楊靜美 錢應俊 席亞東 李 森 蔣 鋒

(1.仲愷農業(yè)工程學院農業(yè)與生物學院，廣東 廣州 510225)(2.四川省農業(yè)科學院植物保護研究所，四川 成都 610066)(3.仲愷農業(yè)工程學院繼續(xù)教育學院，廣東 廣州 510225)

玉米是世界上種植最廣泛的糧食作物之一，我國南北方地區(qū)均種植廣泛[1]。病蟲害是影響玉米生產(chǎn)的重要因素[2-3]。玉米的主要病害有玉米紋枯病和玉米小斑病等[4]。玉米紋枯病主要由立枯絲核菌等土壤習居菌群侵染引起，在各玉米產(chǎn)區(qū)均有不同程度的發(fā)生[5-6]。玉米小斑病又名玉米斑點病，由玉蜀黍平臍蠕孢菌引起，是我國南方玉米產(chǎn)區(qū)的重要葉部病害[7]。荔枝霜疫霉病菌引起的霜疫霉病是我國荔枝生產(chǎn)上為害最重的病害[8-9]。目前三種病害的防治方法多集中在化學、物理和生物方面，雖然化學防治的效果最好，但化學防治對環(huán)境造成的危害日益突出，尋求有效的植物源農藥是農作物病蟲害綠色防控的重要途徑[10]。

植物源農藥具有對非靶標生物安全、不易產(chǎn)生抗藥性、種類多、開發(fā)途徑多等特點，是當前研究的一個主要方向[11-13]。目前，玉米紋枯病和玉米小斑病的綠色防治方法主要有生物藥劑、選用合適的品種和加強田間管理等。研究發(fā)現(xiàn)，有效霉素A與棘孢木霉GDSF1009協(xié)同作用后，能有效抑制絲核菌的生長[14-15]。黃連根水煮液和蒜頭汁液對立枯絲核菌和平臍蠕孢菌菌絲均有較強的抑制作用[16]。玉米葉鞘中引入杜仲內生細菌DZSY21后，玉米葉鞘組織中的三種防御酶，即多酚氧化酶、過氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶的活性升高，玉米對紋枯病的抗性增強[17-18]。采用玉米雙株定向栽培模式能有效減輕紋枯病的發(fā)生[19]。玉米內生放線菌NEAU-M89菌株對玉米小斑病和玉米紋枯病菌都有不同程度的抑制作用[20]。哈茨木霉SH2303能產(chǎn)生誘導抗性，對玉米小斑病具有良好的防治效果，持效期可達15d[21-22]。適時播種、采用合適的抗性品種和田間配置、注意施肥，均能有效減輕兩種病害的發(fā)生。

對荔枝霜疫霉病的綠色防治方法有采用拮抗菌、利用植物源藥劑和抗性品種等[23]。枯草芽胞桿菌Bacillussubtilis對荔枝霜疫霉病菌菌絲生長的抑制率為92.34%[24-25]?；ń酚椭械蔫駱淠X、植物提取物厚樸酚、丁香酚，5mg/L細辛、丁香、大楊柳和甘草提取物等都對荔枝霜疫霉菌具有抑制作用[26-30]?；谥参镌此巹τ衩准y枯病、玉米小斑病和荔枝霜疫霉病的研究已有較多報道，蒜頭汁液和黃連根水煮液對上述病菌菌絲生長有良好的抑制作用，但這兩種提取液對玉米兩種病害的盆栽試驗、對荔枝接種霜疫霉菌后的防效試驗較少見報道。本文以蒜頭和黃連根為植物材料，提取蒜頭汁液和黃連根水煮液，采用菌液—藥液混合法接種和接種后藥澆淋的方法，研究了蒜頭汁液和黃連根水煮液分別對玉米紋枯病、玉米小斑病和荔枝霜疫霉病的防治效果，為利用植物源殺菌劑防治玉米紋枯病、玉米小斑病和荔枝霜疫霉病提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1供試菌株及菌液

立枯絲核菌、玉蜀黍平臍蠕孢菌、荔枝霜疫霉菌，由仲愷農業(yè)工程學院植物病理研究所提供。將立枯絲核菌和玉蜀黍平臍蠕孢菌分別接種到PDA平板，28℃下培養(yǎng)3～4d后，用打孔器(Φ=9mm)沿菌落邊緣各打3孔，分別接種到裝有150mL液體培養(yǎng)基的三角瓶中，28℃，200r/min下培養(yǎng)3d后，無菌水稀釋，得濃度為1×106個/mL的孢子懸浮液[31]。將無菌水倒入培養(yǎng)了5d的荔枝霜疫霉病菌培養(yǎng)皿中，用已消毒的挑針輕輕刮取菌落，制成濃度為1×105個/mL的孢子懸浮液。

