張俊杰，廖先駿，許樂園，胡佩杰，曹常鵬，孫豐收，*

(1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，山東 泰安 271018) (2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)藥環(huán)境毒理研究中心，山東 泰安 271001) (3.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所，北京 100125)

蟲螨腈(chlorfenapyr)分子式為C15H11BrClF3N2O，屬于新型吡咯類殺蟲劑，對鱗翅目、同翅目等多種害蟲的防治具有高效性[1-3]。韭菜和姜是人們經(jīng)常食用的蔬菜，也是重要的調(diào)味品，病蟲害的發(fā)生嚴(yán)重影響韭菜和姜的產(chǎn)量和質(zhì)量，化學(xué)農(nóng)藥的使用是防治病蟲害最常用、最直接的手段。韭菜遲眼蕈蚊是韭菜常見蟲害，甜菜夜蛾是姜上重要的蟲害[4-5]，蟲螨腈對甜菜夜蛾的防治有顯著效果，且對于防治韭菜遲眼蕈蚊具有較高的應(yīng)用潛力，并分別于2014年和2018年首次在韭菜和姜上登記[6-7]。

隨著蟲螨腈在韭菜和姜上廣泛使用，可能導(dǎo)致蟲螨腈殘留風(fēng)險(xiǎn)增加，從而可能對居民的身體健康產(chǎn)生不良影響。為評估蟲螨腈的安全性，根據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織農(nóng)藥殘留聯(lián)合專家會(huì)議(JMPR)2018年評估報(bào)告，蟲螨腈殘留物膳食風(fēng)險(xiǎn)評估為蟲螨腈及其代謝物溴代吡咯腈10倍之和，以蟲螨腈表示[8]。在評估蟲螨腈使用對人的安全性時(shí)，需評估蟲螨腈及其代謝物溴代吡咯腈的潛在風(fēng)險(xiǎn)。我國食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了蟲螨腈在甘藍(lán)、大白菜、黃瓜等作物上的最大殘留限量，尚未制定蟲螨腈在韭菜和姜上的最大殘留限量，且未見蟲螨腈及溴代吡咯腈在韭菜和姜上的殘留檢測方法報(bào)道。本研究建立了蟲螨腈及其代謝物溴代吡咯腈在復(fù)雜基質(zhì)韭菜和姜上的殘留檢測方法。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 98.1%蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，99.3%溴代吡咯腈標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；乙腈、甲醇、甲酸，色譜純；高溫蒸餾水；氯化鈉、無水硫酸鎂，分析純；N-丙基乙二胺(PSA)、多壁碳納米管(MWCNT)。

1.2 試驗(yàn)儀器 TSQ Quantis 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(UPLC-MS/MS)；EVO TSQ8000氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(GC-MS/MS)；萬分之一電子天平；百分之一電子天平；均質(zhì)機(jī)；漩渦混合儀；離心機(jī)；移液器等。

1.3 溶液配制

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 稱取蟲螨腈和溴代吡咯腈標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用乙腈溶解并定容，得到兩種有效成分的標(biāo)準(zhǔn)溶解母液，用乙腈釋成濃度均為0.001、0.01、0.05、0.1、0.5mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液；用韭菜和姜空白基質(zhì)提取液稀釋成濃度均為0.001、0.01、0.05、0.1、0.5mg/L的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.2 添加回收 韭菜和姜用均質(zhì)機(jī)粉碎，向韭菜和姜基質(zhì)中添加蟲螨腈和溴代吡咯腈標(biāo)樣，漩渦混勻后靜置2h，使得添加濃度均為0.01、1和10mg/kg，每個(gè)添加濃度重復(fù)處理5次。

1.4 樣品前處理

1.4.1 提取 韭菜和姜樣品用均質(zhì)機(jī)粉碎，稱取10.00g樣品至離心管中，加入20mL乙腈，漩渦震蕩5min，再加入1.00g氯化鈉、4.00g無水硫酸鎂，旋渦震蕩3min，以4 000r/min離心2min，上清液備用。

1.4.2 凈化 取上清液1.500mL，置于2mL離心管(內(nèi)含40mg PSA、10mg C18、5mg MWCNT和150mg 無水硫酸鎂)中凈化，漩渦震蕩5min，以10 000r/min離心2min，過0.22μm 有機(jī)濾膜，稀釋后進(jìn)樣檢測。蟲螨腈進(jìn)行GC-MS/MS檢測，溴代吡咯腈進(jìn)行UPLC-MS/MS檢測。

