丁 歡，陳建波，趙海霞，劉 渝

（1. 中國工程物理研究院化工材料研究所，四川 綿陽 621900；2. 中北大學環(huán)境與安全工程學院，山西 太原 030051）

1 引言

耐熱炸藥作為一類熱安定性能優(yōu)異的含能材料，不僅具有低的感度和高的能量輸出，還具有高的熔點（200 ℃以上）和低的蒸汽壓，在長期的高溫加載后仍能可靠起爆［1-2］。根據(jù)耐熱性能的不同，耐熱炸藥可分為高溫耐熱炸藥（耐熱溫度低于220 ℃）和超高溫耐熱炸藥（耐熱溫度高于250 ℃），其中超高溫耐熱炸藥更能適應(yīng)嚴苛的作戰(zhàn)環(huán)境，是含能材料領(lǐng)域未來的發(fā)展趨勢之一［3-4］。四硝基苯并-1，3a，6，6a-四氮雜戊搭烯并吡啶（BPTAP）的分子結(jié)構(gòu)為大π鍵的共軛稠環(huán)體系，使其具有高的熱分解溫度（375 ℃），且熔點大于300 ℃［5-6］。此外，BPTAP 還具有低的感度（摩擦感度為120 N，撞擊感度為26 N）和高的能量（爆速為7.43 km·s-1，爆壓為29.4 GPa）［7］。鑒于BPTAP 優(yōu)異的性能，被認為是新一代的超高溫耐熱炸藥，近年來受到含能材料研究人員的廣泛關(guān)注。

純度是炸藥品質(zhì)評價的重要指標之一，常用的純度測試方法主要包括凝固點下降法［8］、差熱分析法（DSC）［9］、滴定法［10］、核磁共振氫譜法（1H NMR）［11］、色譜法［12］/高效液相色譜（HPLC）等，其中HPLC 具有樣品用量少、靈敏度高、重現(xiàn)性好、自動化程度高等優(yōu)勢，基于HPLC 的純度分析方法是有機化合物純度分析的主要研究手段，在含能材料領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。劉秀華等［13］針對8 種硝基化合物建立了基于HPLC 的含量分析方法，不但可同時檢測多種炸藥組分，還具有高的檢測靈敏度（檢測限≤0.8 ng）。趙允穎等［14］基于HPLC 方法實現(xiàn)了六硝基茋（HNS）與其雜質(zhì)六硝基聯(lián)苯（HNBB）的有效分離與定量分析，對HNS 和HNBB 的 檢 測 范 圍 分 別 為5～100 mg·L-1和2～50 mg·L-1，滿 足 了HNS 及 其 相 關(guān) 物 質(zhì) 的 質(zhì) 量 控制需求。劉園園等［15］針對3，4-二硝基吡唑及其雜質(zhì)3-硝基吡唑和1，3-二硝基吡唑，建立了基于HPLC 的純度分析方法，三種化合物的檢測限分別為1.19，0.60 mg·L-1和1.04 mg·L-1?？?見，HPLC的眾多優(yōu)點使其成為含能材料定性定量分析的重要手段之一，在含能材料的研制生產(chǎn)過程中發(fā)揮了重要作用。

BPTAP 作為近年來高度關(guān)注的一類新型耐熱炸藥，人們圍繞BPTAP 開展了一些合成與性能研究［16-17］，正努力推進其工程化應(yīng)用，然而BPTAP 目前仍缺乏相應(yīng)的純度分析方法，不利于其研制過程的純度監(jiān)測與質(zhì)量控制。為此，本研究開展了基于反相高效液相色譜（RP-HPLC）的BPTAP 純度分析方法研究，通過建立相應(yīng)的色譜分析方法，為BPTAP 工程化應(yīng)用的純度分析與質(zhì)量控制提供技術(shù)支撐。