1.1.2供試品種

感玉米紋枯病和小斑病品種為臺灣糯玉米，由仲愷農業(yè)工程學院玉米研究所提供。感荔枝霜疫霉病品種為白蠟荔枝，由華南農業(yè)大學農學院提供。

1.1.3供試藥劑

將洗凈的100g黃連根加入到2000mL水中，煮沸后小火熬煮1.5h，過濾后放置冷卻，得到黃連根水煮液(A藥劑)；將蒜頭去皮后，用75%酒精消毒30s、無菌水清洗3次后放入榨汁機中，過濾后得到蒜頭汁液(B藥劑).將部分A、B藥劑分別用無菌蒸餾水配成體積分數(shù)為10%的藥液，待用。

1.2 試驗方法

1.2.1玉米紋枯病的盆栽藥效試驗

挑選長勢基本一致的臺灣糯玉米分成3組，每組30盆(每組3個重復)。取已消毒的細針分別在三組玉米的莖基部均勻扎孔。后按以下方式進行處理：第一組：用干凈棉花蘸取立枯絲核菌液后均勻涂抹在玉米莖基部傷口處，后將帶菌液的棉花包裹在傷口處(為對照ZRCK)。第二組：用棉花在玉米傷口處涂抹菌液，6h后，用10%的B藥劑全株澆灌玉米(為ZR1)。第三組：取B藥劑加入到立枯絲核菌液中，充分搖勻后配成藥劑體積百分數(shù)為10%的菌藥混合液，用棉花蘸取混合液涂抹在玉米莖基部傷口處(為ZR2)。接種后，將全部供試對象置于28℃～30℃下室溫培養(yǎng)。每株玉米套袋保濕，室內保持一定的濕度(相對濕度80%～90%)。保濕2d后記錄玉米的發(fā)病情況，根據(jù)以下分級標準及公式計算病情指數(shù)和防病效果，下同[32]。玉米紋枯病病情分級標準：0級：全株無??；1級：基部葉片、葉鞘發(fā)?。?級：倒第三葉以下各葉葉鞘或葉片發(fā)??；3級：倒第二葉以下各葉葉鞘或葉片發(fā)病；4級：劍葉葉鞘或葉片發(fā)病。按以下公式計算病情指數(shù)和相對防效：

病情指數(shù)=[∑(病級株數(shù)×病級值)/(總株數(shù)×最高級數(shù))]×100

相對防治效果/%=[(對照病情指數(shù)-處理病情指數(shù))/對照病情指數(shù)]×100

1.2.2玉米小斑病的盆栽藥效試驗

挑選長勢基本一致的臺灣糯玉米分成5組，每組30盆(每組3個重復)。取已消毒的細針分別在5組玉米的葉面均勻扎孔。后按以下方式進行處理：第一組：用干凈棉花蘸取平臍蠕孢菌液均勻涂抹在傷口處，后將蘸有藥液的棉花輕鋪于葉面，6h后取下棉花(為對照ZHCK)。第二組和第三組：用棉花在傷口處涂抹菌液，再將棉花輕鋪于葉面，6h后取下棉花。用10%的A、B藥劑分別對每組玉米進行全株澆灌，A藥劑處理為ZH1，B藥劑處理為ZH2。第四組和第五組：將A、B藥劑分別加入到平臍蠕孢菌液中，充分搖勻后得藥劑體積百分數(shù)為10%的兩種菌藥混合液，分別蘸取混合液涂抹在傷口處，A藥劑處理為ZH3，B藥劑處理為ZH4。接種后，將全部供試對象置于28℃～30℃下室溫培養(yǎng)。每株玉米套袋保濕，室內保持一定的濕度(相對濕度80%～90%)。保濕2d后記錄玉米的發(fā)病情況，玉米小斑病病情分級標準[33]：0級：全株葉片無病斑；1級：全株葉片有零星病斑，占葉面積的10%以下；2級：全株葉片有少量病斑，占葉面積的10%～25%；3級：全株葉片有中量病斑，占葉面積的25%～50%；4級：全株葉片有大量病斑，占葉面積的50%以上。

1.2.3荔枝霜疫霉病的藥效試驗

挑選大小基本一致表面無病的白蠟荔枝分成5組，每組30顆(每組3個重復)。所有荔枝處理后均置于封閉塑料容器中，容器底部用濾紙保濕。后按以下方式進行處理：第一組：將荔枝放入荔枝霜疫霉病菌液中浸泡3min后放入容器中，果實表層鋪一層蘸有菌液的棉花，6h后去掉棉花(為對照LPCK)。第二組和第三組：每組荔枝放進菌液浸泡3min后放入容器，荔枝表面均鋪蘸有菌液的棉花，6h后去掉。分別取10%的A、B藥劑，對兩組荔枝各充分涂抹，A藥劑處理為LP1，B藥劑處理為LP2。第四組和第五組：分別取A、B藥劑加入到菌液中，配成藥劑體積百分數(shù)為10%的兩種菌藥混合液，將每組試驗荔枝放進不同混合液浸泡3min后放入容器，用蘸有混合液的棉花鋪在果實表層，6h后去掉。A藥劑處理為LP3，B藥劑處理為LP4。以上所有荔枝處理后均置于24℃培養(yǎng)箱中，2d后記錄果實發(fā)病面積。荔枝霜疫霉病情分級標準：0級：果實表皮無病斑；1級：有零星病斑，占果實面積的10%；2級：有少量病斑，占果實面積的10%～25%；3級：有中量病斑，占果實面積的25%～50%；4級：有大量病斑，占果實面積的50%以上。

