顧志堅(jiān)，林江，叢軍

1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院，上海 200021；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院，上海 200032

芍藥甘草湯是臨床治療便秘的常用方劑［1-2］。研究發(fā)現(xiàn)，該方具有瀉下作用，且引起瀉下作用的藥物主要是芍藥［3］，其作用機(jī)制可能是促進(jìn)大、小腸的推進(jìn)運(yùn)動(dòng)，使大腸黏液分泌增多，腸道含水量增加［4］。眾所周知，現(xiàn)代臨床應(yīng)用中芍藥有白芍、赤芍之分，且根據(jù)有無炮制分為生品和炒品，但在魏晉以前并無此說，至金代成無己《注解傷寒論》芍藥甘草湯方后注云：“白補(bǔ)而赤瀉，白收而赤散”，赤芍、白芍分用才漸為公認(rèn)。目前為止，關(guān)于赤、白芍的通便作用及其差異尚未有報(bào)道。為了進(jìn)一步明確不同品種、炮制方法和劑量的芍藥的通便作用是否存在差異，本實(shí)驗(yàn)采用復(fù)方地芬諾酯誘導(dǎo)的慢性功能性便秘大鼠模型進(jìn)行研究，以期為擴(kuò)大芍藥的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物清潔級雄性SD大鼠，4～6周齡，體質(zhì)量150～200 g，分三批購自上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號：SYXK（滬）2016-0004，合格 證 號 為：20130016003327、20130016005315、20130016006594。溫度25℃，相對濕度50%～70%，避強(qiáng)光、清潔安靜環(huán)境下適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。本研究獲上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，批準(zhǔn)號：2016-484-35-01。

1.2 藥品與試劑生赤芍（北京本草方源藥業(yè)集團(tuán)有限公司，產(chǎn)地：內(nèi)蒙古，批號：20180110）；生白芍（北京本草方源藥業(yè)集團(tuán)有限公司，產(chǎn)地：安徽，批號：20171112）；炒赤芍（上?？禈蛑兴庯嬈邢薰?，產(chǎn)地：內(nèi)蒙古，批號：171026）；復(fù)方地芬諾酯片（每片含鹽酸地芬諾酯2.5 mg，硫酸阿托品0.025 mg，常州康普藥業(yè)有限公司，批號：1701023）。

2 方法

2.1 分組與給藥動(dòng)物分組：①不同品種芍藥通便作用比較：24只大鼠按照體質(zhì)量分成4組，即空白組、模型組、生赤芍高劑量組和生白芍高劑量組；②不同炮制方法的芍藥的通便作用比較：24只大鼠按照體質(zhì)量分成4組，即空白組、模型組、生赤芍高劑量組、炒赤藥高劑量組；③不同劑量芍藥的通便作用比較：30只大鼠按照體質(zhì)量分成5組，即空白組、模型組、生赤芍低劑量組、生赤芍中劑量組和生赤芍高劑量組。動(dòng)物給藥方法：以15 mg·kg-1劑量給予大鼠灌胃復(fù)方地芬諾酯，每日1次，持續(xù)14 d，建立慢性功能性便秘大鼠模型［5］，空白組給予等體積生理鹽水。芍藥用量按《傷寒論》芍藥甘草湯四兩為中劑量，其中單位“兩”使用柯雪帆教授觀點(diǎn)進(jìn)行折算，即中劑量約為60 g。大鼠給藥劑量按照標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物等效劑量折算系數(shù)法計(jì)算［6］，求得中劑量為5.4 g·kg-1·d-1，則低劑量為2.7 g·kg-1·d-1、高劑量為10.8 g·kg-1·d-1。造模7 d后，開始給予藥物干預(yù)，生赤芍低、中、高劑量組分別灌胃給予2.7 g·kg-1、5.4 g·kg-1和10.8 g·kg-1生赤芍濃煎液，生白芍高劑量組及炒赤芍高劑量組分別灌胃給予生白芍及炒赤芍濃煎液10.8 g·kg-1，每日1次，持續(xù)7 d。空白組和模型組灌胃給予等量生理鹽水。

2.2 觀察指標(biāo)飼養(yǎng)期間，觀察大鼠的一般情況，并記錄大鼠給藥前后的糞便粒數(shù)、糞便質(zhì)量及糞便含水量。稱取大鼠當(dāng)天一次性排泄的新鮮濕糞的質(zhì)量，用電熱恒溫培養(yǎng)箱烘烤3 h后稱干糞質(zhì)量。

