亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        氣相色譜分析方法開發(fā)經驗總結

        2021-07-14 07:07:26長征縱橫
        實驗與分析 2021年2期
        關鍵詞:方法

        文/ 長征縱橫

        氣相分析方法開發(fā)的十二個步驟// 方法開發(fā)是個復雜而又神秘的工程,往往需要扎實的理論知識儲備,但同時也少不了經驗的積累;對于方法開發(fā),需要我們從多學科出發(fā),分析儀器學、色譜學、藥學、有機化學、分析化學等學科綜合,也需要我們熟練掌握文獻信息檢索,從中吸取精華,同時不斷去試錯,下面就把我個人職業(yè)生涯的經驗進行總結提煉,供同行一起學習探討。

        步驟一、確認主要工作內容

        1.殘留溶劑檢測分析方法:GC-HS方法、GC直接進樣方法。

        2.基因毒雜質檢測分析方法。

        3.高沸點樣品雜質分離與含量檢測方法。

        步驟二、信息收集

        1.要確定待測物質的溶解性、極性、沸點,主要針對“溶劑殘留”。

        2.需要確定樣品的溶解性、熱穩(wěn)定性、極性、沸點、化學性質(酸堿)、物理屬性(固體/液體/半固態(tài))。

        3.收集并計算化合物(待測物質)的CH含量%比值,CH含量%比值越高檢測靈敏度就越好,反之,CH含量%比值越低檢測靈敏度就越差。

        步驟三、色譜柱使用選擇指南(分離關鍵)

        1.非極性色譜柱:分離主要根據沸點高低,沸點低先出,沸點高后出;同沸點的含有O含有N的極性先出,烴類后出,如:DB-1、HP-1、BP-1、SE-30;

        2.極性色譜柱:分離主要根據分子極性大小,極性小先出,極性大后出,如DB-Wax;

        3.首選中極性毛細管色譜柱,既能兼顧沸點差異又能兼顧極性差異,如:DB-624、HP-5,表1列舉了幾種常見色譜柱的極性及使用范圍;

        表1 常見色譜柱的極性與使用范圍

        4.色譜柱直徑(內徑/粒徑)越窄/越小,柱效越高,峰展寬越小,峰越尖銳,峰靈敏度越高,增加分離度;

        5.色譜柱膜厚影響傳質阻力,液膜越薄的傳質阻力越小,在同樣的線速度下能夠獲得更高的柱效,柱效越高,峰展寬越小,峰越尖銳,峰靈敏度越高,增加分離度;液膜厚,保留時間延長。

        步驟四、進樣方法的選擇

        1.方法有溶液直接進樣法、頂空進樣法。

        ①殘留溶劑-HS:大多數是低沸點物質(醇/酯/烷烴/醚),90%以上采用頂空進樣(GC-HS),清潔進樣,基本不出雜峰(溶劑),原料不被破壞但經濟費用高。

        ②殘留溶劑-DS:5%及少數采用溶液直接進樣(GC-DS),雖然經濟,但出雜峰多(主要原料破壞帶入),易損壞色譜柱,需清潔老化保護,表2總結了一些方法開發(fā)選擇需要考慮的方面。

        表2 開發(fā)選擇考慮總結

        2.溶劑沸點過高(沸點大于180℃),且樣品對熱比較穩(wěn)定,首選溶液直接進樣法。

        3.溶劑沸點低(沸點小于150℃),且樣品對熱不穩(wěn)定,首選頂空進樣法。

        4.頂空進樣法可消除因溶液直接進樣會產生降解雜質峰而干擾目標峰(進樣口溫度大于200℃),采用頂空進樣方法還可以減少對樣品的預處理。

        5.基因毒雜質方法開發(fā),優(yōu)先選擇溶液直接進樣法(限度低,主要考慮提高靈敏度);樣品雜質分離選擇使用溶液直接進樣法。

        6.對于基因毒雜質限度小于2 ppm以下方法開發(fā),優(yōu)先選擇GC-MS溶液直接進樣法。

        7.查看CH含量%比值選擇進樣方法:

