朱宇軒 米武娟 李 波 梁建奎 宋高飛 畢永紅

(1. 中國科學(xué)院水生生物研究所淡水生態(tài)與生物技術(shù)國家重點實驗室, 武漢 430072; 2. 中國科學(xué)院大學(xué), 北京 100049;3. 南水北調(diào)中線干線工程建設(shè)管理局, 北京 100038)

全長1432 km的南水北調(diào)中線工程于2014年12月完工通水, 借助該人工渠道, 將漢江流域丹江口水庫的水分流至河南、河北、北京和天津等沿線的20個大城市和100個縣, 一期工程運行達到設(shè)計條件后, 年平均調(diào)水量95億m3, 惠及總?cè)丝诮?億。干渠通水以來, 生態(tài)補水效果明顯, 受水區(qū)地下水超采問題得到緩解, 發(fā)揮了巨大的社會效益、經(jīng)濟效益和生態(tài)效益。另一方面, 盡管干渠營養(yǎng)鹽保持著相對動態(tài)穩(wěn)定, 但作為對水環(huán)境最敏感的類群, 干渠中的藻類種類、數(shù)量和生物量發(fā)生快速改變, 表現(xiàn)出對輸水動態(tài)的明顯響應(yīng), 藻類群落出現(xiàn)單一優(yōu)勢種, 優(yōu)勢度和生物量居高不下, 特定時間局部渠段藻類群落快速增殖, 浮游植物細胞密度最高達到107cells/L數(shù)量級; 著生藻類生物量快速增長并出現(xiàn)衰老脫落上浮等現(xiàn)象。

著生藻類是附生在水下基質(zhì)表面的微小植物群落[1]; 在包括河流、水庫和湖泊等淡水環(huán)境廣泛存在; 著生藻類所處的不同生境使得群落結(jié)構(gòu)有很大差異[2]。中線工程干渠是一個全新的特化人工系統(tǒng), 大面積的混凝土坡壁和適宜的光照為著生藻類提供了良好的生長環(huán)境。盡管著生藻類已在一定程度上影響中線工程的運行和水質(zhì)穩(wěn)定, 但迄今為止, 對干渠內(nèi)著生藻類的研究資料極其匱乏, 從干渠輸水安全的角度考慮[3,4], 研究水工構(gòu)筑物對著生藻類群落的影響具有重要意義。

為深入認識水工構(gòu)筑物對著生藻類的影響, 本研究選取干渠內(nèi)最大的渡槽——沙河渡槽(槽體長11.9 km)和最大涵管——穿黃工程(管線長19.3 km)進行著生藻類群落的原位調(diào)查監(jiān)測, 通過16S rDNA和18S rDNA測序了解群落結(jié)構(gòu)狀況, 認識大型渡槽和大型涵管對著生藻類群落結(jié)構(gòu)的影響, 確認了這種影響主要表現(xiàn)在優(yōu)勢種和群落生物量的顯著差異上, 反映了著生藻類群落對水工構(gòu)筑物的響應(yīng),為認識中線總干渠著生藻類群落特征及其對水工構(gòu)筑物的響應(yīng)提供了依據(jù), 并為著生藻類生態(tài)風(fēng)險的防控提供支撐。

1 材料與方法

1.1 采樣位點與采樣保存方法

樣品采集于2018年10月, 基于研究目的, 根據(jù)輸水構(gòu)筑物結(jié)構(gòu)形態(tài)變化共設(shè)置8個采樣位點, 分別位于沙河渡槽上游明渠、沙河渡槽入口、沙河渡槽中點、沙河渡槽出口、穿黃工程入口、穿黃工程出口、穿黃工程下游明渠和穿黃工程下游沁河倒虹吸(由南至北, 其中沙河渡槽中點由于水流速度快、垂直內(nèi)壁, 壁上未能發(fā)現(xiàn)足夠的著生藻類群落, 故該位點數(shù)據(jù)不列入本文討論), 剩下的7個點由南至北分別編號: 沙河渡槽渠段的P1、P2和P3, 穿黃工程前的P4，穿黃工程后的P5、P6和P7(圖1)。對每個樣點進行表層水樣和著生藻類樣品的采集, 并對水體理化參數(shù)進行現(xiàn)場同步測定。

