宮存杞

濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院，山東 濟(jì)寧272000

膽汁酸是膽固醇在肝臟分解代謝的產(chǎn)物，膽汁是由肝臟分泌到膽汁中，并隨膽汁排入腸腔。膽汁酸的生產(chǎn)和代謝與肝臟有十分密切的關(guān)系。當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生病變時(shí)，血清總膽汁酸升高，因而血清總膽汁酸水平是反映肝實(shí)質(zhì)損害的一項(xiàng)重要指標(biāo)［1］。總膽汁酸的準(zhǔn)確測(cè)定對(duì)指導(dǎo)臨床具有重要意義，本研究采用美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)制定的相關(guān)指南，對(duì)德賽診斷系統(tǒng)有限公司生產(chǎn)的總膽汁酸測(cè)定試劑盒的精密度、正確度、線性范圍、生物參考區(qū)間等進(jìn)行驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 德賽診斷系統(tǒng)有限公司生產(chǎn)的總膽汁酸測(cè)定試劑盒，校準(zhǔn)品（批號(hào)：00045）均為同一批次。全自動(dòng)生化分析儀（羅氏8000）。樣本來(lái)源：門診患者2例及健康體檢者20例。

1.2 方法

1.2.1 精密度的驗(yàn)證。用兩個(gè)濃度的患者標(biāo)本（11μmol/L、100μmol/L）進(jìn)行精密度驗(yàn)證，具體方案依據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)的EP15-A2方案［2］。

1.2.2 正確度驗(yàn)證。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有條件，采用濃度為22.5μmol/L、45.0μmol/L的校準(zhǔn)品作為樣本，采用EP15-A2方案［2］，每天分別重復(fù)測(cè)試2個(gè)水平濃度標(biāo)本5次，連續(xù)檢測(cè)5天，分別計(jì)算每個(gè)濃度25個(gè)測(cè)量值總均值及相對(duì)偏差。判斷相對(duì)偏差是否在實(shí)驗(yàn)室允許范圍之內(nèi)。

1.2.3 線性范圍驗(yàn)證。采用EP6-A［3］文件方案進(jìn)行線性范圍的評(píng)價(jià)。收集兩個(gè)濃度的血清標(biāo)本，分別為低濃度樣本（L，2μmol/L）、高濃度樣本（H，182μmol/L），分別按照低濃度樣本（L）、0.75L+0.25H、0.50L+0.50H、0.25L+0.75H、高濃度樣本（H）配制五個(gè)不同濃度的標(biāo)本，每個(gè)濃度標(biāo)本檢測(cè)兩次，求平均值，計(jì)算預(yù)測(cè)值與測(cè)量值之間的相關(guān)系數(shù)，若相關(guān)系數(shù)≥0.95，說(shuō)明預(yù)期值與測(cè)量值之間相關(guān)性極好。

1.2.4 生物參考區(qū)間的驗(yàn)證。隨機(jī)抽取20例健康查體檢本為測(cè)試對(duì)象，均為查體后排除其它常見性疾病的標(biāo)本，在生化分析儀上檢測(cè)總膽汁酸，驗(yàn)證方法參考CLSI SC28-3［4］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用Excel 2019進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 精密度驗(yàn)證 采用EP15-A2方案，測(cè)定高低兩個(gè)濃度的患者標(biāo)本，共得到30個(gè)結(jié)果，分別計(jì)算批內(nèi)、批間CV（100%），結(jié)果均低于廠家聲明的精密度。見表1。

表1 總膽汁酸試劑批內(nèi)及批間精密度結(jié)果（%）

2.2 正確度驗(yàn)證 采用濃度為22.5μmol/L、45μmol/L的校準(zhǔn)品作為樣本，每天測(cè)量一個(gè)批次，每個(gè)樣本測(cè)量4次，共檢測(cè)5天。將計(jì)算值與靶值比較，計(jì)算偏倚，結(jié)果見表2。數(shù)據(jù)顯示總膽汁酸試劑的偏倚結(jié)果在實(shí)驗(yàn)室允許氛圍內(nèi)。

表2 總膽汁酸試劑正確度驗(yàn)證結(jié)果

2.3 線性范圍驗(yàn)證 根據(jù)EP6-A文件進(jìn)行線性回歸分析，回歸曲線見圖1?；貧w系數(shù)為0.9999，符合試劑盒聲明的要求范圍。

圖1 線性范圍驗(yàn)證

2.4 生物參考區(qū)間驗(yàn)證 選擇20份健康人樣本進(jìn)行總膽汁酸檢測(cè)，結(jié)果見表3，與廠家提供的參考范圍（1～10μmol/L）進(jìn)行比較，僅有兩人超出范圍，符合臨床使用要求。

表3 參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果

3 討論

膽汁酸是膽汁中固體物質(zhì)含量最多的一種，是膽固醇代謝最終產(chǎn)物，是一類膽烷酸的總稱。血清總膽汁酸水平反映肝實(shí)質(zhì)性損傷，是肝病實(shí)驗(yàn)室診斷的一項(xiàng)重要指標(biāo)。試劑的良好性能是保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠的前提。本研究采用美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)制定的相關(guān)指南對(duì)德賽診斷系統(tǒng)有限公司生產(chǎn)的總膽汁酸測(cè)定試劑盒的精密度、正確度、線性范圍、生物參考區(qū)間等進(jìn)行驗(yàn)證。

精密度是指在規(guī)定條件下獲得的相互獨(dú)立的測(cè)量結(jié)果之間的一致程度，精密度通常以不精密度來(lái)度量，如標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。本研究用兩個(gè)濃度的患者標(biāo)本進(jìn)行精密度的驗(yàn)證，兩個(gè)濃度的樣本批間CV分別為1.02%、1.09%，低于廠家聲明的1.75%，批間CV分別為1.20%、1.37%，低于廠家聲明的1.93%。

用于線性范圍驗(yàn)證的標(biāo)本應(yīng)盡可能覆蓋整個(gè)線性范圍，配制五個(gè)不同濃度的標(biāo)本，每個(gè)標(biāo)本檢測(cè)兩次并求平均值，對(duì)理論值和檢測(cè)值進(jìn)行線性回歸分析，R2=0.9999大于允許的0.995，表面試劑盒的線性范圍符合要求。

本研究采用20例健康者標(biāo)本來(lái)驗(yàn)證，結(jié)果只有2例不在區(qū)間內(nèi)，因此可以接受本試劑盒提供的參考區(qū)間。綜上所述，總膽汁酸試劑盒性能和廠家聲明的一致，檢測(cè)系統(tǒng)具有良好的精密度、準(zhǔn)確度、線性范圍，可以用于臨床分析。