2 實驗部分

2.1 實驗儀器

Shimadzu LC-20AT 高效液相色譜儀，配置有2 個LC-20AT 泵，SIL-20A 自動進樣器，SPD-20A 紫外檢測器，CTO-20A 柱溫箱。Agilent 1260 液相色譜儀，配置有DAD 檢測器。超純水出自Millipore-Q system（美國Millipore），電阻率為18.2 MΩ。炸藥樣品均在XPE26 微量天平（瑞士Mettler Toledo）上稱重，精度為0.001 mg。UA10MFD 超聲波清洗器（德國WIGGENS），Vortex Genie 2T 旋渦混合器（美國Scientific Industries），BL-240/2411 防爆冰箱（上海億思科技實業(yè)有限公司）。

2.2 試劑與耗材

BPTAP 炸藥由中物院化工材料研究所提供，并進行重結(jié)晶（純度≥98.0%）；甲醇（HPLC 級，百靈威化學試劑公司），乙腈（HPLC 級，百靈威化學試劑公司），四氫呋喃（HPLC 級，默克化工技術(shù)公司），乙酸銨（HPLC級，百靈威化學試劑公司），三氟乙酸（AR級，麥克林生化公司），N'，N'-二甲基甲酰胺（AR 級，麥克林生化公司），二甲基亞砜（AR 級，天津市致遠化學試劑有限公司）；注射器（美國賽默飛世爾實驗器材公司），0.46 μm 的過濾膜（日本AS One）。

2.3 樣品前處理

準確稱取2.00 mg 的BPTAP 樣品，置于100 mL 的容量瓶中，乙腈定容，超聲攪拌使其充分溶解，配制成20.00 μg·mL-1的溶液，用于HPLC 分析方法開發(fā)研究。稱取10.06 mg 的BPTAP 純度參比樣品，溶于50 mL 的DMSO 中，配制成201.20 μg·mL-1的儲備液；再分別對上述儲備液進行稀釋，配制成100.60、50.30、10.06、5.03、1.01 μg·mL-1和0.50 μg·mL-1等不同濃度的標準工作溶液，用于標準工作曲線、檢測限等相關(guān)研究。為調(diào)節(jié)HPLC 流動相的pH 值，在水相中加入不同類型的添加劑，分別配制成含有0.05%（V/V）三氟乙酸、0.5%（V/V）四氫呋喃和1.5、1.0、0.5 mg·mL-1乙酸銨的流動相。所有樣品在HPLC 分析前，均經(jīng)過0.45 μm 的過濾膜過濾，避免不溶物堵塞色譜柱。

2.4 HPLC 方法的優(yōu)化

HPLC 分析方法開發(fā)主要在Shimadzu LC-20AT高效液相色譜儀上進行，檢測波長的優(yōu)化在Agilent 1260 液相色譜儀上進行。色譜柱是影響HPLC 分離效果好壞的關(guān)鍵因素之一，其中Plus C18 色譜柱適用于大多數(shù)有機化合物的分離，應(yīng)用范圍最為廣泛。另外，Extend C18 色譜柱適用于堿性條件下分離，Phenyl-Hexyl 色譜柱適于分離芳香族化合物，SB-Phenyl 色譜柱適合在酸性條件下分離芳香族化合物。優(yōu)化后的HPLC 方法如下：色譜柱為ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱（4.6×150 mm，5.0 μm），流動相為超純水（含0.1 mg·mL-1的乙酸銨）-乙腈混合液，梯度洗脫模式，乙腈含量在0～10 min 之間由35%線性增至90%并繼續(xù)保持5 min，從15.01 min 起，乙腈含量回到35%并保 持6 min；流 速 為1.0 mL·min-1，進 樣 體 積 為10.0 μL，柱溫為30 ℃，檢測波長為230 nm。HPLC 分析、數(shù)據(jù)采集和定量分析均在Shimadzu LCsolution 軟件上進行。

2.5 HPLC 方法驗證

通過考察BPTAP 色譜分析的重復性、穩(wěn)定性、精密度、耐用性、標準曲線與靈敏度、檢測限等參數(shù)分析，對建立的HPLC 分析方法的性能進行驗證。

通過重復多次進樣（n=6），分析BPTAP 的保留時間和峰面積等相關(guān)參量的相對標準偏差（RSD），評估HPLC 方法的重復性。

通過HPLC 在48 h 內(nèi)不同時間間隔的連續(xù)分析，檢測不同時間段內(nèi)BPTAP 的保留時間和峰面積的變化，考察該方法的穩(wěn)定性。