糞便含水量＝（濕糞質(zhì)量-干糞質(zhì)量）/濕糞質(zhì)量×100%

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 21軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，并進(jìn)行兩兩LSD檢驗(yàn)，組間多重比較采用Dunnett檢驗(yàn)，兩組間比較采用獨(dú)立t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 不同品種的芍藥通便作用比較與空白組比較，造模后大鼠出現(xiàn)活動(dòng)減少和炸毛現(xiàn)象，體質(zhì)量增長緩慢，部分大鼠進(jìn)食量、尿量減少；與模型組比較，給予生赤芍和生白芍后大鼠尿量增加。與空白組比較，造模后大鼠的糞便粒數(shù)、糞便質(zhì)量和糞便含水量顯著降低（P＜0.05）；與模型組相比，治療后生赤芍高劑量組大鼠的糞便粒數(shù)、糞便質(zhì)量及糞便含水量均顯著增加（P＜0.05），而生白芍高劑量組大鼠的糞便粒數(shù)、糞便質(zhì)量及糞便含水量無明顯變化（P＞0.05）。與造模7 d后比較，治療后生赤芍高劑量組糞便粒數(shù)、重量和含水量均顯著增加（P＜0.05），生白芍高劑量組糞便含水量增加（P＜0.05），其余指標(biāo)均無明顯變化。結(jié)果見表1。

表1 不同品種芍藥通便作用的比較 （±s，n＝6）

表1 不同品種芍藥通便作用的比較 （±s，n＝6）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，＃P＜0.05；與同時(shí)期生赤芍高劑量組比較，△P＜0.05

組別 糞便粒數(shù)/粒糞便質(zhì)量（m/g ）糞便含水量7 d空白組 58.50±6.19 59.67±4.84 6.85±0.62 7.70±0.65 4造模7 d后 治療7 d 造模7 d后 治療7 d/%造模7 d后 治療6.57±3.46 46.43±4.13模型組 37.17±7.94* 38.17±2.14 4.90±1.11* 5.08±0.42 36.92±2.79* 38.87±2.06生白芍高劑量組 40.17±4.21* 38.50±3.20△ 5.43±0.68* 5.18±0.48△ 35.28±4.92* 41.33±3.36生赤芍高劑量組 39.50±5.17* 47.17±4.53＃ 5.33±0.70* 6.62±0.65＃ 34.45±4.28* 43.26±2.81＃

3.2 不同炮制方法的芍藥通便作用比較與空白組比較，造模后大鼠出現(xiàn)活動(dòng)減少和炸毛現(xiàn)象，體質(zhì)量增長緩慢，部分大鼠出現(xiàn)進(jìn)食量、尿量減少；與模型組比較，給予生赤芍和炒赤芍后大鼠尿量增加。與空白組比較，造模后大鼠的糞便粒數(shù)、糞便質(zhì)量和糞便含水量均顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，生赤芍高劑量組大鼠的糞便粒數(shù)、糞便質(zhì)量及糞便含水量均顯著升高（P＜0.05），而炒赤芍高劑量組大鼠各指標(biāo)均無明顯變化（P＞0.05）。與造模7 d后比較，治療后生赤芍高劑量組糞便粒數(shù)、重量和含水量均顯著增加（P＜0.05），炒赤芍高劑量組糞便含水量增加（P＜0.05），其余指標(biāo)無明顯變化。結(jié)果見表2。

表2 不同炮制方法赤芍的通便作用比較 （±s，n＝6）

表2 不同炮制方法赤芍的通便作用比較 （±s，n＝6）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，＃P＜0.05；與同時(shí)期生赤芍高劑量組比較，△P＜0.05

組別 糞便粒數(shù)/粒糞便質(zhì)量（m/g ）糞便含水量7 d空白組 52.17±6.18 53.17±7.11 6.08±0.86 6.25±1.10 4造模7 d后 治療7 d 造模7 d后 治療7 d/%造模7 d后 治療7.38±3.72 45.92±3.35模型組 36.00±3.52* 37.33±3.08 4.73±0.48* 4.77±0.35 36.66±3.96* 38.53±2.18炒赤芍高劑量組 36.33±3.39* 37.67±2.16△ 4.70±0.38* 4.55±0.40△ 36.52±2.97* 40.03±3.39生赤芍高劑量組 35.50±2.35* 42.17±1.94＃ 4.47±0.39* 5.21±0.31＃ 37.93±2.00* 42.84±2.87＃

