摘要：? 以紅醋栗不同組織部位為外植體，采用不同的消毒藥劑、消毒方式及消毒時(shí)間對(duì)其進(jìn)行試驗(yàn)研究，結(jié)果表明：紅醋栗離體初代培養(yǎng)以半木質(zhì)化莖段為外植體，消毒藥劑為0.1%升汞（HgCL2）+2滴吐溫溶液，通過(guò)手搖容器晃動(dòng)的方式消毒8 min的試驗(yàn)效果最佳。

關(guān)鍵詞：? 紅醋栗;? 外植體消毒;? 消毒方法;? 誘導(dǎo)率

中圖分類(lèi)號(hào)：? ?S 663. 9? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：? ?A? ? ? ? ? ? ? ? 文章編號(hào)：1001 - 9499（2021）03 - 0015 - 03

紅醋栗（Ribes rubrum）系醋栗科、茶蘼子屬、茶蘼亞屬落葉小灌木，俗稱(chēng)紅加侖，株高1～1.5 m，果實(shí)成熟為紅色，成串著生在果枝上，可鮮食可加工，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。紅醋栗樹(shù)姿優(yōu)美，果實(shí)顏色鮮艷，可作觀賞樹(shù)種應(yīng)用于園林綠化。遼寧省干旱地區(qū)造林研究所于2002年從俄羅斯季米利亞澤夫農(nóng)學(xué)院引進(jìn)紅醋栗，通過(guò)栽培試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其具有耐寒、適應(yīng)性強(qiáng)、果實(shí)產(chǎn)量高等特點(diǎn)，在遼西地區(qū)可安全越冬，不僅為遼西地區(qū)經(jīng)濟(jì)林樹(shù)種結(jié)構(gòu)調(diào)整提供了新的優(yōu)良種質(zhì)，并且在促進(jìn)區(qū)域經(jīng)濟(jì)發(fā)展和環(huán)境美化方面都具有重要意義[ 1 - 2 ]。

目前，紅醋栗僅限于在東北和西北地區(qū)栽培，存在栽植面積小、果實(shí)產(chǎn)量不穩(wěn)定、相關(guān)產(chǎn)業(yè)發(fā)展緩慢、苗木供應(yīng)不足等問(wèn)題[ 3 ]。為了促進(jìn)紅醋栗規(guī)?；a(chǎn)，短期內(nèi)獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)種苗，可采用組織培養(yǎng)方法。組織培養(yǎng)作為植物無(wú)性繁殖的一種方式，具有繁殖速度快、繁殖系數(shù)高等特點(diǎn)[ 4 - 7 ]。在組織培養(yǎng)中，外植體選擇、消毒藥劑種類(lèi)、消毒方式及消毒時(shí)間是影響無(wú)菌體系建立的重要因素，初代培養(yǎng)成功與否直接關(guān)系到組培苗的成活率。本研究通過(guò)對(duì)紅醋栗不同部位外植體消毒方法的消毒效果的影響研究，為紅醋栗的組培快繁提供技術(shù)參考。

1 試驗(yàn)地概況

試驗(yàn)地設(shè)于遼寧省朝陽(yáng)市建平縣富山鎮(zhèn)的良種紅醋栗引種栽培基地。該地區(qū)為暖溫帶半濕潤(rùn)、半干旱氣候，年均氣溫5.4～8.7 ℃，年均日照時(shí)數(shù)2 850～2 950 h，降水量450～580 mm，無(wú)霜期120～155天。

2 試驗(yàn)材料與方法

2. 1 試驗(yàn)材料

2020年6月中旬，于試驗(yàn)地采集若干當(dāng)年生生長(zhǎng)發(fā)育健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的紅醋栗同株幼嫩莖尖、半木質(zhì)化莖段和木質(zhì)化莖段作為外植體試驗(yàn)材料。

2. 2 試驗(yàn)方法

2. 2. 1 材料預(yù)處理

將采集回來(lái)的外植體剪成8 cm左右的莖段，剪掉葉片。流水沖洗后，用肥皂液浸泡5 min，然后用軟毛刷刷掉表面塵土和雜物，用流水沖凈肥皂液，置于自來(lái)水龍頭下沖洗3～4 h后轉(zhuǎn)入無(wú)菌室備用。

2. 2. 2 外植體消毒

采用L9（ 34 ）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選取外植體部位、消毒藥劑種類(lèi)、消毒方式及消毒時(shí)間這4個(gè)因素，每個(gè)因素各設(shè)3個(gè)水平，即外植體部位（幼嫩莖尖、半木質(zhì)化莖段、木質(zhì)化莖段），消毒藥劑種類(lèi)（75%酒精30 s+0.1%升汞、0.1%升汞、0.1%升汞+2滴吐溫），消毒方式（靜止浸泡、玻璃棒攪動(dòng)、手搖容器晃動(dòng)），消毒時(shí)間（6 min、8 min、10 min）（表1）。將備好的外植體莖段按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行消毒處理，用無(wú)菌水沖洗5～6次，將沖洗干凈、濾干水分的外植體在超凈工作臺(tái)上切成1 cm的帶芽莖段，接種到初代培養(yǎng)固體培養(yǎng)基中，每個(gè)處理接種30瓶，每瓶接種1個(gè)外植體，30天后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)率。

