毛卉

（荊州市第三人民醫(yī)院檢驗科，湖北 荊州 434000）

手足口病（hand,foot and mouth disease，HFMD）是由腸道病毒（enterovirus，EV）引起，兒童多發(fā)的傳染性疾病，重癥患兒多為＜3歲兒童[1-2]?；純菏帧⒆?、口腔通常會出現(xiàn)皰疹或皮疹，有低熱、腹痛、哭鬧拒食等表現(xiàn)[3]。已有研究[4]證明在手足口病的篩查中EV71T CV-A16型感染比例最高。手足口病實驗室診斷一般是以腸道病毒的核酸檢測為主，臨床根據(jù)患者實際情況采集糞便、肛周拭子、咽部拭子、皰疹滲出液、血清、腦脊液等標本進行送檢，最常見的有肛拭、咽拭子和皰疹滲出液。本研究選取2017年1月至2019年12月本院收治的385例手足口患兒為研究對象，統(tǒng)計并比較3種常見標本腸道病毒檢測結(jié)果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年1月至2019年12月本院收治的385例手足口患兒為研究對象，其中358例有接觸史，占比92.9%。其中，男229例，女156例；年齡0～17歲，平均年齡（3.52±1.27）歲。納入標準：患兒均有口痛、厭食、發(fā)熱及表皮、口腔等部位出現(xiàn)皰疹或小潰瘍的臨床表現(xiàn)；符合《手足口病診療指南（2018年版）》診斷標準。

1.2 方法 對385例患兒每人配對采集兩個類型標本，固定采集肛拭標本和根據(jù)患兒實際臨床表現(xiàn)和患兒對標本采集的過程接受情況選擇咽拭子或皰疹液標本1份。所有標本的采集均在發(fā)病急性期內(nèi)完成。

1.2.1 臨床標本的運送和保存 所有標本采集完成后均需檢查標本采集容器是否密封好，防止在運送過程中標本干燥。不能及時送檢的標本在4℃暫存并在12 h內(nèi)冷鏈送至實驗室。實驗室收取標本后，若當天不能進行檢測應(yīng)按要求置于-20℃以下核酸檢測專用格保存，記錄標本相關(guān)信息，禁止與其他檢測項目的標本混放。檢測后需長期留存的標本應(yīng)做好標記置于-80℃保存。

1.2.2 實驗室檢查 將采集的患兒標本進行病毒核酸提取處理，試劑為湖南圣湘生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的試劑盒。實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)過程使用ABI7300型實時熒光定量PCR儀。整個操作流程均嚴格按照試劑說明書來完成，操作過程符合實驗室標準化程序文件要求。

1.2.3 結(jié)果判讀 所有標本檢測結(jié)果以CT值≤35（CT為達到設(shè)定域值的循環(huán)數(shù)）判斷為陽性；檢測結(jié)果35＜Ct≤38判斷為可疑，此時應(yīng)對該標本重新檢測，必要時需重新采集標本；CT值＞38時還未檢出，則判為陰性。

1.3 觀察指標 比較第一對照組肛拭、咽拭子腸道病毒檢測數(shù)據(jù)，第二組肛拭、皰疹液腸道病毒檢測數(shù)據(jù)，兩個對照組中肛拭標本的病毒檢測數(shù)據(jù)，以肛拭組匯總數(shù)據(jù)為參照與皰疹液、咽拭子標本檢出率比較。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 第一組肛拭、咽拭子腸道病毒檢測數(shù)據(jù)比較 第一組共采集279例患兒共558份標本。肛拭標本中檢出腸道病毒EV通用型226例、EV71型122例、CV-A16型85例、其他腸道病毒感染19例。同步檢測的咽拭標本各型陽性例數(shù)依次為188例、96例、74例和18例。肛拭標本腸道病毒檢測的EV通用型和EV71的陽性檢出率均明顯高于同步檢測的咽拭標本，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。但兩種標本CA16型和腸道病毒其他類型的陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

表1 肛拭和咽拭腸道病毒檢測數(shù)據(jù)比較[n（%）]Table 1 Comparison of enterovirus test data between anal swab and pharynx swab[n(%)]

