張 兵，陳瑞紅，楊 威，徐 剛

原發(fā)性肝癌(PLC)占世界惡性腫瘤死亡率的第二位，具有極高的危害性，其中肝細(xì)胞癌(HCC)為最常見的一類，占肝癌的80%以上[1-3]。熱休克蛋白90α(HSP90α)為一類常見的分子伴侶，廣泛存在于真核生物細(xì)胞，與腫瘤細(xì)胞的形成、分化和增殖等密切相關(guān)，已經(jīng)成為腫瘤治療的新靶點。維生素K拮抗劑誘導(dǎo)蛋白-Ⅱ(protein induced by vitamin K antagonist-II ，PIVKA-Ⅱ)為異常凝血酶原-Ⅱ，由肝臟組織合成。近幾年來研究表明，檢測HCC患者血清PIVKA-Ⅱ有重要的臨床意義[4]。本研究檢測了HCC患者血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平的變化，探討了檢測的臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2014年1月～2016年6月我院診治的HCC患者112例，男性65例，女性47例；平均年齡為(51.3±6.2)歲。經(jīng)病理學(xué)檢查診斷，所有患者均為初次治療且預(yù)計生存期大于5個月。排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他類型的肝癌；②合并其他癌癥；③有嚴(yán)重的精神疾病或嚴(yán)重的器官功能衰竭；④存在自身免疫性疾病。腫瘤細(xì)胞呈低分化39例，中高分化73例。按照國際抗癌聯(lián)盟(Union for International Cancer Control，UICC)第八版TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，其中Ⅰ/Ⅱ期患者42例，Ⅲ/Ⅳ期患者70例；Child-Pugh A/B級84例，C級28例；另選擇同期在我院診治的乙型肝炎肝硬化患者96例，男性55例，女性41例；平均年齡為(50.7±4.9)歲。慢性乙型肝炎患者82例，男性50例，女性32例；平均年齡為(41.6±4.9)歲。同期健康體檢者84例，男性44例，女性40例；平均年齡為(51.6±5.1)歲。

1.2 治療方法 按照2011年發(fā)布的《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》的原則，采用經(jīng)導(dǎo)管肝動脈化療栓塞術(shù)(TACE)治療，主要藥物包括奧沙利鉑聯(lián)合多西他賽。每例患者接受TACE 1～3次，間隔1個月。

1.3 血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平測定 采用ELISA法檢測(美國貝克曼公司試劑)。

2 結(jié)果

2.1 各組血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平比較 HCC患者血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平顯著高于乙型肝炎肝硬化、慢性乙型肝炎和健康人(P<0.05，表1)。

表1 各組血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平比較

2.2 不同預(yù)后患者血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平比較 至隨訪結(jié)束，本組112例HCC患者死亡57例。入組時，死亡組患者血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平顯著高于生存組(P<0.05，表2)。

2.3 影響HCC患者3 a生存率的相關(guān)單因素分析 對生存與死亡的HCC患者進(jìn)行單因素分析結(jié)果表明，肝外轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度、Child-Pugh分級、TNM分期、血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平均影響患者3 a生存(P<0.05，表3)。

表3 影響HCC患者3 a生存率(%)的單因素分析

2.4 影響HCC患者生存的多元Logistic回歸分析 經(jīng)多因素Logistic回歸分析表明，肝外轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度低、Child-Pugh分級為C級、TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ期、血清HSP90α≥69.3 ng/mL或血清PIVKA-Ⅱ≥892.4 mAU/mL為影響HCC患者3 a生存率的獨立危險因素(P<0.05，表4)。

表4 影響HCC患者3 a生存率的多元Logistic回歸分析

2.5 應(yīng)用血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ單獨或聯(lián)合預(yù)測HCC患者生存率的ROC曲線分析 分別繪制血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平單獨或聯(lián)合預(yù)測HCC患者3 a生存率的ROC曲線，確定最佳截斷點分別為69.3 ng/mL和892.4 mAU/mL。兩者聯(lián)合預(yù)測的AUC為0.929，顯著高于血清HSP90α或PIVKA-Ⅱ分別單獨預(yù)測的0.814和0.836(P<0.05，圖1，表5)。

圖1 血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ單獨或聯(lián)合預(yù)測HCC患者3 a生存率的ROC曲線

表5 血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ單獨或聯(lián)合預(yù)測HCC患者3 a生存率效能比較