誘導(dǎo)率（K）=誘導(dǎo)出不定芽的外植體數(shù)量/接種的外植體總數(shù)×100%

2. 2. 3 培養(yǎng)條件

以MS為基本培養(yǎng)基，附加激素6-BA0.6 mg/L+? IBA0.04 mg/L，活性炭AC1.0 g/L，蔗糖含量為33%，瓊脂含量為0.8%，pH值調(diào)至5.8，置于121℃、1.1 kg/m2壓力下高溫滅菌20 min，培養(yǎng)室溫度控制在（23±2）℃，空氣相對(duì)濕度50%～60%，光照強(qiáng)度為2 000～4 000 lx，光照時(shí)間為14～16 h/d[ 4 ]。

3 結(jié)果與分析

3. 1 不同外植體消毒效果比較

將供試外植體部位按照不同消毒方法設(shè)置9個(gè)處理（表2）：（1）幼嫩莖尖，75%酒精30 s+0.1%升汞，靜止浸泡6 min;（2）幼嫩莖尖，0.1%升汞，玻璃棒攪動(dòng)8 min;（3）幼嫩莖尖，0.1%升汞+2滴吐溫，手搖容器晃動(dòng)10 min;（4）半木質(zhì)化莖段，75%酒精30s+0.1%升汞，玻璃棒攪動(dòng)10 min;（5）半木質(zhì)化莖段，0.1%升汞，手搖容器晃動(dòng)6 min;（6）半木質(zhì)化莖段，0.1%升汞+2滴吐溫，靜止浸泡8 min;（7）木質(zhì)化莖段，75%酒精30 s+0.1%升汞，手搖容器晃動(dòng)8 min;（8）木質(zhì)化莖段，0.1%升汞，靜止浸泡10 min;（9）木質(zhì)化莖段，0.1%升汞+2滴吐溫，玻璃棒攪動(dòng)6 min。

試驗(yàn)接種后，對(duì)組培苗進(jìn)行觀察和調(diào)查統(tǒng)計(jì)，并將污染的和消毒處理過(guò)程中殺死的組培苗及時(shí)清出培養(yǎng)室，30天后統(tǒng)計(jì)紅醋栗離體初代培養(yǎng)的誘導(dǎo)率。由不同外植體消毒方法的正交試驗(yàn)結(jié)果（表2）可以看出，試驗(yàn)處理6的相對(duì)誘導(dǎo)率較好，為78.6%。

3. 2 數(shù)據(jù)分析

由各試驗(yàn)處理誘導(dǎo)結(jié)果（表3）可以看出，試驗(yàn)處理因素主次順序是以極差值R的大小來(lái)衡量的，試驗(yàn)比較外植體部位對(duì)紅醋栗離體初代培養(yǎng)成活率的影響最為明顯，極差值R為28.0;其次是消毒藥劑的種類(lèi)，R值為10.6;再次是消毒時(shí)間和消毒方式，R值分別為9.8和6.5。

注： K為誘導(dǎo)率

4 結(jié)論與討論

4. 1 控制污染、提高成活率是植物組織培養(yǎng)中的關(guān)鍵因素，外植體因其部位不同，細(xì)胞活力強(qiáng)弱及帶菌多少存在差異，進(jìn)而影響初代培養(yǎng)的污染程度。使用適宜的消毒藥劑，掌握好消毒方式和消毒時(shí)間能夠起到理想的滅菌作用。

4. 2 75%酒精具有很強(qiáng)的滲透力，不適用于幼嫩莖尖滅菌，而0.1%升汞作為組織培養(yǎng)中常用的消毒劑，結(jié)合吐溫一起使用，能夠促進(jìn)藥液與外植體表面組織接觸，消毒效果更好。玻璃棒攪動(dòng)消毒雖然污染較低，但在攪動(dòng)過(guò)程中很可能對(duì)幼嫩外植體表面造成損傷，使藥液滲入組織，進(jìn)而對(duì)成活率產(chǎn)生一定影響。

4. 3 在進(jìn)行紅醋栗離體初代培養(yǎng)時(shí)，以半木質(zhì)化莖段為外植體，以0.1%升汞+2滴吐溫溶液為消毒藥劑，再通過(guò)手搖容器晃動(dòng)的方式消毒8 min的試驗(yàn)效果最佳。

參考文獻(xiàn)

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第1作者簡(jiǎn)介：? 朱虹（1981-），? 女，? 工程師，? 主要從事苗木繁育工作。

收稿日期： 2021 - 01 -? 16

（責(zé)任編輯：? ?王 巖）