3.3 不同劑量芍藥的通便作用比較造模后大鼠出現(xiàn)活動(dòng)減少和炸毛現(xiàn)象，體質(zhì)量增長緩慢，部分大鼠出現(xiàn)進(jìn)食量、尿量減少；與模型組比較，給予中劑量和高劑量生赤芍后大鼠尿量增加。與空白組比較，造模后大鼠的糞便粒數(shù)、糞便質(zhì)量和糞便含水量均顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，治療后生赤芍低劑量組大鼠的各指標(biāo)均無明顯改善（P＞0.05）；生赤芍中劑量組大鼠的糞便含水量顯著升高（P＜0.05），糞便粒數(shù)和糞便質(zhì)量無明顯改善（P＞0.05）；生赤芍高劑量組大鼠的糞便粒數(shù)、糞便質(zhì)量及糞便含水量均顯著升高（P＜0.05）。與造模7 d后比較，治療后生赤芍中劑量組糞便含水量顯著增加（P＜0.05）；生赤芍高劑量組糞便粒數(shù)、重量和含水量差異均顯著增加（P＜0.05）。結(jié)果見表3。

表3 不同劑量生赤芍的通便作用比較 （±s，n＝6）

表3 不同劑量生赤芍的通便作用比較 （±s，n＝6）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，＃P＜0.05；與同時(shí)期生赤芍高劑量組比較，△P＜0.05

組別 糞便粒數(shù)/粒糞便質(zhì)量（m/g ）糞便含水量7 d空白組 51.83±6.94 50.33±11.43 6.40±0.81 6.51±1.32造模7 d后 治療7 d 造模7 d后 治療7 d/%造模7 d后 治療48.24±4.68 46.39±3.80模型組 32.67±2.73* 35.67±4.23 4.26±0.44* 4.46±0.54 36.00±3.15* 36.03±3.46生赤芍低劑量組 30.33±1.51* 36.00±5.69△ 3.79±0.45* 4.41±0.57△ 35.41±3.42* 38.86±2.86生赤芍中劑量組 31.33±7.53* 39.83±10.15 4.03±1.10* 4.76±1.03△ 35.42±3.75* 40.18±2.64＃生赤芍高劑量組 31.67±2.58* 45.67±8.94＃ 3.82±0.30* 5.90±0.71＃ 35.20±3.33* 42.00±3.94＃

4 討論

根據(jù)形態(tài)描述和歷代本草中附圖基本可以確定古時(shí)的赤芍和白芍均為芍藥的藥材來源?！稖罕静荨纷髡咴耐鹾霉怕氏忍岢觯骸敖褚娀ǔ嗾?，為赤芍藥；花白者，為白芍藥。俗云白補(bǔ)而赤瀉”［7］。明確了赤芍和白芍的區(qū)別，被后世不少醫(yī)家作為標(biāo)準(zhǔn)用以區(qū)分這兩種同基原，而功效上存在差異的藥材。清代《本草崇原》云：“開赤花者為赤芍，開白花者為白芍?！保?］而實(shí)際上明代時(shí)已有學(xué)者發(fā)現(xiàn)草藥種植者以加工方法區(qū)分赤、白芍［9］，即直接曬干為赤芍，去皮蒸干后為白芍，這種分類方法被沿用至今。由于四川地區(qū)較多使用川赤芍，1977年版《中華人民共和國藥典》增加了川赤芍Paeonia veitchii Lynch的干燥根為赤芍基原［10］。最新的《中華人民共和國藥典》2020年版（一部）沿用了該規(guī)定，赤芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍Paeonia veitchii Lynch的干燥根，白芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根［11］。

現(xiàn)代臨床中使用芍藥甘草湯治療便秘已經(jīng)較為普遍，其中大多應(yīng)用白芍［12-13］。然而文獻(xiàn)研究表明《傷寒論》中的芍藥應(yīng)為赤芍［14-16］，因此進(jìn)一步探討白芍和赤芍通便作用的差異具有一定臨床意義。