基 于 不 同 濃 度（201.20、100.60、50.30、10.06、5.03、1.01 μg·mL-1和0.50 μg·mL-1）的BPTAP 標 準溶液建立相應(yīng)的標準工作曲線，以三倍的信噪比來分析方法的檢測限（LOD），以十倍的信噪比分析該方法的定量限（LOQ），以評價該方法的靈敏度。

為驗證方法的準確性，在未知的樣品中添加不同濃度（200、100、50 μg·mL-1）的BPTAP 純度參比物，每個樣品重復測定三次并計算加標回收率。

通過分析BPTAP 在日間（n=18，每天進樣6 次）和日內(nèi)（n=6）峰面積的RSD 以評估色譜方法的日間/日內(nèi)精密度。

為研究方法的耐用性，對檢測波長±2.0 nm、柱溫±2.0 ℃等進行細微調(diào)整，考察BPTAP 的保留時間（tR）、分離度（R）和半峰寬（full width at half maxima，簡稱FWHM）等參量的變化。

2.6 BPTAP 重結(jié)晶過程的純度分析

將BPTAP 粗產(chǎn)品加入DMF 中，80 ℃油浴加熱，500 r·min-1攪拌至充分溶解，冷卻到室溫加入反溶劑（甲醇）攪拌至樣品析出，靜置過濾，使用超純水洗滌，干燥得到一次重結(jié)晶的樣品。油浴溫度下降到50 ℃，將一次重結(jié)晶的樣品按照相同的方法進行二次重結(jié)晶。

準確稱取BPTAP 粗品、一次重結(jié)晶樣品和二次重結(jié)晶樣品各1.00 mg，分別置于100 mL 的容量瓶中，乙腈定容，超聲攪拌使其充分溶解，經(jīng)0.45 μm 的過濾膜過濾，并利用建立的HPLC 方法分析BPTAP 重結(jié)晶前后的純度變化。

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜分析影響因素考察

BPTAP 的結(jié)構(gòu)如圖1 所示，鑒于BPTAP 在高極性溶劑（如乙腈、甲醇）中的溶解性明顯優(yōu)于低極性溶劑（如正己烷、氯仿），優(yōu)先采用HPLC 的反相模式進行分析方法開發(fā)研究。由于BPTAP 合成得到的粗產(chǎn)品中存在多種雜質(zhì)，采用梯度洗脫的分離效果明顯優(yōu)于等度洗脫。因此，本研究將基于梯度洗脫模式的RP-HPLC 開展對BPTAP 純度分析方法研究，重點考察色譜柱、流動相、進樣量、流速等因素對分離結(jié)果的影響。

圖1 BPTAP 的分子結(jié)構(gòu)Fig.1 Molecular structure of BPTAP

3.1.1 色譜柱的優(yōu)化

本研究考察了四種色譜柱對BPTAP 的色譜分析的影響，結(jié)果如圖2a所示。由圖2a可知，Extend C18色譜柱的分離效果較差，雜質(zhì)峰都集中于BPTAP 色譜峰附近。Plus C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）、Phenyl-Hexyl（4.6 mm×150 mm，5 μm）和SB-Phenyl（4.6×250 mm，5 μm）色譜柱的分離效果有所改進，BPTAP 與其雜質(zhì)均能達到較好的分離。但是，不同的色譜柱在分離時間上差異較大，SB-Phenyl 色譜柱的分離時間最長（12.04 min），Phenyl-Hexyl 色 譜 柱 的 分 離 時 間 為10.46 min，Plus C18 色譜柱的分離時間較短，為8.99 min。另外，不同色譜柱下BPTAP的色譜峰面積也有所不同，SB-Phenyl色譜柱的峰面積（555158 mV·min）最強，Phenyl-Hexyl 色譜柱的峰面積（531337 mV·min）次之，Plus C18 色譜柱的峰面積（514818 mV·min）較強，而Extend C18 色譜柱的峰面積（309258 mV·min）最弱。為了在提高分離效率的同時達到好的分離效果，綜合考慮BPTAP 的保留時間、峰高和峰面積參數(shù)，最終選擇Plus C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）色譜柱進行BPTAP 純度分析。