        ①CH含量%比值高:對于殘留溶劑檢測選擇頂空進樣法,對于雜質分離/控制或基因毒雜質控制選擇溶液直接進樣法時,可開發(fā)低濃度供試品溶液。

        ②CH含量%比值低:對于殘留溶劑檢測選擇溶液直接進樣法,對于雜質分離/控制或基因毒雜質控制選擇溶液直接進樣法時,可開發(fā)高濃度供試品溶液。

        步驟五、確定定量方法

        1.外標法:殘留溶劑、含量(準確)。

        2.內標法:殘留溶劑(主要針對易揮發(fā)烷烴類)。

        3.面積歸一化法:樣品雜質分離及純度。

        步驟六、樣品預處理方法

        1.氣相色譜儀能直接分析的樣品通常是氣體或液體,固體樣品在分析前應先溶解在適當的溶劑中,而且還要保證樣品中不含GC不能分析的組分(如無機鹽:進樣口溫度不能保證鹽汽化),往往會聚集在進樣口襯管或分流平板導致污染/堵塞,還有可能通過載氣進入色譜柱中,損壞色譜柱的填料。

        2.樣品預處理/溶解原則:根據相似相溶原理。

        3.樣品分類:氣體樣品、液體樣品、固體樣品。

        4.氣體/液體樣品預處理方法:

        ①直接進樣分析(純度分析與檢測),如:甲烷、乙醇;

        ②脂溶性液體樣品(雜質),通常需要用脂溶性有機溶劑溶解樣品,如:甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮、正己烷、

        DMSO、DMF;

        ③進樣方式:溶液直接進樣、頂空進樣。

        5.固體樣品(含鹽)樣品預處理方法:

        ①樣品性質:易溶于水,難溶于有機溶劑,樣品熔點高,難汽化,如:鈉鹽/鉀鹽/鹽酸鹽/硫酸鹽/磷酸鹽/富馬酸鹽;

        ②如果選擇水作溶劑-盡量使用頂空進樣方法;

        ③靈敏度不理想且限度低(1~10 ppm)-可使用水溶解二氯甲烷/正己烷萃取法來進行預處理樣品,這樣既可以使用溶液直接進樣又可以使用頂空進樣,檢測雜質/殘留/基因毒通用。

        6.固體樣品(不含鹽)樣品預處理方法:根據相似相溶原理。

        步驟七、溶劑系統(tǒng)選擇

        1.如果是溶液直接進樣法,優(yōu)先考慮溶劑選擇,溶解樣品的溶劑和最大溶解限度;如果是頂空進樣法,可根據樣品和溶劑都能溶解;

        2.原則上水溶性樣品優(yōu)先選擇水,非水溶性樣品可選擇酯/醇、DMF、DMSO、NMP、DMAC;

        3.溶液直接進樣-樣品溶劑選擇考慮:

        ①化學穩(wěn)定(水解/醇解),優(yōu)先選擇水(水溶性)/醇/酯(脂溶性)作為溶劑;反之選擇烷烴、質子溶劑(萬能溶劑:DMF、DMSO、NMP、DMAC)作為溶劑;

        ②樣品具有酸/堿性,但是檢測殘留溶劑或雜質也具備酸/堿性,可根據待測物質酸/堿性質選擇酸堿中和樣品;如鹽酸/硫酸/富馬酸鹽等產品檢測胺類,需要單獨使用堿性溶劑進行中和解離,同樣反之,如吡啶/鈉/鉀鹽等產品檢測酸類,需要單獨使用酸性溶劑進行中和解離,具體溶劑選擇需要進行加標回收驗證實驗。

        ③供試品溶液要澄清,不與樣品及待測物質反應或結合。

        4.頂空進樣-樣品溶劑選擇考慮:

        ①化學穩(wěn)定(水解/醇解),優(yōu)先選擇水(水溶性)作為溶劑;反之選擇質子溶劑(萬能溶劑:

        DMF、DMSO、NMP、DMAC);

        ②樣品具有酸/堿性,同上“3.②”。

        ③樣品溶解完全沒要求,頂空進樣氣體(溶劑殘留)。

        5.對于低限度燃燒值大的物質,可選用鹽析溶劑系統(tǒng),如:苯殘留、三氯甲烷。

        6.樣品溶解溶劑選擇,也要考慮殘留溶劑的溶解度(如:烷、醚類不溶解水)。

        7.大部分溶劑系統(tǒng)優(yōu)先選擇DMSO、NMP、DMF,因為既能溶解樣品又能溶解溶劑。

        步驟八、柱溫開發(fā)研究

        1.等溫:對于溶劑個數少(1~3個),且各溶劑沸點差異不算很大,此時可選擇等溫法,比如50℃保持10~15分鐘,適合殘留溶劑檢測、基因毒雜質檢測、含量測定。

        2.程序升溫:對于溶劑個數多(大于5個),且各溶劑沸點差異較大,此時可選擇程序升溫法,比如40℃保持10分鐘,以10℃/min速率升至180℃,保持5分鐘,適用于產品雜質分離、殘留溶劑檢測,表3、表4展示了經典的程序升溫。

        表3 經典程序升溫(殘留溶劑、雜質分離)