3 討論

HSP90α為人體重要的生物活性物質(zhì)，與機(jī)體的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和激素應(yīng)答等生理活動密切相關(guān)[5-7]。研究證實，與正常細(xì)胞比，癌細(xì)胞HSP90α表達(dá)和活性較高，后者通過與病變蛋白的特異性結(jié)合能阻礙細(xì)胞凋亡，加速細(xì)胞增殖速度，誘發(fā)癌細(xì)胞的形成[8]。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)HSP90α含量過高時，可分泌至胞外，與癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲密切相關(guān)，其表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞分化程度存在顯著的正相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)[9-10]，利用血清HSP90α預(yù)測HCC患者預(yù)后，其AUC值達(dá)到了0.995，其靈敏度和特異度分別達(dá)到了95.6%和97.8%。

近年來，研究發(fā)現(xiàn)PIVKA-Ⅱ可作為檢測HCC的標(biāo)志物。檢測血清PIVKA-Ⅱ可作為肝癌的早期篩查指標(biāo)，可以提高診斷率。PIVKA-Ⅱ主要由肝臟細(xì)胞合成，并可分泌至胞外進(jìn)入血漿，其血清含量的高低與腫瘤出現(xiàn)時間密切相關(guān)[11]，協(xié)助診斷HCC的特異性和敏感性均較高[12]。PIVKA-Ⅱ?qū)儆谀冈囊环N前體蛋白，具有與凝血酶原相似的理化特性，但缺少其相關(guān)的生物學(xué)活性。細(xì)胞對凝血酶原前體的合成異常引起維生素K缺乏，導(dǎo)致PIVKA-Ⅱ的產(chǎn)生[13]。研究證實，血清PIVKA-Ⅱ水平與肝細(xì)胞癌臨床特征密切相關(guān)。因此，血清PIVKA-Ⅱ水平可反映HCC患者腫瘤的嚴(yán)重程度[14]。分析其原因，可能是癌細(xì)胞通過影響機(jī)體凝血功能，導(dǎo)致凝血酶表達(dá)異常，而PIVKA-Ⅱ為凝血功能異常產(chǎn)生的蛋白，因此癌癥患者血清PIVKA-Ⅱ水平顯著高于正常人。本研究HCC患者血清PIVKA-Ⅱ水平比正常人顯著升高(P<0.05)，與上述結(jié)論相符。

有研究表明[15]，原發(fā)性肝癌患者血清PIVKA-Ⅱ水平與肝硬化患者、慢性乙型肝炎患者和正常人存在顯著性差異。有研究者[16]發(fā)現(xiàn)，肝硬化與慢性肝炎患者血清HSP90α水平存在顯著性差異，而HCC患者血清HSP90α水平最高。本研究結(jié)果表明，與其他相關(guān)肝臟疾病患者比，HCC患者血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ水平顯著升高(P<0.05)。一般認(rèn)為，癌細(xì)胞大量增殖引起HSP90α表達(dá)量增加，大量的HSP90α進(jìn)入血漿導(dǎo)致血漿HSP90α水平異常。同時，癌細(xì)胞增殖引起機(jī)體凝血酶原前體合成異常導(dǎo)致PIVKA-Ⅱ水平升高。有研究者[17]聯(lián)合檢測血清AFP和PIVKA-Ⅱ，發(fā)現(xiàn)應(yīng)用兩種指標(biāo)聯(lián)合診斷原發(fā)性肝癌的AUC為0.914，顯著高于應(yīng)用血清AFP或PIVKA-Ⅱ的0.805和0.762，表明兩者聯(lián)合對于HCC的診斷具有較高的價值。

本組112例HCC患者在TACE治療后3 a生存率為49.1%。應(yīng)用血清HSP90α和PIVKA-Ⅱ或兩者聯(lián)合預(yù)測生存的AUC分別為0.814、0.836或0.929，與以往研究報道[18]類似。另有研究表明[19]，TNM分期、肝外轉(zhuǎn)移、血清HPS90α水平和腫瘤細(xì)胞分化程度為影響HCC患者預(yù)后的因素。本研究除了分析這些相關(guān)因素外，利用ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，血清HSP90α≥69.3 ng/mL或PIVKA-Ⅱ≥892.4mAU/mL為影響預(yù)后的獨立危險因素，此結(jié)論與以往研究相似[20]。