圖2 BPTAP 在不同色譜柱（a）和不同流動相（b）下的色譜圖Fig.2 Chromatographic analysis of BPTAP by using different columns（a）and different mobile phase（b）

3.1.2 流動相的優(yōu)化

流動相作為色譜分離的重要載體，對分析過程有著重要影響。反相液相色譜的流動相通常由有機相和水相混合而成，其中常見的有機相為乙腈、甲醇等?？疾煲砸译婧图状紴榱鲃酉鄷r，不同有機溶劑對BPTAP色譜分離的影響，結(jié)果如圖2b 所示。當以甲醇為有機相時，BPTAP 的保留時間（6.83 min）較短，但與其相鄰的色譜峰發(fā)生重疊，未能充分分離。當流動相中有機溶劑改為乙腈時，BPTAP 的保留時間（9.36 min）有所延長，但分離效果明顯改善，對稱性較好，且BPTAP 的峰面積（637343 mV·min）和峰高（67304 mV）信號更強?？梢姡译孀鳛橛袡C相更適合BPTAP 的色譜分離。

3.1.3 乙腈含量的優(yōu)化

在梯度洗脫模式下，從起始點到終點過程中有機相與水相的變化比例是決定分離效果的關(guān)鍵因素。首先考察了梯度起點乙腈含量分別為30%、35%、40%、45%和50%時，對BPTAP分離的影響，結(jié)果如圖3所示。乙腈含量越高，BPTAP的保留時間越短（見圖3b）。乙腈含量為25%時保留時間為20.78 min，當乙腈含量升高至50%時，BPTAP 的保留時間縮短至14.36 min。從圖3a 可以看出，當乙腈含量為35%時，色譜峰1、2和3 的分離效果最好。隨著乙腈含量的持續(xù)增加，色譜峰1、2 和3 對應(yīng)的分離度降低，甚至難以分開?？梢?，以35%乙腈含量作為BPTAP 梯度分離的起點具有更好的分離效果。

圖3 梯度起點不同乙腈含量下的BPTAP 色譜分析Fig.3 Chromatographic analysis of BPTAP by using different acetonitrile content at the starting point

在對梯度起點的乙腈含量優(yōu)化后，進一步考察了梯度終點不同乙腈含量（分別為75%、80%、85%、90%和95%）對BPTAP 分離的效果。如圖4 所示，BPTAP 的保留時間隨乙腈含量的增加而略微減小，當終點乙腈含量從75%升至95%時，其保留時間下降了1.198 min，但峰高從43602 mV 增加至48412 mV。當梯度終點乙腈含量為90%時，BPTAP 及其雜質(zhì)的色譜峰的半峰寬均小于0.30，拖尾因子在1.047～1.228 之間，理論塔板數(shù)均大于40703，對稱性好，柱效高。因此，選擇90%作為BPTAP 梯度分析終點的乙腈含量。

3.1.4 流動相中添加劑的影響

當流動相中未加入添加劑時，保留時間為2 min處存在數(shù)個難以分離的色譜峰。為改善分析效果，考察了在流動相中加入不同添加劑對BPTAP 分離的影響。如圖5a 所示，加入0.05%（V/V）三氟乙酸時，基線漂移嚴重；加入0.5%（V/V）四氫呋喃時，對色譜分離效果沒有明顯改善；而加入1.5 mg·mL-1的乙酸銨時，保留時間為2 min 處各峰的分離有一定改善。進一步考察了不同濃度的乙酸銨（濃度分別為0.5、1.0 和1.5 mg·mL-1）對這些峰的分離效果。如圖5b 所示，1.0 mg·mL-1的乙酸銨作為添加劑即可達到較好的分離。因此，以1.0 mg·mL-1的乙酸銨作為流動相中的添加劑。

圖5 流動相中不同的添加劑對BPTAP 色譜分析的影響Fig.5 Chromatographic analysis of BPTAP by using different additives in mobile phase