        表4 雜質分離的程序升溫

        3.極端分離:對于大部分沸點低溶劑(當使用DB-624)且考慮分析時長時,可選用低溫程序升溫法,比如初始溫度為35~40℃,分析環(huán)境一定要保證溫度<25℃。

        步驟九、頂空條件方法選擇和研究

        1.爐溫(加熱-頂空瓶平衡溫度):

        ①以水為溶劑,溫度范圍選擇75~90℃,最高選擇90℃;

        ②以DMSO、DMF等為溶劑,溫度范圍選擇80~145℃,最高選擇140℃;溫度過高要考慮高溫時長導致溶劑反應降解產生新的未知雜峰;

        ③考慮溫度過高有爆瓶危險,特別在使用鹽析方法時(因為溶劑系統(tǒng)里有水分存在)爆瓶概率增加;

        ④加熱溫度研究最高溫度一般低于溶劑10℃(在考慮靈敏度情況下)。

        2.定量環(huán)溫度:溫度要大于爐溫10℃。

        3.傳輸線溫度:溫度要大于定量環(huán)溫度10℃。

        4.頂空瓶(加熱)平衡時間:根據大部分溶劑沸點,沸點都相對高平衡時間就長,沸點都相對低平衡時間就短;常規(guī)平衡時間為30~60分鐘,經典平衡時間為30分鐘。

        十、檢測器選用

        1.90%分析方法工作優(yōu)先選用FID檢測器:含碳氫化合物。

        2.基因毒雜質選用FID-MS檢測器。

        3.如含電負性基團(F/Cl/Br)且含CH量少,選用ECD電子捕獲檢測器,如三氯甲烷無H物質。

        4.含有非碳氫化合物組分時,且對檢測靈敏度要求不高,通常選擇TCD檢測器,主要是氣體檢測,如輔材:氮氣。

        5.其他:N/P(氮/磷)檢測器。

        步驟十一、方法建立

        1.進樣口溫度:一般選擇200~230 ℃,進樣口溫度要大于傳輸線溫度,可根據樣品性質研究選用中高溫,如150~180 ℃(考慮樣品不被熱解)。

        2.檢測器溫度:一般選擇230~260℃。檢測器溫度要大于進樣口和色譜柱溫度。

        3.流速:3.0~5.0 mL/min,經典流速為:4 mL/min和5 mL/min。

        4.分流比:①5:1-50:1;②選擇規(guī)則:響應值高,使用大分流比,反之,則使用小分流比;③經典分流比為5:1(頂空進樣)和50:1(溶液直接進樣)。

        5.進樣量:頂空進樣為1 mL,溶液直接進樣為0.2-1 uL,也可根據進樣峰型進行改進。

        6.樣品濃度/配制開發(fā)研究:

        ①頂空進樣:0.2~1 g(根據限度/靈敏度要求進行研究),對于大濃度要考察樣品提取平衡;濃度一般控制在0.1~0.4 g/mL(頂空裝量控制在1~5 mL);

        ②溶液直接進樣:一定要考慮溶解完全,濃度可根據限度/靈敏度要求進行開發(fā)研究;一般控制在0.5~200 mg/mL;

        ③開發(fā)研究合適的樣品濃度,一定要根據雜質限度/靈敏度做相應研究調整。

        7.對于雜質分離(溶液直接進樣法),在方法開發(fā)同時也要考察殘留問題,可增加清洗老化色譜柱方法程序,也可增加清洗進樣針方法;還有對于對氣相管路有吸附殘留性質也可增加清洗程序(如胺類、>150 ℃高沸點物質),增加程序一定要作為分析方法的一部分,且一定要經過驗證驗收。

        8.方法開發(fā)時遇到難點:分離度、靈敏度、峰型。

        分離度優(yōu)化研究:

        ①極性色譜柱與非極性色譜柱的轉換使用(DB-Wax與DB-624轉換);

        ②使用程序升溫(速率可低至3~5 ℃/min,但是分析時長增加,靈敏度減?。?/p>

        ③使用長色譜柱(如30 m→45 m→75 m);

        ④使用小粒徑色譜柱(3 um→1.8 um→1 um);

        ⑤降低流速(變流速如:3→1 mL/min);

        ⑥使用程序降溫(120→40℃,速率10-20 ℃/min)。

        靈敏度優(yōu)化研究:

        ①增加進樣量(1→2uL);

        ②增大流速;

        ③增加頂空瓶裝樣量(最大5 mL,可研究6~8 mL);

        ④使用小粒徑色譜柱(3 um→1.8 um→1 um);

