(diào)控乳腺癌細(xì)胞增殖能力 為了驗(yàn)證TTN-AS1是否可以靶向miR-134-5p而調(diào)控乳腺癌細(xì)胞增殖能力，在MDA-MB-231細(xì)胞中轉(zhuǎn)染shRNA抑制TTN-AS1的表達(dá)后，轉(zhuǎn)染miR-134-5p inhibitor抑制miR-134-5p的表達(dá)，CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖結(jié)果顯示，抑制TTN-AS1表達(dá)后細(xì)胞增殖能力顯著降低(P<0.01)，然而抑制TTN-AS1表達(dá)的同時(shí)抑制miR-134-5p表達(dá)后細(xì)胞增殖能力顯著高于sh-TTN-AS1組細(xì)胞(P<0.001)，且與sh-NC+miR-134-5p inhibitor組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)圖9。說(shuō)明TTN-AS1可能通過(guò)靶向miR-134-5p調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的增殖能力。

圖9 CCK8法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖能力

2.7 TTN-AS1靶向miR-134-5p而調(diào)控乳腺癌細(xì)胞凋亡能力 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染sh-TTN-AS1抑制TTA-AS1表達(dá)后細(xì)胞凋亡水平顯著增加(P<0.001)，而抑制TTA-AS1表達(dá)的同時(shí)抑制miR-134-5p的表達(dá)后細(xì)胞凋亡水平顯著低于僅抑制TTN-AS1組細(xì)胞凋亡水平(P<0.001)，見(jiàn)圖10。說(shuō)明TTN-AS1可通過(guò)調(diào)控miR-134-5p而影響乳腺癌細(xì)胞的凋亡。

圖10 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞凋亡水平

2.8 TTN-AS1靶向miR-134-5p而調(diào)控乳腺癌細(xì)胞遷移能力 Transwell小室法檢測(cè)各組細(xì)胞遷移能力結(jié)果顯示，抑制TTN-AS1表達(dá)后，MDA-MB-231細(xì)胞的遷移能力顯著降低(P<0.001)，而抑制TTN-AS1表達(dá)的同時(shí)抑制miR-134-5p的表達(dá)后MDA-MB-231細(xì)胞的增殖能力顯著增加，見(jiàn)圖11。說(shuō)明TTN-AS1可通過(guò)調(diào)控miR-134-5p的表達(dá)而調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的遷移能力。

圖11 Transwell小室法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞遷移數(shù)

2.9 TTN-AS1靶向miR-134-5p而調(diào)控凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá) Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，抑制TTN-AS1表達(dá)后，MDA-MB-231細(xì)胞抑凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)顯著減少(P<0.001)，促凋亡蛋白Bax、Cleaved-Caspase-3表達(dá)顯著增加(P<0.001)，而抑制TTN-AS1的同時(shí)抑制miR-134-5p表達(dá)后，Bcl-2表達(dá)顯著增加(P<0.001)，Bax、Cleaved-Caspase-3表達(dá)顯著降低(P<0.01)，見(jiàn)圖12。說(shuō)明TTN-AS1可通過(guò)靶向調(diào)控miR-134-5p的表達(dá)而調(diào)控細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。

圖12 Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)

3 討論

乳腺癌是我國(guó)發(fā)病率最高的惡性腫瘤，是世界范圍內(nèi)女性癌癥死亡的主要原因，乳腺癌的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，腫瘤轉(zhuǎn)移和腫瘤復(fù)發(fā)等問(wèn)題嚴(yán)重阻礙了乳腺癌的治療，所以深入并且全面的研究乳腺癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移機(jī)制對(duì)于乳腺癌的治療和診斷至關(guān)重要[8-9]。近年來(lái)越來(lái)越多的研究表明LncRNA能夠調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展，主要機(jī)制是LncRNA可以作為一種內(nèi)源性RNA與miRNA相互作用[10]，參與靶基因的表達(dá)調(diào)控，并在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的作用，例如LncRNA SNHG3已經(jīng)被研究可調(diào)控乳腺癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，LINC01152可調(diào)控乳腺癌的侵襲，RNA HCP5通過(guò)調(diào)控凋亡通路促進(jìn)三陰性乳腺癌的發(fā)展[11-12]。TTN-AS1是近年來(lái)才被發(fā)現(xiàn)能夠在腫瘤中發(fā)揮調(diào)控作用的LncRNA，可調(diào)控食管癌[6]、結(jié)直腸癌[7]、骨肉瘤[13]等癌癥中發(fā)揮調(diào)控作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，TTN-AS1在MDA-MB-231、BT-20、SKBR-3、MCF-7、MDA-MB-468 5種乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)水平均高于在乳腺上皮細(xì)胞中的表達(dá)水平，在MDA-MB-231細(xì)胞中的表達(dá)水平最高。向MDA-MB-231細(xì)胞中轉(zhuǎn)染shRNA抑制TTN-AS1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)抑制TTN-AS1的表達(dá)后細(xì)胞增殖和遷移能力顯著下降，細(xì)胞凋亡水平顯著增加，并且抑制凋亡的蛋白Bcl-2表達(dá)水平顯著下調(diào)，而促進(jìn)凋亡的Bax和Cleaved-Caspase-3的表達(dá)顯著增加。提示TTN-AS1可調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的增殖和遷移能力，并且通過(guò)調(diào)控凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)而調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的凋亡水平。

LncRNA是人類(lèi)基因組中一類(lèi)重要的表觀遺傳調(diào)控因子，以RNA的形式進(jìn)行表觀遺傳調(diào)控、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等多層面調(diào)控基因的表達(dá)[14-16]；其中，LncRNA與miRNA相互調(diào)控，進(jìn)而調(diào)控體內(nèi)多種生理進(jìn)程，其對(duì)miRNA的調(diào)控機(jī)制有多種，其中最常見(jiàn)的調(diào)控形式為與miRNA結(jié)合，抑制miRNA的表達(dá)進(jìn)而影響miRNA與其靶基因mRNA的結(jié)合，影響靶基因的翻譯[17-18]。本研究通過(guò)miRcode數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)并且通過(guò)雙熒光素酶基因報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了miR-134-5p為T(mén)TN-AS1的靶基因，并且抑制TTN-AS1的表達(dá)后miR-134-5p的表達(dá)亦顯著增加，說(shuō)明miR-134-5p為T(mén)TN -AS1的靶基因，并且LncRNA TTN-AS1能夠靶向抑制miR-134-5p的表達(dá)。

為了驗(yàn)證TTN-AS1是否通過(guò)調(diào)控miR-134-5p的表達(dá)而調(diào)控乳腺癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，本文在轉(zhuǎn)染shRNA抑制TTN-AS1的表達(dá)的同時(shí)轉(zhuǎn)染miR-134-5p inhibitor而抑制miR-134-5p的表達(dá)，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞增殖和遷移能力均顯著高于單獨(dú)抑制TTN-AS1組細(xì)胞的增殖和遷移能力，細(xì)胞凋亡水平顯著低于單獨(dú)抑制TTN-AS1組，并且凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)與單獨(dú)抑制組相比均有顯著差異，說(shuō)明TTN-AS1是通過(guò)靶向抑制miR-134-5p的表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移能力。

4 結(jié)論

長(zhǎng)鏈非編碼RNA TTN-AS1高表達(dá)于乳腺癌細(xì)胞，并且能夠促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖和遷移能力，抑制細(xì)胞凋亡水平，但其深入的調(diào)控機(jī)制還需進(jìn)一步探究。