2 結果與分析

2.1 不同處理對玉米紋枯病防治效果的研究

由表1及圖1可以看出，不同的處理方法對玉米紋枯病的防治效果不同，ZR1處理的相對防效為7.27%，表明接種病菌于植株后，用蒜頭汁液澆灌防病的效果并不理想。而ZR2處理的防病效果達72.72%，病情指數(shù)也相對較低(為16.67%)，表明病菌和藥液混合后接種到植株，植株發(fā)病較輕，這可能是因為菌藥混合后抑制或殺死了部分病菌，表明病菌侵染前噴灑藥液可以起到一定的防治作用。

圖1 不同處理下玉米的發(fā)病情況

表1 不同處理對玉米紋枯病的防效

1)表中級別后同行數(shù)字表示該級別的發(fā)病玉米數(shù)目。下同。

2.2 不同處理對玉米小斑病防治效果的研究

由表2及圖2可以看出，ZHCK的病情指數(shù)為100，且供試的30株玉米發(fā)病情況均在4級，表明病菌接種到玉米植株后易發(fā)病，危害程度嚴重。ZH1和ZH3處理的防病效果均低于40%，病情指數(shù)都高于60%；而B藥劑兩種處理方法的防效均高于73%，病情指數(shù)也較低，表明B藥劑蒜頭汁液對平臍蠕孢菌有很好的防效，有一定的應用價值。

表2 不同處理對玉米小斑病的防效

圖2 不同處理下玉米的發(fā)病情況

2.3 不同處理對荔枝霜疫霉病防治效果的研究

由表3及圖3可以看出，LPCK的病情指數(shù)為83.33%，說明病菌對荔枝危害普遍，所有果實均不同程度感病。LP1、LP3處理后防效均在60%及以上，表明A藥劑對荔枝霜疫霉病的防治效果較好；LP2處理后的防效為43.99%，而LP4處理后防效相對提高，這可能是因為荔枝霜疫霉病菌與蒜頭汁液混合后，殺死或抑制了部分病菌，表明發(fā)病前施藥能起到防治作用。

表3 不同處理對荔枝霜疫霉病的防效

圖3 不同處理下荔枝的發(fā)病情況

3 小結與討論

大蒜為百合科蔥屬多年生草本植物，富含抗菌生物活性成分及營養(yǎng)物質，可作為植物廣譜抗生素，對多種細菌和真菌具有良好的抑菌作用[34-35]。大蒜汁對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、荔枝霜疫霉菌、平臍蠕孢病菌和絲核菌菌絲等都有較好的抑制作用[36]。大蒜乙酸乙酯提取液對番茄葉霉、番茄灰霉病菌菌絲生長有較強的抑制作用[37]。紫皮蒜、白皮蒜根系分泌物對辣椒疫霉病菌、草莓灰霉病菌、番茄青枯病菌3種土傳性病菌都有較好的抑制效果[38]。黃連抗菌譜廣泛，極低濃度即開始阻止霍亂、痢疾菌等的繁殖，對金黃色葡萄球菌等革蘭氏陽性菌、腸傷寒菌等革蘭氏陰性菌、念珠菌屬、酵母等真菌均有抗菌性[39]。黃連木葉揮發(fā)油對梨黑斑病菌、番茄灰霉病菌、小麥赤霉病菌的生長均具一定熏蒸抑制作用，對小麥赤霉病菌的抑制效果最好[40-41]。黃連根水煮液對荔枝霜疫霉菌、平臍蠕孢病菌菌絲都有較好的抑制作用，對平臍蠕孢病菌的抑制率為81.47%[16]。

本試驗研究表明，菌—藥混合再接種的防治效果均優(yōu)于接種后藥澆淋的方法，這可能是因為菌藥混合后再接種使得病菌進入植物體內前就被殺死或抑制其侵染活性，而接種后藥澆淋的方法并不能完全保證藥劑滲透入植物體內殺死或抑制病菌的侵染活性。但在生產(chǎn)中種植者往往在發(fā)病以后才開始防治，因此，應在病菌侵染前提前運用兩種藥劑進行預防。

從表1、表2和前人的研究結果可以看出，室內和室外試驗中，蒜頭汁液對病菌都有一定的抑制作用，可將蒜頭汁液淋在種有玉米的土壤中，預防紋枯病、小斑病的發(fā)生。從表3和前人的研究結果可以看出，荔枝掛果和采摘后噴灑黃連根水煮液，可抑制荔枝霜疫霉病菌。

本試驗為植物源藥劑防治玉米紋枯病、玉米小斑病和荔枝霜疫霉病提出了新的思路，為農業(yè)生產(chǎn)實際應用提供了理論依據(jù)，但藥劑的作用原理、主要作用成分、藥劑能否滲透進入植物體內作用等，有待進一步研究。