圖1 采樣位點分布Fig. 1 Location of sampling site

水樣采集與保存方法: 在各點利用采水器將渠水收集至岸邊后, 分裝入4個500 mL塑料樣品瓶中,然后放入4℃冰箱保存。

著生藻類樣品采集與保存方法: 在各樣點的渠道邊坡上著生藻類生長區(qū)域(選擇距離水面20—50 cm的區(qū)域), 利用小鐵鏟、小刀與牙刷刮取5塊10 cm2的著生藻類樣品, 將這5塊樣品放入白瓷盤中加適量純水?dāng)嚢杈鶆? 分為三等分, 其中2份分別裝入凍存管, 編號用鋁箔紙包裹好置于液氮中速凍保存, 帶回實驗室后放入–80℃冰箱保存, 用于提取DNA。

1.2 水質(zhì)指標(biāo)的分析方法

采用YSI(556MPS, USA)現(xiàn)場監(jiān)測水樣的溫度(T)、pH、電導(dǎo)率(SPC)和溶解氧(DO)等理化參數(shù)。水樣采用GF/C膜過濾, 總磷(TP)和正磷酸鹽測定利用鉬酸銨分光光度法; 硝酸鹽氮測定利用紫外分光光度法; 氨氮(NH3-N)測定利用納氏試劑分光光度法; 總氮(TN)測定利用過硫酸鉀氧化分光光度法, 高錳酸鉀指數(shù)(CODMn)測定利用高錳酸鉀消解滴定法。

1.3 測序分析

DNA提取與測序方法: 樣品過濾并收集濾膜,用預(yù)先經(jīng)75%酒精擦拭過的醫(yī)用剪刀剪碎后, 利用QiagenDNeasy Blood & Tissue Kit試劑盒(Qiagen, CA,USA)提取微生物總DNA。提取的DNA經(jīng)紫外分光光度計和1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測濃度及純度后,–20℃保存?zhèn)溆?。提取完成后利用細菌引?38F(5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′)、806R(5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′)和3NDF(5′-GGCAAGTCTGGTGCCAG-3′)、V4_euk_R2(5′-ACGGTATCT(AG)ATC(AG)TCTTCG-3′)構(gòu)建Illumina HiSeq高通量測序PCR擴增文庫[5]。利用軟件QIIME, 對得到的序列進行篩選, 以確保有效性。

數(shù)據(jù)分析方法: 對原始的分子序列進行質(zhì)量過濾和修剪后, 將所得序列按97%相似度劃分OTU,基于OTU數(shù)據(jù)進一步計算反映著生藻類群落豐富度的Sobs、Chao和Ace指數(shù); 反映群落多樣性的Shannon和Simpson指數(shù); 反映群落覆蓋度的Coverage指數(shù)。

分類學(xué)分析: 為得到每個OTU對應(yīng)的物種分類信息, 采用RDP classifier貝葉斯算法對97%相似水平的OTU代表序列進行分類學(xué)分析, 通過與Silva數(shù)據(jù)庫進行比對獲得每個OTU對應(yīng)的物種分類信息,分別在門(Phylum)、綱(Class)、目(Order)、科(Family)、屬(Genus)和種(Species)的水平上進行計群落物種組成的統(tǒng)計。

1.4 數(shù)據(jù)整理與統(tǒng)計分析方法

使用Past 3.0計算著生藻類群落Alpha多樣性指數(shù)。使用Origin 9.0繪制著生藻類群落結(jié)構(gòu)。在R 4.0.0環(huán)境下使用vegan包進行非加權(quán)組平均法(Unweighted pair-group method with arithmetic means,UPGMA)聚類、非度量多維尺度分析(Non-metric multidimensional scaling, NMDS)和相似性分析(Analysis of similarities, ANOSIM), 比較位點間著生藻類群落結(jié)構(gòu)的相似性。使用CANOCO 4.5進行冗余分析(Redundancy analysis, RDA), 分析著生藻類、理化因子與位點間的相關(guān)關(guān)系。使用SPSS 20.0計算優(yōu)勢種與理化因子間的相關(guān)系數(shù), 并在R 4.0.0環(huán)境下使用pheatmap包繪制為相關(guān)性熱圖。

2 結(jié)果

2.1 水體理化參數(shù)