2.2 第二組肛拭、皰疹液腸道病毒檢測數(shù)據(jù)比較 第二組共采集106例患兒共212份標本。肛拭標本中檢出腸道病毒EV通用型84例、EV71型45例、CV-A16型32例、其他腸道病毒感染7例。同步檢測的皰疹液標本各型陽性例數(shù)依次為98例、60例、31例和7例。肛拭標本腸道病毒EV通用型，EV71陽性檢出率均明顯低于同步檢測的皰疹液標本，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。但兩種標本CV-A16型和腸道病毒其他類型的陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

表2 肛拭和皰疹液腸道病毒檢測數(shù)據(jù)比較[n（%）]Table 2 Comparison of enterovirus test data between anal swab and herpes fluid[n(%)]

2.3 兩組中肛拭標本檢測結(jié)果比較 兩個對照組中肛拭標本檢測結(jié)果比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。綜合兩個對照組數(shù)據(jù)，肛拭標本所測數(shù)據(jù)共385例，EV通用型核酸陽性310例，陽性率80.51%。其中檢出EV71陽性167例，占43.37%，CVA16型陽性117例，占30.38%，其他類型陽性26例，占6.75%，見表3。

表3 兩組肛拭標本腸道病毒檢測數(shù)據(jù)比較[n（%）]Table 3 Comparison of enterovirus test data between two groups[n(%)]

2.4 以肛拭組匯總數(shù)據(jù)為參照與皰疹液、咽拭子標本檢出率比較 3種類型標本的腸道病毒檢出率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其中腸道病毒通用型和EV71型比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），檢出率由高至低依次為皰疹液、肛拭、咽拭。兩種標本CV-A16型和腸道病毒其他類型的陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表4。

表4 肛拭、咽拭、皰疹液腸道病毒檢測數(shù)據(jù)比較[n（%）]Table 4 Comparison of enterovirus test data of anal swab,pharynx swab and herpes fluid[n(%)]

3 討論

手足口病是由腸道病毒引起的季節(jié)性流行性疾病[5]，一般以確診感染者或無癥狀感染者為傳染源，可通過消化道和呼吸道傳播[6]。多數(shù)感染者為輕癥，但也因身體基礎(chǔ)狀況不同，有少數(shù)患兒會出現(xiàn)腦炎、神經(jīng)源性肺水腫、肺出血等癥狀，危及患兒生命[7-9]。基于以上原因，如何選擇合適的樣本送檢以保證腸道病毒檢出率具有重要意義。

本研究結(jié)果顯示，第一組279例患兒肛拭EV通用型、EV71、CV-A16和腸道病毒其他型陽性率為81.00%、43.72%、30.47%、6.81%，高于咽拭子的67.38%、34.40%、26.52%、6.45%；肛拭標本腸道病毒檢測的EV通用型和EV71的陽性檢出率均明顯高于同步檢測的咽拭標本，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。第二組106例患兒肛拭EV通用型、EV71、CVA16和腸道病毒其他型陽性率為79.24%、42.45%、30.18%、6.60%，低于皰疹液的92.45%、56.60%、29.24%、6.60%，肛拭標本腸道病毒EV通用型，EV71陽性檢出率均明顯低于同步檢測的皰疹液標本，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），檢出率由高至低依次為皰疹液、肛拭、咽拭。分析原因為，除標本類型間本身的差別外，還有可能是由于采集此類標本的患兒出現(xiàn)皰疹典型癥狀和臨床診斷標準符合率也最高所致。3種標本間CA16型和腸道病毒其他類型檢出率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。這可能與分析研究的樣本量不足及兩種類型感染占比較低相關(guān)。本研究與不同標本間腸道病毒檢出率存在一定差異，肛拭子腸道病毒總體陽性檢出率均高于咽拭子標本，與相關(guān)研究結(jié)果[10-13]基本一致。

綜上所述，手足口病腸毒病毒核酸檢測在肛拭子、咽拭子、皰疹三種類型標本間陽性檢出率存在明顯差異。為保證手足口患兒腸道病毒核酸檢測陽性檢出率利于輔助臨床診斷，建議在患兒發(fā)病急性期同時采集兩個類型的樣本送檢。標本類型的選擇應(yīng)在患者實際條件允許的情況下，盡量首選檢出率高的皰疹液標本送檢，肛周拭子標本次之，咽拭子為末選。