高巍朕，王天祥，張曉鵬，柳宏志

(1.佳木斯大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154002；2.大慶油田總醫(yī)院口腔外科，黑龍江 大慶 163001)

口腔鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)是口腔科中最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率逐年增高。腫瘤標(biāo)志物的檢測對(duì)其發(fā)生發(fā)展及預(yù)后判定有一定的作用[1, 2]。有研究證明[3]，程序性死亡分子配體1(PD-L1)與程序性死亡分子1(PD-1)結(jié)合后產(chǎn)生免疫抑制，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。但OSCC患者癌組織中PD-L1表達(dá)水平與臨床病理特征之間的關(guān)系尚不清楚。本研究旨在檢測OSCC組織中的PD-L1的表達(dá)水平，并探討其生物學(xué)意義，為OSCC新型治療方法提供科學(xué)依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院病理科2014-06～2015-01存檔的OSCC患者病理組織石蠟標(biāo)本89例作為實(shí)驗(yàn)組，納入標(biāo)準(zhǔn)：首次接受手術(shù)治療者；術(shù)前未經(jīng)過化療或其他生物治療，經(jīng)常規(guī)影像學(xué)檢查并術(shù)后確診為OSCC患者；無免疫系統(tǒng)疾病者。本研究經(jīng)過我院倫理委員會(huì)同意。其中男47例，女42例；平均(55.3±1.5)歲；腫瘤細(xì)胞分化程度：高分化44例，中低分化45例；臨床分期：Ⅰ+Ⅱ期46例，Ⅲ+Ⅳ期43例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移47例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例。另選取正常口腔黏膜組織標(biāo)本10例作為對(duì)照組。

1.2 方法

將石蠟塊用常規(guī)方法制成病理切片，并脫蠟脫水進(jìn)行微波修復(fù)抗原，然后采用免疫組化法檢測組織中PD-L1表達(dá)率。具體步驟按試劑盒說明書進(jìn)行操作：加一抗：以抗人PD-L1單克隆抗體為一抗，用5% PBS脫脂牛奶稀釋一抗成工作濃度，4℃孵育切片過夜，PBS室溫洗滌3次；加二抗：用5% PBS脫脂牛奶稀釋羊抗鼠酶標(biāo)二抗成工作濃度，室溫孵育切片30 min，PBS室溫洗滌3次；顯色：用DAB試劑顯色，蘇木精輕度復(fù)染。同時(shí)設(shè)空白對(duì)照和陽性對(duì)照，以PBS代替一抗作為空白對(duì)照，用已知PD-L1蛋白表達(dá)陽性的結(jié)腸癌組織石蠟切片作為陽性對(duì)照。顯微鏡下用細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)細(xì)胞膜上和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有陽性染色的細(xì)胞個(gè)數(shù)進(jìn)行組織學(xué)分析PD-L1的表達(dá)。每張切片選取癌細(xì)胞數(shù)較多的5個(gè)高倍鏡視野(×400)，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。

1.3 觀察指標(biāo)

PD-L1陽性表達(dá)判定：染色強(qiáng)度分級(jí)如下：無著色記為0分，淡黃色記為1分，棕黃色記為2分，棕褐色記為3分；陽性細(xì)胞百分比分級(jí)為：陽性細(xì)胞≤10%為1分，10%<陽性細(xì)胞數(shù)<50%為2分，陽性細(xì)胞>50%為3分。兩項(xiàng)得分相乘≥3為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以n(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PD-L1在癌組織不同部位表達(dá)情況

免疫組化結(jié)果顯示，PD-L1陽性表達(dá)為細(xì)胞中染色呈棕黃色，在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分布較多，且PD-L1主要表達(dá)于癌細(xì)胞及癌間質(zhì)浸潤淋巴細(xì)胞中。

2.2 PD-L1陽性表達(dá)率情況

PD-L1在癌組織中的陽性表達(dá)率為87.64%(78/89)，顯著高于正常組織的0%(0/10)(χ2=41.316，P<0.01)；PD-L1在癌細(xì)胞上的陽性表達(dá)率為76.40%(68/89)，癌間質(zhì)淋巴細(xì)胞上的陽性表達(dá)率為57.30%(51/89)，差異顯著(χ2=7.327，P<0.01)。

2.3 PD-L1表達(dá)與OSCC患者臨床病理特征的關(guān)系分析

PD-L1的表達(dá)與OSCC患者的年齡、病灶大小無關(guān)(P>0.05)，但與OSCC臨床分期、腫瘤分化程度及淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)。臨床分期Ⅲ～Ⅳ期患者的PD-L1的陽性表達(dá)率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；腫瘤細(xì)胞分化程度高者PD-L1陽性表達(dá)率高于中低分化者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；淋巴轉(zhuǎn)移患者PD-L1的陽性表達(dá)率高于無淋巴轉(zhuǎn)移患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 PD-L1表達(dá)與OSCC患者臨床病理特征的關(guān)系(例)

3 討論

OSCC的治療主要是手術(shù)治療，以放化療為輔助治療手段。放化療可以控制患者病灶的轉(zhuǎn)移，但隨后會(huì)出現(xiàn)一系列并發(fā)癥，影響患者生活質(zhì)量。因此，腫瘤靶向治療成為研究者目前研究的熱點(diǎn)。機(jī)體抗腫瘤作用主要通過細(xì)胞免疫來實(shí)現(xiàn)，而T淋巴細(xì)胞在細(xì)胞免疫應(yīng)答中起主要作用。PD-L1與其受體PD-1結(jié)合后能抑制T細(xì)胞活化并誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡，從而介導(dǎo)腫瘤免疫逃逸作用[4]。近年來，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌、肝癌、黑色素瘤患者體內(nèi)PD-1及PD-L1表達(dá)量上升，并與疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)[5, 6]。本研究結(jié)果顯示，PD-L1主要表達(dá)在癌細(xì)胞及癌間質(zhì)淋巴細(xì)胞上。OSCC患者癌組織中PD-L1的陽性表達(dá)率顯著高于正常組織；癌組織中PD-L1表達(dá)與臨床分期、腫瘤細(xì)胞分化程度及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移相關(guān)，與患者年齡，病灶大小無關(guān)，說明PD-L1與OSCC的臨床病理特征有一定相關(guān)性，本研究樣本數(shù)量有限，希望進(jìn)一步的研究中尋找到更多的實(shí)驗(yàn)樣本，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到進(jìn)一步的確證。綜上所述，PD-L1分子與OSCC的發(fā)生發(fā)展有一定相關(guān)性，其有望成為OSCC免疫治療的新靶點(diǎn)。