        ⑤使用鹽析方法(成功典型:苯、三氯甲烷);

        ⑥頂空方法:適當增加頂空瓶加熱溫度和時長(進行對比研究)。

        峰型優(yōu)化研究:

        ①使用小粒徑色譜柱;

        ②增大柱流量;

        ③使用專屬柱(如胺類分析柱、醇類分析柱);

        ④升高柱溫。

        9.系統(tǒng)干擾考察研究:先走空白2針:樣品1針、對照1針,查看空白、樣品溶液的干擾情況,空白與樣品應無干擾峰出現(方法驗證-專屬性),且對LOQ和LOD測試無干擾,基本能通過LOQ和LOD驗證(方法好壞體現在系統(tǒng)與溶劑對測試的干擾)。

        10.系統(tǒng)有干擾可通過換溶劑或調整程序升溫來消除對目標峰的干擾。

        11.進行LOQ考察:只確認靈敏度(響應值)最小的2個,將LOQ試驗出來,LOQ對應濃度是否合格(LOQ含量不得高于限度的50%)。

        12.最后進行100%加標回收測試,回收結果如果滿足90%~105%,方法基本確定。

        步驟十二、分析方法評價與挑戰(zhàn)

        1.分析方法開發(fā)評價標準:

        ①空白考察:空白溶液無干擾峰出現,應該對測試無影響(最小干擾<LOD);

        ②分離度:最低分離度標準為,各相鄰峰間分離度>2.0(最小1.5);

        ③LOQ:確認靈敏度(響應值)最小的2個,將LOQ試驗出來,LOQ對應濃度是否合格(LOQ含量不得高于限度的50%),且LOQ的S/N要大于10;

        ④加標回收標準(90%~110%);

        ⑤溶液穩(wěn)定性:100%加標溶液考察0、2、4、8、24小時的穩(wěn)定性,主要考察峰面積RSD%(n=5)以及各溶劑的回收率%。

        2.分析方法簡單預實驗(預驗證):

        ①線性:50%、100%、150%、200%(每點進2針),R大于0.999;

        ②準 確 度:50%、100%、200%(每點進2針),回收率%應在90%~110%;

        ③SST實驗:6針對照結果,各溶劑峰峰面積RSD%(n=6)均小于6.0%,且考察各溶劑峰的拖尾因子或對稱因子(0.9~1.1,最大不可超過2.0)。

        猜你喜歡
        方法
        中醫(yī)特有的急救方法
        中老年保健(2021年9期)2021-08-24 03:52:04
        高中數學教學改革的方法
        河北畫報(2021年2期)2021-05-25 02:07:46
        化學反應多變幻 “虛擬”方法幫大忙
        變快的方法
        兒童繪本(2020年5期)2020-04-07 17:46:30
        學習方法
        可能是方法不對
        用對方法才能瘦
        Coco薇(2016年2期)2016-03-22 02:42:52
        最有效的簡單方法
        山東青年(2016年1期)2016-02-28 14:25:23
        四大方法 教你不再“坐以待病”!
        Coco薇(2015年1期)2015-08-13 02:47:34
        賺錢方法
        欧美丰满熟妇xxxx性| 一区二区三区字幕中文| 久久99国产综合精品| 麻豆国产人妻欲求不满谁演的| 少妇性bbb搡bbb爽爽爽| 欧美日韩国产码高清综合人成| 精品一区二区三区在线观看视频| 无码毛片高潮一级一免费| 人妻免费黄色片手机版| 伊人久久这里只有精品| 人妻无码一区二区视频| 亚洲色婷婷免费视频高清在线观看| 99综合精品久久| 日本在线免费不卡一区二区三区| 国产欧美日韩va另类在线播放| 99久久亚洲精品无码毛片| 国产一区二区欧美丝袜| 亚洲天堂av一区二区三区不卡| 又紧又大又爽精品一区二区| 天堂sv在线最新版在线| 国产精品,在线点播影院| 久久av粉嫩一区二区| 国产青榴视频在线观看| 久久精品无码一区二区乱片子| 精品女同一区二区三区免费播放| 亚洲中文字幕午夜精品| 好男人社区影院www| 亚洲在AV极品无码天堂手机版| 亚洲免费成年女性毛视频| 国产毛片精品av一区二区| 国产激情视频在线观看的| 亚洲久热无码av中文字幕| 国产免费的视频一区二区| 91精品国产在热久久| 亚洲av天天做在线观看| 成人无码午夜在线观看| 国产人成在线免费视频| 在线观看一级黄片天堂| 精品国模一区二区三区| 波多野结衣一区二区三区免费视频 | 老肥熟女老女人野外免费区 |