桂 平， 韋小麗

(1.貴州大學林學院， 貴陽 550025； 2.銅仁職業(yè)技術學院農學院， 貴州 銅仁 554300)

植物組織培養(yǎng)常用的生根方式為瓶內生根，其不足之處是組培苗生根后苗還需進行馴化煉苗移栽，此法耗時長且在移栽過程中會造成一定的幼苗損耗。因此，一種微枝瓶外生根技術受到學者們的青睞[1-4]。紅豆樹(OrmosiahosieiHemsletWils)為紅豆屬常綠喬木，國家Ⅱ級重點保護珍貴植物，我國特有鄉(xiāng)土樹種[5-6]。由于紅豆樹自身結實具有大小年現象，再加上人為破壞及環(huán)境的影響等多方面的原因，致使紅豆樹自然資源十分稀缺[7],探索一種高效的紅豆樹組織培養(yǎng)方式是解決紅豆樹種質資源頸瓶的有效途徑。關于紅豆樹組織培養(yǎng)的研究已有一些報道[8-11]，但生根方式均采用的瓶內生根，生根率不理想[10-11]。本研究借鑒前人開展試管外生根的經驗，以增殖的紅豆樹無根試管苗為材料，開展了瓶外和瓶內生根試驗，探尋提高紅豆樹組培苗生根率、縮短出苗周期、高效節(jié)約的生根途徑，為高效培育紅豆樹苗木提供技術參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

選用高度大于3.5 cm且生長健壯的試管增殖無根苗，基部斜切處理后稍晾干作瓶內外生根備用。

1.2 試驗方法

1.2.1瓶內生根培養(yǎng)

設計3因素3水平的正交試驗(表1)，采用正交表為L9(34)，培養(yǎng)基中均添加8 g·L-1的瓊脂，30 g·L-1的蔗糖，高壓滅菌前pH調至6.0，每個處理20個試材，2次重復。接種后將培養(yǎng)物置于(25±2)℃、12 h·d-1光照時間、3 000 lx光照強度的環(huán)境中培養(yǎng)。每10 d觀察記錄一次根系誘導情況，60 d后統(tǒng)計生根株數與生根條數。

表1 生根培養(yǎng)正交試驗

1.2.2煉苗及移栽技術研究

將單株生根數高于3條，且長勢較好的瓶苗移到自然光照下，3 d后打開透氣膜再靜置3 d，備好經高壓滅菌的基質，洗凈幼苗基部培養(yǎng)基，將其移栽至不同配比的基質中進行生根(表2)，每個處理15株苗，3次重復，保持基質濕度，定期觀察幼苗適應情況，統(tǒng)計移栽成活率。

表2 煉苗移栽基質

1.2.3瓶外生根培養(yǎng)

將備好的紅豆樹試管無根苗試材的基部分別置入100 mg·L-1、150 mg·L-1、200 mg·L-1的NAA溶液中保持5 s，取出后分別插入已滅菌的基質中，基質同瓶內生根煉苗移栽(表2)，盆口用保鮮膜罩住，每個處理15個試材，3次重復，在溫度保持在(24±1)℃的人工氣候箱內培養(yǎng)生根，持續(xù)觀察45 d后統(tǒng)計無根苗根系誘導及生長情況。

2 結果與分析

2.1 試管內生根效果分析

紅豆樹試管無根苗瓶內生根結果(表3，圖1 A～圖1 C)表明，不同基本培養(yǎng)基類型對紅豆樹組培生根率影響顯著，其中生根率、根數、根長在1/2 MS培養(yǎng)基中均顯現較突出，平均生根率分別較1/4 MS、1/2 WPM培養(yǎng)基高47.4%、5.7%；平均根數分別較1/4 MS、1/2 WPM培養(yǎng)基多2.07條、0.37條；平均根長分別較1/4 MS、1/2 WPM培養(yǎng)基長2.24 cm、0.62 cm。在1/2 MS培養(yǎng)基的3個不同處理中，以附加生長調節(jié)劑0.5 mg·L-1的NAA培養(yǎng)基中生根效果最好，根數在4條以上，根長在3 cm以上且生根率最高，達87.37%。