1.5 分析條件

1.5.1 蟲螨腈分析條件 GC-MS/MS，EI源；采集方式：SRM；檢測器電壓：70ev；載氣：He，純度：99.999%；

色譜柱：毛細(xì)管柱(TG-SQC，15.0m×0.25mm，0.25μm)；

柱流量：1.2mL/min；進(jìn)樣體積：1μL；進(jìn)樣方式：不分流；

程序升溫：初始溫度：100℃，保持1min；以30℃/min 升溫至280℃，保持5min。

表1 蟲螨腈質(zhì)譜檢測參數(shù)

圖1 蟲螨腈典型譜圖(0.01mg/L)

1.5.2 溴代吡咯腈分析條件 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)條件：

色譜柱：Waters ACQUITY UPLC?BEH C18柱，2.1×50mm，1.7μm；

柱溫：35℃；流速：0.30mL/min；進(jìn)樣體積：1μL。

表2 梯度洗脫程序

離子源：電噴霧離子源(ESI)，負(fù)離子模式；監(jiān)測模式：多反應(yīng)離子監(jiān)測(MRM)；

噴霧電壓：3 500V；脫溶劑溫度：350℃；離子傳輸管溫度：325℃；

鞘氣壓力：50Arb；輔助氣壓力：10Arb

表3 溴代吡咯腈質(zhì)譜檢測參數(shù)

圖2 溴代吡咯腈典型譜圖(0.01mg/L)

2 結(jié)果與討論

2.1 線性關(guān)系測定 蟲螨腈和溴代吡咯腈在0.001～0.5mg/L濃度范圍內(nèi)，經(jīng)上述分析條件檢測，以濃度為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)，獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線(表4～5)。結(jié)果表明，在0.001～0.5mg/L范圍內(nèi)，蟲螨腈和溴代吡咯腈在乙腈、韭菜基質(zhì)和姜基質(zhì)上的線性相關(guān)系數(shù)均>0.99，線性關(guān)系良好。

表4 蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)系數(shù)

表5 溴代吡咯腈標(biāo)準(zhǔn)曲線和相關(guān)系數(shù)

樣品經(jīng)前處理方法提取凈化，是否達(dá)到較為理想的前處理效果，以基質(zhì)效應(yīng)評價(jià)?；|(zhì)效應(yīng)為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率與溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率比值，斜率比值在0.8～1.2之間，表示該方法的基質(zhì)效應(yīng)可忽略[9]。結(jié)果表明，蟲螨腈在韭菜基質(zhì)中的斜率比值為0.8，在姜基質(zhì)中的斜率比值為0.93；溴代吡咯腈在韭菜基質(zhì)中的斜率比值為0.98，在姜基質(zhì)中的斜率比值為1.04，在此方法中基質(zhì)效應(yīng)可忽略。

2.2 正確度和精密度測定 蟲螨腈和溴代吡咯腈在韭菜和姜上添加濃度為0.01、1和10mg/kg時(shí)，經(jīng)上述分析條件下檢測，獲得平均回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，以評估該方法的正確度和精密度。結(jié)果表明，蟲螨腈在韭菜上的平均回收率為88.4%～104%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.4%、3.9%、1.5%；在姜上的平均回收率為93.0%～99.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為4.9%、2.8%、3.1%；溴代吡咯腈在韭菜上的平均回收率為87.8%～98.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為4.6%、4.6%、4.0%；在姜上的平均回收率為87.2%～94.7%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為4.6%、2.7%、3.5%(表6～7)。

表6 蟲螨腈回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=5)

表7 溴代吡咯腈回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=5)

3 結(jié)論

本研究建立了蟲螨腈和溴代吡咯腈在韭菜和姜上的殘留檢測方法，通過乙腈提取，40mg PSA、10mg C18、5mg MWCNT凈化，蟲螨腈使用UPLC-MS/MS檢測，溴代吡咯腈使用GC-MS/MS檢測。在0.001～0.5mg/L范圍內(nèi)R2>0.99，在0.01、1和10mg/kg 3個(gè)添加水平下，方法的線性范圍、正確度和精密度均符合殘留檢測標(biāo)準(zhǔn)[10]。

該方法準(zhǔn)確性好、靈敏度高，可用于蟲螨腈和溴代吡咯腈在韭菜和姜上的殘留檢測，為評估蟲螨腈安全性提供檢測方法參考。