本研究首先采用生白芍和生赤芍考察兩者的通便作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)大劑量生赤芍能明顯改善模型大鼠便秘情況，可觀察到大鼠糞便含水量、粒數(shù)及糞便質(zhì)量均顯著增加，而同等條件下生白芍僅能增加大鼠糞便含水量，通便作用不明顯，這可能與兩種藥材的有效成分及其含量不同有關(guān)。研究顯示，赤芍和白芍主要化學(xué)成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)及其配比存在顯著性差異，其中氧化芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷分別是赤芍和白芍最重要的差異性化合物，而芍藥苷含量差異并不明顯［17］。但也有研究表明，即使是不去皮白芍中芍藥苷含量與赤芍相比仍存在顯著差異［18］，不同產(chǎn)地赤芍和白芍的芍藥苷等6種成分的含量比例差別很大，在成分的分布上有一定的規(guī)律性，除芍藥苷外，單萜苷類成分在白芍中含量明顯較高，而多元酚類化合物在赤芍特別是川赤芍中含量較高［19］。但目前為止，芍藥通便作用的有效成分尚不完全清楚，有待進(jìn)一步研究。

炒赤芍為赤芍進(jìn)一步文火炒制而成，藥性更加溫和，因此，本研究接著考察了不同炮制方法下的赤芍的通便作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與大劑量生赤芍相比，大劑量炒赤芍僅能增加大鼠糞便含水量，無法明顯改善模型大鼠便秘情況，推測由于加工方法、受熱程度和所用輔料有所不同，炮制后赤芍有效成分及其含量發(fā)生變化所致［20］。以芍藥苷含量為例，炮制后：赤芍＞炒赤芍＞醋炙白芍＞酒炙白芍＞炒白芍＞白芍＞去皮白芍＞土炒白芍［21-22］，其中白芍經(jīng)炮制后芍藥苷含量下降幅度可達(dá)37%～56%［23］。

最后，本研究考察了不同劑量下生赤芍的通便作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)生赤芍的通便作用與劑量呈正相關(guān)，小劑量生赤芍對大便粒數(shù)、重量和含水量均無影響，中劑量時(shí)大鼠糞便含水量增加，而大劑量的生赤芍具有明顯的通便作用，大鼠的糞便粒數(shù)、糞便質(zhì)量及糞便含水量均顯著升高。目前尚沒有單方芍藥治療便秘的臨床報(bào)道，有研究認(rèn)為芍藥與其他藥物聯(lián)用治療通便時(shí)的劑量在20 g以上［24］。小鼠實(shí)驗(yàn)顯示，生白芍生甘草湯（劑量比2∶1）在20 g·kg-1時(shí)就有顯著的瀉下作用［3］。而本研究發(fā)現(xiàn)，芍藥用量為120 g時(shí)才表現(xiàn)出明顯的通便作用，與臨床用藥劑量差距較大，可能與造模藥物復(fù)方地芬諾酯片所含硫酸阿托品抑制白芍總甙對結(jié)腸平滑肌M受體的作用有關(guān)［25］。因此，芍藥用于治療便秘的有效劑量仍需進(jìn)行摸索驗(yàn)證。

研究中發(fā)現(xiàn)，模型大鼠的便秘改善以含水量增加為先驅(qū)表現(xiàn)。研究表明，中、高劑量白芍能降低鹽酸洛哌丁胺便秘模型小鼠結(jié)腸AQP 4及VIP水平，增加腸道內(nèi)水分并降低腸道平滑肌張力，減少糞便下行阻力實(shí)現(xiàn)通便作用［26］。對芍藥甘草湯和芍藥總苷的研究顯示，兩者均能減少抑制性神經(jīng)遞質(zhì)NO、NOS和VIP的表達(dá)，提高c-kit蛋白及mRNA的表達(dá)，從而增加Cajal間質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量和功能，進(jìn)而加快結(jié)腸運(yùn)動(dòng)［27-29］。推測，芍藥的通便作用機(jī)制可能是復(fù)合性的，既有胃腸激素的影響，又有水通道蛋白的參與；既有腸道水分的增加，又有腸道動(dòng)力的促進(jìn)。目前對芍藥通便作用機(jī)制的研究仍然很少，有待進(jìn)一步完善和深入，明確芍藥通便的有效成分及其作用機(jī)制，將有望研發(fā)出一種新型的便秘治療藥物。