如表1所示, P3與P5的濁度與流速同其他點位有顯著差異(P<0.05)。

表1 各位點的水體理化指標(biāo)檢測結(jié)果Tab. 1 Physical and chemical testing results of water quality at each site

2.2 著生藻類的物種豐富度與多樣性

如表2所示, 所有樣本coverage均在99%以上,說明這些樣本可代表位點的大部分著生藻類物種。藍藻的Chao1和Ace指數(shù)在P3和P6點較低, 真核藻類的Chao1和Ace指數(shù)在P3和P5點較低。從Shannon指數(shù)來看, 藍藻: 渡槽后P3位點Shannon指數(shù)低于渡槽前的P2位點, 穿黃工程后P5位點Shannon指數(shù)高于穿黃工程其他3個位點的Shannon指數(shù);真核藻類: 渡槽后P3位點Shannon指數(shù)低于渡槽前P2位點, 穿黃工程后P5位點Shannon指數(shù)低于穿黃工程前P4位點的Shannon指數(shù)。

表2 著生藻類群落Alpha多樣性指數(shù)Tab. 2 Alpha diversity index of Periphyticalgal communities

2.3 著生藻類群落

對著生藻類測序所得原始分子序列進行質(zhì)控過濾后, 分別獲得16S rDNA和18S rDNA基因的clean reads, 分別包含17599和20094個reads。對reads按97%相似度進行聚類獲得OUT, 并通過與Silva數(shù)據(jù)庫比對獲得每個OTU對應(yīng)的物種分類信息。

藍藻共比對出23屬, 各位點屬水平的藍藻組成見圖2a和圖2b。比較reads總量, 沙河渡槽前后3位點中, P2最低, P1較高, P3最高; 穿黃工程前后各位點中P5最低, P4較高, P6和P7最高, P1—P5位點reads總量與鞘絲藻(Leptolyngbyasp.)reads數(shù)量相關(guān)性顯著(P<0.05), P6和P7兩位點reads總量與膠須藻(Rivulariasp.)reads數(shù)量相關(guān)性顯著(P<0.05; 圖2a)。所有樣點中均存在的優(yōu)勢種包括: 鞘絲藻(Leptolyngbyasp.)、聚球藻(Synechococcussp.)、眉藻(Calothrixsp.)、席藻(Phormidiumsp.)、集胞藻(Synechocystissp.)和擬色球藻(Chroococcidiopsissp.)等, 這些優(yōu)勢種在各位點的相對豐度分別為70.9%、6.0%、5.0%、2.9%、1.2%和1.1%, 其中鞘絲藻(Leptolyngbyasp.)在各位點保持優(yōu)勢地位, P6與P7兩點膠須藻(Rivulariasp.)相對豐度由6.2%增至61.8%, 占據(jù)優(yōu)勢地位, 聚球藻(Synechococcussp.)在P5處相對豐度明顯高于其他位點。

真核藻類共比對出15門79屬, 各位點屬水平的真核藻類組成見圖2c和圖2d。比較reads總量, 沙河渡槽前后3位點中, P2最高, P3較低, P1最低; 穿黃工程前后各位點中P5和P7較低, P4和P6較高(圖2c)。根據(jù)相對豐度數(shù)據(jù), P1至P2位點鏈帶藻(Desmodesmussp.)由48.4%降至2.8%、針桿藻(Synedrasp.)由20.8%增至52.4%、肘形藻(Ulnariasp.)由20.9%增至37.2%; P2至P3位點鏈帶藻(Desmodesmussp.)由26.4%增至77.4%、針桿藻(Synedrasp.)由10.4%降至0.4%、肘形藻(Ulnariasp.)由2.3%降至0.4%?？傮w上, 7個位點占優(yōu)勢的真核藻類包括鏈帶藻(Desmodesmussp.)、土佐牧野藻(Makinoellasp.)、芒球藻(Radiococcussp.)、盤星藻(Monactinussp.)、卵囊藻(Oocystellasp.)、菱形藻(Nitzschiasp.)、針桿藻(Synedrasp.)和肘形藻(Ulnariasp.)等。