3.1.5 檢測波長的優(yōu)化

利用帶有二極管陣列檢測器的液相色譜考察不同檢測波長對BPTAP 分離的影響。如圖6所示，當以BPTAP的最大紫外吸收波長460 nm 為檢測波長時，BPTAP 具有最大的峰高和峰面積。同時，以200～230 nm 為檢測波長時，BPTAP 也有較強的色譜信號。此外，相對于460 nm 的檢測波長，200～230 nm 的檢測波長下能看到更多的雜質(zhì)峰，更有利于BPTAP 制備過程的雜質(zhì)控制。然而，當以200 nm、210 nm 為檢測波長時，基線漂移嚴重，背景噪音較強。而在230 nm 檢測波長時，基線更為平滑。因此，選擇230 nm 作為BPTAP 色譜分析的最佳檢測波長。

圖6 不同波長下BPTAP 的色譜圖Fig.6 Chromatographic analysis of BPTAP by using different detection wavelengths

3.1.6 梯度分離時間的優(yōu)化

在梯度洗脫程序中，梯度分離時間不僅影響著樣品的分離效果，也決定了分析的效率。本研究考察了不 同 的 梯 度 分 離 時 間（8、10、15、20 和25 min）對BPTAP 色譜分離的影響。由圖7a 可知，梯度分離時間的縮短，分析效率也有所提升，且BPTAP 的峰高和峰面積均隨之增加。然而，當梯度分離時間為8 min 時，BPTAP 與其相鄰的色譜峰（保留時間為8.25 min）分離較差，未達到基線分離。因此，選擇10 min 作為梯度分離的最佳運行時間。

3.1.6 進樣量的優(yōu)化

增大進樣量可以有效的提高色譜的峰高和峰面積，但過大的進樣量會造成色譜柱飽和，進而影響分離效果。如圖7b 所示，為不同進樣量（5、10、20、30 和40 μL）下BPTAP 的分離情況。當進樣量為5 μL 時，色譜峰1、2 的峰面積較弱，甚至小于1000 mV·min，難以進行準確的定量分析。進樣量為10 μL 時，色譜峰1、2的峰面積增加，均大于1500 mV·min，且分離效果良好，對稱性高。當進樣量為20～40 μL時，保留時間為0～4 min處各峰未能分離，色譜峰2的對稱性下降。當進樣量為40 μL 時，色譜峰2 與BPTAP 重疊，難以區(qū)分。因此，選擇10 μL為BPTAP色譜分析的最佳進樣量。

圖7 梯度洗脫不同分離時間（a）和不同進樣量（b）下BPTAP 的色譜分析Fig.7 Chromatographic analysis of BPTAP by using different separation time（a），and different injection volumes（b）

3.1.7 流速的優(yōu)化

適當?shù)牧魉倌苡行У販p小被分析物的保留時間，節(jié)約時間成本的同時提高分析效率。本研究考察了流速分別為0.6、0.8、1.0、1.2 和1.5 mL·min-1時BPTAP的色譜分析效果（圖8a）。隨著流速的增加，BPTAP 的保留時間明顯的縮短，由0.6 mL·min-1流速時的13.37 min 下 降 到1.5 mL·min-1流 速 時 的6.84 min。與此同時，BPTAP 的峰高（113507～69892 mV）和峰面積（917211～354022 mV·min）也隨流速的增加而下降。當流速為1.0 mL·min-1時，BPTAP 具有合適的峰高（95258 mV）和峰面積（546268 mV·min），保留時間為9.16 min，且各峰的分離度良好（均大于1.95），基線平穩(wěn)，信噪比低。因此，選擇1.0 mL·min-1作為BPTAP 色譜分析的檢測流速。

3.1.8 柱溫的優(yōu)化

為避免色譜柱的溫度對BPTAP 的色譜分析產(chǎn)生不利影響，本研究考察了柱溫箱分別為25、30、35、40 ℃和45 ℃時的色譜分析效果。結(jié)果如圖8b 所示，柱溫的升高會略微降低BPTAP 的保留時間。保留時間由25 ℃時的8.80 min 降至45 ℃的8.04 min，對應(yīng)峰高由576509 mV 下降到545171 mV，相應(yīng)峰面積由100381 mV·min下降到96671 mV·min。參考實驗室環(huán)境溫度，柱溫為30 ℃時，BPTAP的保留時間為8.65 min，峰面積為572358 mV·min，峰高為100139 mV，且對稱性好、柱效高。因此，最終選擇30 ℃作為BPTAP 色譜分析的柱溫。