表3 生根培養(yǎng)正交試驗L9(34)結果

2.2 不同基質煉苗移栽效果

紅豆樹試管苗在不同基質中進行的煉苗結果(表4，圖1 A、圖1 B)得出，不同的基質對煉苗成活率存在顯著性差異(p<0.05)，在3號基質中長勢較好，平均成活率93.33%，分別較1號和2號基質高11.11%和37.33%?？梢娂t豆樹試管苗煉苗移栽最佳的基質為3基質即蛭石+珍珠巖+泥炭土(3∶1∶3)。

表4 紅豆樹試管苗煉苗移栽結果

2.3 試管外生根效果分析

從瓶外生根試驗結果(表5、6，圖1中C、D)可知，紅豆樹組培微枝瓶外生根產生了一定量的側根及須根，根系質量明顯優(yōu)于瓶內生根，基質的成分和NAA溶液的濃度對紅豆樹組培苗瓶外生根效果均存在極顯著影響(p<0.01)，在蛭石+珍珠巖+泥炭土(3∶1∶3)基質中生根效果較好，平均生根率達82.96%，分別較珍珠巖+蛭石(1∶3)和珍珠巖+泥炭土(1∶3)基質高5.18%和42.96%；不同濃度NAA溶液處理生根試料基部結果得出，150 mg·L-1的NAA溶液對材料的生根效果最好，平均生根率達71.11%，分別較100 mg·L-1和200 mg·L-1高13.33%和2.22%?？梢娂t豆樹組培苗微植瓶外生根最適的方法是用150 mg·L-1的NAA溶液侵泡試材基部5 s后插入蛭石+珍珠巖+泥炭土(3∶1∶3)基質中生根，生根率在95%以上。

注:A和B為瓶內生根及煉苗移栽;C和D為瓶外生根效果。圖1 生根效果

表5 不同基質對試管外生根的影響

表6 生根率方差分析結果

3 討 論

不同基本培養(yǎng)基類型對紅豆樹組培生根率影響顯著，這與施瓊等[12]、王軍娥[13]和鄒英寧等[14]的研究結果類似。組織培養(yǎng)中，生根培養(yǎng)通常是在添加生長素IBA和NAA的培養(yǎng)基中進行。本研究表明，添加1種生長素的培養(yǎng)基生根效果優(yōu)于添加2種生長素的培養(yǎng)基，其中以NAA效果最佳，這與王茂進等[15]的研究結果一致，但與何官榕等[11]對紅豆樹的研究結果有差異，可能是因為基因型不同，對不用的生長素反應效果存在差異所致[15]。

基質是植株生根成活的重要因素，不同基質透氣性、保水性及營養(yǎng)成分不同，以致不同植物適應的基質不一致。試驗得出，紅豆樹在具備一定的透氣及保水性的基質蛭石+珍珠巖+泥炭土(3∶1∶3)中長勢較好，且不同基質對瓶外生根率影響顯著，這與肖玉菲等[16]的研究結果類似。

試管苗瓶外生根是將生根與馴化有機地結合起來,有效縮短了育苗周期,節(jié)約生產成本,相對于瓶內生根的組培苗來說，提高了移栽成活率,縮短了出苗時間，是一項在組培工廠化育苗中值得應用與推廣的技術[17]。試驗得出，紅豆樹組培微枝瓶外生根能產生一定的側根及須根，且根系質量優(yōu)于瓶內生根，這與黃卓忠等[18]和施瓊等[12]的研究結果一致。

4 結 論

紅豆樹組培無根苗最佳的生根方式為瓶外生根，即將紅豆樹無根苗基部置入150 mg·L-1的NAA溶液中速醮5 s后，插于蛭石+珍珠巖+泥炭土(3∶1∶3)基質中進行生根，生根率在95%以上。