于超,周小鳳,呂志棟,毛艷,韓清昕,吳琍

(青島大學(xué)附屬醫(yī)院乳腺中心,山東 青島 266100)

目前,乳癌已成為全球女性癌癥死亡的第二大原因[1],并占全球女性癌癥病例總數(shù)的1/4[2]。在中國,乳癌的致死人數(shù)逐年增加,已成為導(dǎo)致45歲以下女性死亡的主要原因和發(fā)病率較高的女性疾病[3-5]。乳癌早期診斷不理想[6]。近幾年研究發(fā)現(xiàn),血清中可溶性人B7同源體3(sB7-H3)在多種癌癥病人中異常高表達(dá)[7-9],并與腫瘤惡性進(jìn)展和預(yù)后密切相關(guān)[10-11]。sB7-H3對于癌癥診斷和預(yù)后評價可能有重要價值。本研究探討乳癌病人血清中sB7-H3表達(dá)及其臨床意義,為乳癌早期診斷提供依據(jù)。

1 資料和方法

1.1 對象與分組

2018年8月—2019年4月,選取我院收治乳癌病人106例作為研究對象(乳癌組),均為女性。納入標(biāo)準(zhǔn):①自愿參加本次研究;②病歷及術(shù)后病理資料完整;③穿刺及術(shù)后病理診斷為浸潤性乳癌。排除標(biāo)準(zhǔn):①伴有其他惡性腫瘤、自身免疫系統(tǒng)疾病和炎癥性疾病;②術(shù)前有新輔助治療史;③近3個月有藥物應(yīng)用史。以同期來我院體檢中心體檢的健康者43例作為對照組,所有對象均為女性。乳癌組病人年齡25～76歲,平均(53.42±10.26)歲;對照組年齡為19～62歲,平均(44.53±11.28)歲。本文研究取得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)和病人知情同意,并簽署知情同意書。

1.2 檢測指標(biāo)及方法

采集受檢者清晨空腹靜脈血5 mL,靜置0.5 h后,以3 000 r/min離心5 min,取血清并將其保存于-80 ℃冰箱內(nèi)備用。應(yīng)用ELISA 法測定標(biāo)本中sB7-H3表達(dá),試劑盒購自江蘇寶萊生物科技有限公司,操作參照說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,計量資料數(shù)據(jù)以表示,兩組數(shù)據(jù)間比較采用t檢驗,多組數(shù)據(jù)間比較采用單因素方差分析。采用Med Calc 19.0.2軟件繪制ROC 曲線。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清sB7-H3表達(dá)比較

乳癌組、對照組血清sB7-H3 表達(dá)量分別為(26.27±4.21)、(19.44±4.91)μg/L,兩組比較差異有顯著性(t=8.530,P＜0.01)。

2.2 血清中sB7-H3表達(dá)篩選乳癌的最佳截斷值

ROC曲線分析顯示,曲線下面積為0.854(95%CI=0.787～0.907,P＜0.01);最佳診斷截斷值為21.73μg/L,靈敏度為84.0%,特異度為76.7%,約登指數(shù)0.607。即以血清sB7-H3 水平21.73μg/L作為區(qū)分乳癌和健康人的篩選界值時,診斷價值最高。見圖1。

圖1 血清中sB7-H3表達(dá)診斷乳癌的ROC曲線

2.3 乳癌病人sB7-H3表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

p TNM 分期較高(Ⅲ期和Ⅳ期)的乳癌病人血清中sB7-H3表達(dá)高于分期較低乳癌病人(Ⅰ期和Ⅱ期),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-2.219,P＜0.05)。淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移的病人血清sB7-H3明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病人,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-2.205,P＜0.05)。腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(TILS)≤5%的病人sB7-H3表達(dá)高于TILS＞5%的病人,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=2.067,P＜0.05)。而腫瘤大小、組織學(xué)分級、分子分型等病理特征與sB7-H3表達(dá)無關(guān)(P＞0.05)。見表1。

表1 乳癌病人血清sB7-H3表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系(ρ/μg·L-1,)

表1 乳癌病人血清sB7-H3表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系(ρ/μg·L-1,)