圖8 不同流速（a）和不同柱溫（b）下BPTAP 的色譜分析Fig.8 Chromatographic analysis of BPTAP by using different flow rates（a）and column temperatures（b）

3.1.9 最佳的色譜分析條件

經(jīng)上述優(yōu)化，本文建立了基于HPLC 的BPTAP 純度分析方法，并獲得了最佳的色譜分析條件，其色譜柱為Plus C18 色譜柱（4.6×150 mm，5.0 μm），流動相為乙腈-水混合液（含0.1 mg·min-1的乙酸銨），梯度分離模式，乙腈含量在10 min內(nèi)從35%線性增至90%并保持5 min，進樣量為10.0 μL，柱溫為30 ℃，流速為1.0 mL·min-1，檢測波長為230 nm。最佳條件下BPTAP 的色譜圖如圖9a 所示，BPTAP 的保留時間為9.13 min，保留因子（K'）為5.85，拖尾因子（T）為1.22，半峰寬（FWHM）為0.18，各個峰的分離度（R）均大于1.90，展現(xiàn)了良好的分離效果。BPTAP及其雜質(zhì)的分離參數(shù)如表1所示。

表1 優(yōu)化的HPLC 條件下BPTAP 及雜質(zhì)的分離參數(shù)Table 1 The separation parameters of BPTAP and the impurities under optimum condition of HPLC

3.2 BPTAP 方法驗證

3.2.1 標準曲線與靈敏度

為建立BPTAP 定量分析的標準工作曲線，將BPTAP 參比溶液逐級稀釋，配制成201.20、100.60、50.30、10.06、5.03、1.01 μg·mL-1和0.50 μg·mL-1的標準工作溶液，使用外標法結(jié)合峰面積定量，獲得BPTAP 的標準工作曲線（見圖9b）。在0.5～200 μg·mL-1的范圍內(nèi)，BPTAP 的濃度與色譜峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，其線性方程為Y=33455.72X-45404.95，相關(guān)系 數(shù)R2=0.9997，檢 測 限 為0.02 μg·mL-1，定 量 限 為0.07 μg·mL-1，表明該方法具有良好的靈敏度。

圖9 優(yōu)化HPLC 條件下BPTAP 的色譜圖（a）及BPTAP 的標準工作曲線（b）Fig.9 The chromatogram of BPTAP under optimum condition of HPLC（a）and the standard curve for BPTAP（b）

3.2.2 準確度

在待測的BPTAP 樣品中，分別加入50.30、100.60、201.20 μg·mL-1不同濃度的純度參比溶液，在最佳HPLC 條件下，每個樣品重復測定3 次，記錄峰面積并計算加標回收率。如表2 所示，BPTAP 的加標回收率在101.68%～104.58%之間，且RSD 在0.19%～0.28%之間，說明本方法具有良好的準確性。

表2 BPTAP 在不同濃度下的加標回收率（n=3）Table 2 The recovery of BPTAP after adding different standard solutions

3.2.3 精密度

日間/日內(nèi)精密度是分別對同一批樣品在連續(xù)不同天數(shù)/同一天進行測試，用于表示儀器的環(huán)境條件發(fā)生微小變化時測定結(jié)果的差異性。為考察BPTAP 的HPLC 分析方法的精密度，同一樣品分別制備6 份供試品，分別進樣，連續(xù)測定3d，并以BPTAP 峰面積的RSD作為日間/日內(nèi)精密度的評價依據(jù)。由表3 可知，BPTAP 峰 面 積 的 日 內(nèi)RSD 均≦1.56%，日 間RSD 為1.17%，表明本方法的精密度良好。