圖2 著生藻類屬水平豐度Fig. 2 Periphytic algae abundance on genus level

由圖3可知, 非加權(quán)組平均法聚類結(jié)果和非度量多維標(biāo)度分析的排序結(jié)果基本一致。從藍藻群落結(jié)構(gòu)聚類和排序結(jié)果來看, 分為P1和P2、 P3和P4、P5、P6和P7四組(圖3a和圖3c)。從真核藻類群落結(jié)構(gòu)聚類和排序結(jié)果來看, 分為P1、P2和P3;P4、P5、P6和P7兩組(圖3b和圖3d)。從相似性分析(ANOSIM)結(jié)果來看, 藍藻群落結(jié)構(gòu)在沙河渡槽位點和穿黃工程位點組內(nèi)差異較大, 組間差異不顯著(P>0.05; 圖3e); 真核藻類群落結(jié)構(gòu)在沙河渡槽位點和穿黃工程位點組內(nèi)差異較小, 沙河渡槽位點組內(nèi)差異小于穿黃工程位點組內(nèi)差異, 兩組組間差異顯著(P<0.05; 圖3f)。

圖3 群落相似性Fig. 3 Similarity of community

2.4 著生藻類與環(huán)境因子的相關(guān)性分析

對著生的藍藻物種進行去趨勢對應(yīng)分析(DCA),結(jié)果顯示Length of gradient均小于3, 故采用RDA進行物種與環(huán)境因子的分析。RDA分析結(jié)果顯示4個排序軸對物種與環(huán)境因子關(guān)系的累計方差為84.5%,累計解釋量為65.1%。

由圖4a可知, P1和P2位點呈現(xiàn)一定的相似性,均受氨氮、電導(dǎo)率和陽離子交換量的影響; P4、P6和P7位點呈現(xiàn)一定的相似性, 受溶氧、pH和高錳酸鉀指數(shù)影響較為明顯; P3和P5位點與其他5個樣點相似性較低, 其中P3受硝酸鹽氮、水溫、總氮和流速影響較為明顯, P5與濁度、葉綠素a和流速相關(guān)性較高?？傮w來看兩個水工構(gòu)筑物各自的出口位點與其他位點差異較為明顯, 其中P5與穿黃工程其他3個位點的差異更為明顯。

由圖4b可知，在屬水平上, 擬色球藻(Chroococcidiopsissp.)、節(jié)旋藻(Arthrospirasp.)、蓋絲藻(Geitlerinemasp.)與電導(dǎo)率、氨氮呈正相關(guān)。眉藻(Calothrixsp.)、寬球藻(Pleurocapsasp.)與陽離子交換量正相關(guān)。綠球藻(Gleocapsasp.)、微囊藻(Microcystissp.)、集胞藻(Synechocystissp.)與葉綠素a、pH呈正相關(guān)。聚球藻(Synechococcussp.)與水溫、流速、濁度呈正相關(guān)。細鞘絲藻(Leptolyngbyasp.)、膠須藻(Rivulariasp.)、席藻(Phormidiumsp.)與硝酸鹽氮、總氮、水溫呈負相關(guān)。管胞藻(Chamaesiphonsp.)、微鞘藻(Microcoleussp.)與溶解氧、pH、高錳酸鉀指數(shù)呈負相關(guān)。

對著生的真核藻類物種進行去趨勢對應(yīng)分析(DCA), 結(jié)果顯示Length of gradient均小于3, 故采用RDA進行物種與環(huán)境因子的分析。RDA分析結(jié)果顯示4個排序軸對物種與環(huán)境因子關(guān)系的累計方差為85.3%, 累計解釋量為62.5%。

由圖4c可知, P1、P2和P4位點呈現(xiàn)一定的相似性, 受各形態(tài)氮和電導(dǎo)率影響較為明顯, 其中P1同時還受電導(dǎo)率和陽離子交換量影響; P3、P5和P7位點呈現(xiàn)一定的相似性, 與流速和濁度相關(guān)性高;P6位點與其他6個樣點差異較為明顯, 受pH、葉綠素a和高錳酸鉀指數(shù)影響較為明顯。