注:*p TNM 分期參照第8 版AJCC 乳癌TNM 分期方法;△Her-2(臨界)的病人按Her-2陰性進(jìn)行Luminal分型。

3 討 論

近年來,人們致力于與腫瘤的診斷和預(yù)后評價具有較高臨床相關(guān)性的血液生物標(biāo)志物研究[12]。B7-H3為一種表達(dá)于人體各類免疫細(xì)胞膜上的Ⅰ型跨膜蛋白,愈來愈多研究證實其具有免疫相關(guān)作用[13]。對B7-H3 生物學(xué)功能的研究發(fā)現(xiàn),B7-H3在調(diào)節(jié)T 細(xì)胞活化過程同時具有共刺激和共抑制作用[14-16];同時有研究顯示,B7-H3 在特異性和非特異性免疫調(diào)節(jié)中均具有重要意義[17]。但B7-H3的作用機(jī)制仍不明確。有研究顯示,B7-H3與T 細(xì)胞上的髓樣細(xì)胞(TREM-)樣轉(zhuǎn)錄物(TLT-2)分子上表達(dá)的受體結(jié)合可增強(qiáng)T 細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子產(chǎn)生和細(xì)胞毒性[18]。但這一觀點并沒有被普遍接受。一些研究人員認(rèn)為,T 細(xì)胞上可能有其他潛在受體[19-20]。B7-H3抑制T 細(xì)胞活化的相關(guān)機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

有研究顯示,B7-H3在人體體液中的可溶性形式sB7-H3能夠與B7-H3受體結(jié)合。正常人血清,甚至人的成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞的上清液和前列腺分泌物中均可檢測到sB7-H3的表達(dá)[21-22],多種疾病病人體內(nèi)檢測到sB7-H3表達(dá)水平與健康人群不同[23]。對于sB7-H3的來源,絕大多數(shù)研究認(rèn)為,其是通過基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)切割單核細(xì)胞、樹突細(xì)胞、活化的T 細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞細(xì)胞膜上的B7-H3而釋放出來,其支持證據(jù)是MMP抑制劑能夠增強(qiáng)B7-H3在細(xì)胞膜上的表達(dá)[21]。

關(guān)于sB7-H3的生物學(xué)功能,有研究認(rèn)為在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中,外周血中的游離sB7-H3可以競爭性地與T 細(xì)胞表面上的B7-H3 受體結(jié)合,阻斷B7-H3的T 細(xì)胞活化作用,從而具有與B7-H3相反的免疫調(diào)節(jié)功能[24-25]。CHEN 等[9]研究結(jié)果顯示,剪切型sB7-H3能夠抑制T 細(xì)胞增殖,減少細(xì)胞因子的分泌。而XIE 等[12]研究結(jié)果證明,sB7-H3通過TLR4/NF-κB途徑促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。提示sB7-H3可能與人體免疫調(diào)節(jié)有關(guān),并可能在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。

本研究結(jié)果顯示,乳癌組血清sB7-H3 表達(dá)明顯高于健康組,提示血清sB7-H3檢測可作為乳癌篩選和輔助診斷的潛在標(biāo)志物;同時對血清sB7-H3與臨床病理參數(shù)的關(guān)系分析顯示,血清中sB7-H3表達(dá)與乳癌病人p TNM 分期、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TILS表達(dá)高低等有關(guān),而與年齡、腫瘤大小及組織學(xué)分級等無關(guān),sB7-H3高表達(dá)可能提示乳癌分期更高,預(yù)后更差。

大量研究認(rèn)為,TILS 是人體對腫瘤抗原進(jìn)行免疫反應(yīng)的標(biāo)志,其具有潛在預(yù)測乳癌病人預(yù)后的價值[26-27]。尤其在三陰性與Her-2 陽性乳癌病灶中TILS浸潤程度較高,可能與這兩種類型腫瘤的免疫原性相對較高有關(guān)[28]。值得注意的是,本研究結(jié)果顯示,血清sB7-H3表達(dá)與乳癌組織中TILS水平有關(guān),提示sB7-H3可能參與調(diào)節(jié)T 細(xì)胞對乳癌腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng),并有可能抑制T 細(xì)胞活化,這與SUN 等[25]研究結(jié)果類似。此外有研究發(fā)現(xiàn),MMP除可能參與切割mB7-H3產(chǎn)生sB7-H3,還介導(dǎo)組成腫瘤微環(huán)境的細(xì)胞外基質(zhì)的降解,使乳癌組織間質(zhì)中T 細(xì)胞穿透細(xì)胞外基質(zhì)形成的屏障,促進(jìn)其免疫活性[29],提示血清sB7-H3可能與腫瘤浸潤微環(huán)境形成存在某種聯(lián)系。其具體作用機(jī)制需要進(jìn)一步研究。

綜上所述,sB7-H3在乳癌病人中高表達(dá),具有成為篩查乳癌血清標(biāo)志物的良好前景;sB7-H3與乳癌病人術(shù)后病理參數(shù)存在密切相關(guān)性,提示其具有預(yù)測乳癌病人臨床預(yù)后的潛力。sB7-H3可能通過抑制B7-H3對T 細(xì)胞的活化功能,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸,其具體機(jī)制尚需進(jìn)一步研究證實。