表3 日間/日內(nèi)精密度實驗Table 3 The inter-day and intra-day precision

3.2.4 重復性

基于已建立的HPLC 分析方法，將BPTAP 配制成20 μg·mL-1的溶液，重復分析6 次，以考察BPTAP 色譜方法的重復性。如表4 所示，BPTAP 的保留時間、峰面積的相對標準偏差（RSD）分別為0.04%、0.81%，表明BPTAP 分析方法具有良好的重復性。

表4 BPTAP 色譜方法的重復性Table 4 The repeatability of BPTAP method

3.2.5 穩(wěn)定性

使用新配制的20 μg·mL-1的BPTAP 溶液，分別在1 h、12 h、24 h 和48 h 等不同時間段內(nèi)測量BPTAP 的保留時間和峰面積，以考察本方法對BPTAP 分析的穩(wěn)定性。如表5 所示，BPTAP 在48 h 內(nèi)保留時間、峰面積的RSD 分別為0.20%、0.93%。可見，基于HPLC 的BPTAP 分析方法在48 h 內(nèi)是相對穩(wěn)定的。

表5 基于HPLC 的BPTAP 分析方法的穩(wěn)定性Table 5 The stability of BPTAP method base on HPLC

3.2.6 耐用性

實際實驗過程中存在一些影響B(tài)PTAP 色譜分析的細微變化，如檢測波長、色譜柱溫的波動。為評估某些因素發(fā)生波動時對分析結(jié)果的影響，對這些因素進行細微調(diào)整如柱溫（±2 ℃）、檢測波長（±2 nm），考察變動因素對檢測結(jié)果的影響。由表6 可知，在柱溫（±2 ℃）和檢測波長（±2 nm）的細微調(diào)整下，保留時間（tR）、分離度（R）和半峰寬（FWHM）均保持良好。可見，本方法具有優(yōu)良的耐用性，色譜條件的細微波動不影響分離效果。

表6 BPTAP 的HPLC 方法在不同條件下的耐用性Table 6 The robustness of BPTAP method under different conditions

3.3 實際樣品分析

為考察本方法在BPTAP 中的實際應(yīng)用前景，還將本方法應(yīng)用于BPTAP 實際樣品重結(jié)晶過程中的純度分析研究。如表7 所示，不同批次（20190601 批、20190917 批、20191015 批和20191119 批）的BPTAP樣品的純度存在差異，粗品純度最低為80.37%，經(jīng)過一次重結(jié)晶后純度提升至94.32%，二次重結(jié)晶后的純度提升至95.47%。結(jié)果表明，本研究建立的BPTAP 色譜分析方法適合用于BPTAP 的純度分析研究。

表7 不同批次的BPTAP 和重結(jié)晶之后的純度分析Table 7 The purity analysis of BPTAP in different batches and after the recrystallization

4 結(jié)論

針對BPTAP 研制生產(chǎn)及應(yīng)用過程中對純度分析的需求，開展了基于高效液相色譜（HPLC）的分析方法構(gòu)建、驗證及實際應(yīng)用研究。

（1）首先，通過優(yōu)化影響色譜分析的相關(guān)因素如色譜柱、進樣量及分析時間等，建立了基于HPLC 的BPTAP 純度分析方法?；谠摲椒?，BPTAP 及其雜質(zhì)得到高效分離，BPTAP 的保留時間為9.13 min，各個峰的分離度均大于1.9。

（2）接著，對該分析方法進行了系統(tǒng)驗證，該方法在0.5～200 μg·mL-1范圍內(nèi)展現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，檢測限為0.02 μg·mL-1，定量限為0.07 μg·mL-1，并體現(xiàn)了良好的精密度和重現(xiàn)性。

（3）此外，還將該方法應(yīng)用于BPTAP 實際樣品重結(jié)晶過程的純度監(jiān)測研究，分析發(fā)現(xiàn)不同批次的BPTAP 樣品存在純度差異，且經(jīng)過重結(jié)晶可以有效提高BPTAP 的純度。

總之，本研究建立的BPTAP 色譜分析方法具有準確、高效、靈敏等優(yōu)勢，可用于BPTAP 的純度分析、含量檢測和質(zhì)量控制等研究。