由圖4d可知，在屬水平上, 四環(huán)藻(Tetracyclussp.)與溶解氧、pH呈正相關(guān)。鏈帶藻(Desmodesmussp.)、芒球藻(Radiococcussp.)與流速、濁度呈正相關(guān)。水綿(Spirogyrasp.)、針桿藻(Synedrasp.)、肘形藻(Ulnariasp.)與水溫、形態(tài)氮呈正相關(guān)。海鏈藻(Thalassiosirasp.)、菱形藻(Nitzschiasp.)與正磷酸鹽、高錳酸鉀指數(shù)呈正相關(guān)。芒球藻(Radiococcussp.)、土佐牧野藻(Makinoellasp.)與水溫、形態(tài)氮呈負相關(guān)。擬內(nèi)絲藻(Encyonopsissp.)、橋彎藻(Cymbellasp.)、鞍型藻(Sellaphorasp.)、舟形藻(Naviculasp.)與流速、濁度呈負相關(guān)。

圖5a為主要藍藻與環(huán)境因子相關(guān)性熱圖, 聚球藻(Synechococcussp.)與濁度、流速顯著正相關(guān), 眉藻(Calothrixsp.)與陽離子交換量顯著正相關(guān), 細鞘絲藻(Leptolyngbyasp.)與氨氮、總氮、硝酸鹽氮顯著負相關(guān), 與總磷顯著正相關(guān)。圖5b為主要真核藻類與環(huán)境因子相關(guān)性熱圖, 針桿藻(Synedrasp.)與總氮、硝酸鹽氮正相關(guān), 相關(guān)性分析結(jié)果與圖4中的RDA分析結(jié)果相吻合, 證明相關(guān)性分析結(jié)果的可靠性高。

圖4 著生藻類RDA分析Fig. 4 Redundancy analysis of Periphytic algae

圖5 主要著生藻類與環(huán)境變量相關(guān)性熱圖Fig. 5 Correlationheatmap between periphytic algae and environment variable

3 討論

3.1 著生藻類群落特征

著生藻類建群過程可歸納為5步: (1)顆粒態(tài)或者溶解有機物依靠靜電吸附于基質(zhì)上; (2)細菌開始生長, 為其他有機體附著生長提供條件; (3)羽紋綱硅藻吸附到母體基質(zhì)上; (4)直立的、短莖或者長莖的藻菌以蓮座狀或者黏質(zhì)狀著生在基質(zhì)上; (5)著生的是直立的絲狀藻類或紅藻[6,7]。本研究顯示, 沙河渡槽或穿黃工程的著生藻類群落群落既有藍藻又有真核藻類, 絲狀藻類為常見種類。由此可見,中線干渠經(jīng)過約3年的輸水運行, 著生藻類群落生物膜已處于成熟階段。

不同著生藻類群落具有不同特征[8], 可根據(jù)著生藻類群落的顏色、生長形式、持續(xù)的儲存速率和光合作用特征對其進行分類: 黑色群落、褐色群落、綠色群落和綠色絲狀藻類群落[9,10]。沙河渡槽和穿黃工程的著生藻類群落生長在深度小于等于0.5 m的光照充足的岸邊, 生長迅速, 生物量豐富,具有明顯的綠色絲狀藻類群落特征, 是生長迅速的藻類類群, 尤其在溫度適宜的春夏交加季節(jié)及秋冬交加季節(jié), 值得引起注意。

類似的河流型水體著生藻類群落動態(tài)一直受到學(xué)者的關(guān)注; Nicolli等[2]研究發(fā)現(xiàn)自然水體中的生境復(fù)雜性會影響著生藻類的物種多樣性、結(jié)構(gòu)多樣性和功能多樣性; Medeiros等[11]發(fā)現(xiàn)在理化因子和水流情況共同作用下同一河流的上游與下游的著生藻類差異顯著。Shevchenko等[12]發(fā)現(xiàn)在一座水庫及所在河流的不同水域由于流速、水位波動和風(fēng)力驅(qū)動波浪不同, 著生藻類物種組成發(fā)生變化, 細胞密度和生物量差異顯著。在本研究中不同位點的物種多樣性變化明顯, 渡槽前位點的藍藻物種多樣性高于渡槽后, 穿黃工程后藍藻物種多樣性高于穿黃工程前, 兩個構(gòu)筑物入口前的位點的真核藻類生物多樣性高于各自出口后的位點。沿程不同位點的群落結(jié)構(gòu)相似程度較低, 其中藍藻群落結(jié)構(gòu)各點間相似程度較低; 真核藻類群落結(jié)構(gòu)在渡槽位點相似程度高, 在穿黃工程位點相似程度低。這說明不同形態(tài)水體中著生藻類群落具有顯著的空間差異。

3.2 水工構(gòu)筑物對著生藻類的影響

本研究顯示, 位點間著生藻類群落結(jié)構(gòu)存在顯著差異, 體現(xiàn)了明顯的空間異質(zhì)性特征, 說明水工構(gòu)筑物對著生藻類群落的影響顯著。

沙河渡槽中流速是變化最明顯的因素。渡槽入口流速大于上游明渠, 較高的流速維持至渡槽出口。原設(shè)計位點沙河渡槽中點垂直內(nèi)壁上著生藻類極少, 說明渡槽的高流速與垂直內(nèi)壁對著生藻類生長存在抑制, 抑制原因可能是: 高流速使著生穩(wěn)定性較弱的藻類脫落, 削減著生藻類原有生物量,破壞了適宜著生藻類附著的緩流狀態(tài), 增大了新生著生藻類完成附著的難度, 降低浮游藻類被著生藻類攔截幾率, 削減著生藻類生物量的增長[12—14]。渡槽出口流速相較于渡槽中減小, 著生藻類相較渡槽中明顯增加, 說明減緩的流速適宜著生藻類群落生長。

穿黃工程對沿渠流速影響較小, 對出口處水位穩(wěn)定性影響更顯著。穿黃出口水流從渠底部涌向水面, 出口處水流周期性上下起伏, 使穿黃出口水流條件與其他位點差異明顯。穿黃出口絲狀藍藻相對豐度低于其他各點絲狀藍藻相對豐度, 有研究發(fā)現(xiàn)絲狀藍藻著生穩(wěn)定性易受到水流條件的影響[15,16], 說明穿黃出口水流起伏對著生藍藻的生長存在抑制, 特別是對絲狀藍藻的著生存在影響。

有研究發(fā)現(xiàn)相似的水質(zhì)理化因子使著生藻類群落結(jié)構(gòu)趨于相似[17,18]。穿黃出口下游明渠與穿黃出口下游沁河倒虹吸的水質(zhì)理化因子無顯著差異(P>0.05), 但這兩個位點的真核藻類群落結(jié)構(gòu)差異顯著(P<0.05), 說明兩位點間的真核藻類群落結(jié)構(gòu)差異不僅僅受水質(zhì)理化因子影響。導(dǎo)致上述兩位點間真核藻類群落結(jié)構(gòu)差異的原因是: 穿黃出口被沖刷脫落裹挾至穿黃出口下游明渠的藻類較多,其中硅藻細胞結(jié)構(gòu)強度較大[19], 更容易在穿黃出口至穿黃出口下游明渠渠段存活、遷移, 穿黃出口下游明渠水流起伏減小, 部分硅藻通過沉降或被攔截落入著生藻類中, 使得穿黃出口下游明渠硅藻豐度增加, 真核藻類群落結(jié)構(gòu)與相鄰位點差異顯著。

綜上, 不同水工構(gòu)筑物對著生藻類的影響存在差異, 水工構(gòu)筑物對藍藻和真核藻類的影響存在差異, 水工構(gòu)筑物通過影響水流條件和水質(zhì)理化因子對著生藻類產(chǎn)生影響。

4 結(jié)論

(1)兩種構(gòu)筑物前后著生的藍藻優(yōu)勢種:Leptolyngbyasp.、Synechococcussp.、Calothrixsp.、Phormidiumsp.、Synechocystissp.和Chroococcidiopsissp.; 著生真核藻類優(yōu)勢種:Desmodesmussp.、Makinoellasp.、Radiococcussp.、Monactinussp.、Oocystellasp.、Nitzschiasp.、Synedrasp.和Ulnariasp.。(2)沙河渡槽與穿黃工程著生藻類群落結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)明顯的空間異質(zhì)性, 不同水工構(gòu)筑物對著生藻類的影響存在差異, 水工構(gòu)筑物對藍藻和真核藻類的影響存在差異, 兩個水工構(gòu)筑物通過影響水流條件和水質(zhì)理化因子對著生藻類群落發(fā)揮顯著的影響。

致謝:

感謝南水北調(diào)中線管理局沙河渡槽管理處和魯山管理處為本研究提供的大力協(xié)助和支持; 感謝博士生黃順對本研究野外工作的協(xié)助。